一种沙雷氏菌LE及其应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物筛选技术领域。本发明专利技术提供了一种沙雷氏菌LE及其应用，所述沙雷氏菌LE拉丁文为Serratiaquinivorans。本申请的沙雷氏菌LE能够溶解无机磷，将难溶性无机磷转化为植物可以利用的可溶性磷，提高植物对土壤磷的利用。因此，在农业生产中可以通过这些解磷细菌来提高作物的磷利用效率，从而减少对化学磷肥的依赖，实现磷肥高效和环境友好的农业绿色发展。

【技术实现步骤摘要】
一种沙雷氏菌LE及其应用
本专利技术涉及微生物筛选
，尤其涉及一种沙雷氏菌LE及其应用。
技术介绍
菌体直杆状，直径0.5～0.8μm，长0.9～2.0μm，端圆。符合肠杆菌科的一般描述。通常周生鞭毛运动。兼性厌氧。菌落大多数不透明，有些虹彩；白色、粉红或红色。几乎所有的菌株能在10～36℃、pH5～9、含有0％～4％(w/v)的NaCl中生长。接触酶反应强阳性，发酵D-葡萄糖和其他糖类产酸，有的产气。发酵并利用麦芽糖、甘露醇和海藻糖作为惟一碳源。沙雷氏菌对人体有害，以防治的研究为主，到目前为止还未见报道将沙雷氏菌用于溶解无机磷方面的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种沙雷氏菌LE及其应用，将难溶性无机磷转化为植物可以利用的可溶性磷，提高植物对土壤磷的利用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一株沙雷氏菌LE，所述沙雷氏菌LE拉丁文为Serratiaquinivorans。本专利技术还提供了一株沙雷氏菌LE在溶解无机磷方面的应用。作为优选，所述无机磷为磷酸三钙。本专利技术还提供了一株沙雷氏菌LE的解磷能力的定量分析方法，包含如下步骤：(1)将沙雷氏菌LE接种于LB液体培养基，震荡培养18～22h；(2)震荡培养后的培养基离心，沉淀即为沙雷氏菌LE菌体；(3)清洗沙雷氏菌LE菌体，定容，得稀释液；(4)取稀释液和无机磷液体培养基混合，震荡培养10～14h，离心，测定上清液中速效磷的含量。作为优选，所述步骤(1)和步骤(4)中的震荡培养条件为36～38℃、160～200r/min。作为优选，所述步骤(2)中的震荡培养后的培养基OD值为0.55～0.65。作为优选，所述步骤(2)中的离心的条件为4000～6000r/min离心2～4min。作为优选，所述步骤(3)中洗清、定容时采用0.8～0.9％NaCl溶液。作为优选，所述步骤(4)中稀释液的使用量为1～2mL。作为优选，所述步骤(4)中离心的条件为10000～14000r/min离心1～3min。本专利技术提供了一种沙雷氏菌LE及其应用，所述沙雷氏菌LE拉丁文为Serratiaquinivorans。本申请的沙雷氏菌LE能够溶解无机磷，将难溶性无机磷转化为植物可以利用的可溶性磷，提高植物对土壤磷的利用。因此，在农业生产中可以通过这些解磷细菌来提高作物的磷利用效率，从而减少对化学磷肥的依赖，实现磷肥高效和环境友好的农业绿色发展。附图说明图1为沙雷氏菌LE在无机磷培养基上形成的溶磷圈；图2为沙雷氏菌LE的基因组完成图。具体实施方式本专利技术提供了一株沙雷氏菌LE，所述沙雷氏菌LE拉丁文为Serratiaquinivorans。本专利技术还提供了一株沙雷氏菌LE在溶解无机磷方面的应用。在本专利技术中，所述无机磷优选为磷酸三钙。本专利技术还提供了一株沙雷氏菌LE的解磷能力的定量分析方法，包含如下步骤：(1)将1mL，107cfu/mL的沙雷氏菌LE接种于LB液体培养基，震荡培养18～22h；(2)震荡培养后的培养基离心，沉淀即为沙雷氏菌LE菌体；(3)清洗沙雷氏菌LE菌体，定容，得稀释液；(4)取稀释液和无机磷液体培养基混合，震荡培养10～14h，离心，测定上清液中速效磷的含量。在本专利技术中，所述步骤(1)和步骤(4)中的震荡培养的温度优选为36～38℃，进一步优选为37℃。在本专利技术中，所述步骤(1)和步骤(4)中的震荡培养的转速优选为160～200r/min，进一步优选为180r/min。在本专利技术中，所述步骤(2)中的震荡培养后的培养基OD值优选为0.55～0.65，进一步优选为0.6。在本专利技术中，所述步骤(2)中的离心的转速优选为4000～6000r/min，进一步优选为5000r/min。在本专利技术中，所述步骤(2)中的离心的时间优选为2～4min，进一步优选为3min。在本专利技术中，所述步骤(3)中洗清、定容时优选采用0.8～0.9％NaCl溶液，进一步优选为0.85％NaCl溶液。在本专利技术中，所述步骤(3)中洗清次数优选为1～5次，进一步优选为3次。在本专利技术中，所述步骤(3)中定容时优选定容至10～20mL，进一步优选为15mL。在本专利技术中，所述步骤(4)中稀释液的使用量优选为1～2mL，进一步优选为1.5mL。在本专利技术中，所述步骤(4)中离心的转速优选为10000～14000r/min，进一步优选为12000r/min。本专利技术中，所述步骤(4)中离心的时间优选为1～3min，进一步优选为2min。本专利技术中，所述步骤(4)中测定上清液中速效磷的含量时上清液的使用量优选为0.5～1.5mL，进一步优选为1mL。本专利技术中，所述步骤(4)中测定上清液中速效磷的含量时优选采用钼锑抗比色法。下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1根际土壤的采集在河南省新乡市红旗区洪门镇原堤村试验田采集小麦根际土壤，采用五点取样法，去除表层可见的动植物残体，深挖到20cm，将根系和土壤一同装入无菌袋中，放于4℃冰盒内并带回实验室。到实验室后将根系取出，轻轻抖掉附于根上的土壤，然后用毛刷将附着在根系上的土壤刷下并作为根际土壤，最后将五个样点的根际土壤混匀并过筛(1mm)，采用四分法收集约100g的根际土壤放入样品采集袋中，置于4℃冰箱中保存。实施例2培养基选择以国际植物研究所磷酸盐生长培养基(NBRIP)作为选择性无机磷培养基。实施例3解磷细菌的分离和纯化采用选择性无机磷培养基和平板稀释法对小麦根际土壤中的解磷细菌进行分离筛选。具体操作如下：在超净工作台中称取新鲜土壤样品5g于无菌离心管中，用无菌水定容至50mL，振荡20min，然后按10倍梯度依次进行稀释，用移液枪吸取10-6～10-4三个稀释度样品各0.1mL，均匀涂布于无机磷固体培养基上，每个梯度重复三次，最后在28℃恒温箱中倒置培养并观察平板中菌落生长状况及透明圈的产生情况。用接种环挑取具有溶磷圈且未发生重叠的菌落，在新的无机磷固体培养基上按照Z字形划线纯化，28℃恒温箱中倒置培养，直至得到纯菌株，然后置于4℃冰箱中保存。实施例4菌株鉴定(1)细菌基因组DNA的提取采用AxyPrep细菌基因组DNA小量制备试剂盒(Axygen，USA)提取细菌的基因组DNA，具体步骤按照操作说明进行。(2)细菌基因组PCR扩增利用细菌通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3’)对基因组DNA进行扩增。(3)PCR产物的纯化PCR产物用AxyPrep本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株沙雷氏菌LE，其特征在于，所述沙雷氏菌LE拉丁文为Serratia quinivorans。/n

【技术特征摘要】
1.一株沙雷氏菌LE，其特征在于，所述沙雷氏菌LE拉丁文为Serratiaquinivorans。


2.权利要求1所述的一株沙雷氏菌LE在溶解无机磷方面的应用。


3.根据权利要求2所述的一株沙雷氏菌LE在溶解无机磷方面的应用，其特征在于，所述无机磷为磷酸三钙。


4.权利要求1所述的一株沙雷氏菌LE的解磷能力的定量分析方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)将沙雷氏菌LE接种于LB液体培养基，震荡培养18～22h；
(2)震荡培养后的培养基离心，沉淀即为沙雷氏菌LE菌体；
(3)清洗沙雷氏菌LE菌体，定容，得稀释液；
(4)取稀释液和无机磷液体培养基混合，震荡培养10～14h，离心，测定上清液中速效磷的含量。


5.根据权利要求4所述的一株沙雷氏菌LE的解磷能力的定量分析方法，其特征在于，所述步骤(1)和步骤(4)中的震荡培养条件为36～38℃、...

【专利技术属性】
技术研发人员：王菲，张影，申长卫，李航，孙亚钦，李亚菲，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：河南;41