一种检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物、试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术涉及一种检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物、试剂盒及检测方法。所述引物探针组合物包括检测禾谷镰孢菌的半乳糖氧化酶前体物基因1～500bp序列的正向引物、反向引物和探针。所述引物探针组合物具备较高的特异性和灵敏度，能够实现对禾谷镰孢菌的半乳糖氧化酶基因的特异性扩增，且具备高灵敏度；所述检测方法既具备高特异性和灵敏度，又便于操作，能很好地满足对禾谷镰孢菌进行现场检测的要求。

【技术实现步骤摘要】
一种检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物、试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物
，涉及一种检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物、试剂盒及检测方法。
技术介绍
玉米是全球也是中国第一大作物，2019年我国玉米产量为26077万吨，占粮食总产量的39.28％。由禾谷镰孢菌(Fusariumgraminearum)引起的玉米穗腐病(maizeearrot)是玉米的主要穗部病害，不仅降低玉米产量，而且影响种子品质。除此之外，禾谷镰孢菌还能产生多种有毒的次生代谢产物(单端孢霉烯族化合物)，如脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)等。DON能引起动物的呕吐，且对人体有一定的危害作用，被国际癌症研究机构认定为三类致癌物。因此，检测饲用玉米中的禾谷镰孢菌对保护人畜安全至关重要。传统的镰孢菌分类鉴定主要基于形态学特征，根据菌落形态、分生孢子、分生孢子梗和分生孢子座等进行区分与鉴定，其在禾谷镰孢菌检测中发挥了重要作用，然而这种方法费时费力，要求操作者具备专业的镰孢菌形态学鉴定知识和丰富的实际经验；随着分子技术的发展，聚合酶链式反应(PCR)和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括检测禾谷镰孢菌的半乳糖氧化酶前体基因1～500bp序列的正向引物、反向引物和探针。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括检测禾谷镰孢菌的半乳糖氧化酶前体基因1～500bp序列的正向引物、反向引物和探针。


2.根据权利要求1所述的引物探针组合物，其特征在于，所述正向引物包括SEQIDNo.1所示的核苷酸序列；
优选地，所述反向引物包括SEQIDNo.2所示的核苷酸序列；
优选地，所述探针包括SEQIDNo.3所示的核苷酸序列；
优选地，所述反向引物的5’端修饰有生物素；
优选地，所述探针的5’端修饰有荧光基团；
优选地，所述荧光基团包括FAM；
优选地，所述探针的3’端修饰有间臂；
优选地，所述间臂包括C3-spacer；
优选地，所述探针的序列中距5’端31～36bp处修饰有四氢呋喃。


3.一种检测禾谷镰孢菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物；
优选地，所述试剂盒还包括重组酶聚合酶扩增酶组合物；
优选地，所述重组酶聚合酶扩增酶组合物包括recA重组酶、单链DNA结合蛋白、链置换DNA聚合酶和核酸内切酶IV；
优选地，所述试剂盒还包括缓冲液、无核酸酶水或醋酸镁中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述缓冲液包括补液缓冲液；
优选地，所述试剂盒还包括侧流层析试纸条。


4.如权利要求1或2所述的检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物和/或权利要求3所述的检测禾谷镰孢菌的试剂盒在检测禾谷镰孢菌中的应用。


5.一种检测禾谷镰孢菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)提取待检测样品的基因组作为反应模板，采用权利要求1或2所述的检测禾谷镰孢菌的引物探针组合物进行重组酶聚合酶扩增，得到扩增产物；
(2)使用侧流层析试纸条检测所述扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭维，梁晓艳，张君，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11