构建原位原发肺癌动物模型的方法技术

本发明专利技术公开了一种原位原发的肺癌肿瘤模型制备方法，属于肿瘤动物模型领域。本发明专利技术通过将小鼠肺细胞以特定培养基培养成类器官，再将类器官进行基因编辑，注射回小鼠肺，使其发展成肿瘤。本发明专利技术的方法相比基因工程肿瘤动物模型耗时短，成瘤率高；相比移植瘤动物模型，具有肿瘤发生和发展的体内微环境，更接近肺癌最真实的状态。

【技术实现步骤摘要】
构建原位原发肺癌动物模型的方法
本专利技术属于肿瘤动物模型领域。
技术介绍
肺癌是严重影响人类健康的恶性肿瘤，主要分为非小细胞肺癌(NSCLC,Non-smallcelllungcancer)和小细胞肺癌(SCLC,Smallcelllungcancer)，肺癌发病率及死亡率均居所有癌症的首位。肺癌细胞模型是研究肺癌机制和药物治疗肺癌活性的基础模型，但肺癌细胞模型通常经历了很多代次培养，遗传信息发生偏移，丢失或者增加了某些特定染色体片段。正常组织或者肿瘤都有强烈的异质性，种类单一的细胞系与体内状态差异极大，而且对于某些药物的抗性，基因的影响都不能反应病人的真实情况。相比之下，动物模型更能接近肺癌的真实情况，但是，现有的肺癌动物模型存在各种各样的问题。皮下移植模型，需要在免疫缺陷鼠皮下移植大量的肿瘤细胞系，细胞系本身就很难表征病人肿瘤特征，皮下肿瘤更是不能反应肺组织生态。人源异种移植瘤模型(PDX，patientderivedXenograftmodel)除了移植在皮下的弊端以外，由于病人本身的差异，标本取材的差异，导致该本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肺类器官培养方法，其特征在于，包括如下步骤：/n将肺细胞Matrigel混合，待Matrigel凝固后，加入类器官培养基进行培养，即可：/n所述培养基是DMEM/F12，加上如下添加剂得到：/n

【技术特征摘要】
1.一种肺类器官培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
将肺细胞Matrigel混合，待Matrigel凝固后，加入类器官培养基进行培养，即可：
所述培养基是DMEM/F12，加上如下添加剂得到：








成分
终浓度


B27
50±5倍浓度稀释


N-acetylcysteine
1±0.1mM


EGF
50±5ng/mL


Noggin
100±10ng/mL


R-spondin1
250±25ng/mL


A83-01
200±20nM


FGF10
500±50ng/mL


Nicotinamide
10±1mM


Y-27632
10±1uM


WNT3a
25±2.5ng/mL


Glutamax
100±10倍浓度稀释


N2
100±10倍浓度稀释


Gastrin
1±0.1nM






。


2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于：
所述类器官培养基的添加剂为：








3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
它还包括肺细胞的分离步骤：
a.使用终浓度2±1mg/mL胶原酶I和1±0.5mg/mL胶原酶IV消化肺组织块；
b.孔隙大小为100±10μm的筛网过滤获得单个细胞，培养基洗涤、离心以终止酶消化反应；
优选地，步骤b所述培养基是DME...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈崇，纳飞飞，刘玉，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51