一种或多种目标蛋白或肽纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种或多种目标蛋白或肽的纯化方法，涉及生物技术领域。本发明专利技术的纯化方法利用可与DNA共价结合的HUH酶作为标签来纯化蛋白，纯化效率高，获得的纯化蛋白纯度高；而且通过不同的HUH酶标签，可以实现同时纯化多种蛋白，实现多目标蛋白纯化，纯化方法简单，条件温和。

【技术实现步骤摘要】
一种或多种目标蛋白或肽纯化方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种或多种目标蛋白或肽的纯化方法。
技术介绍
生物技术行业中，通常蛋白是通过细胞培养产生，采用通过插入含有蛋白编码基因的重组质粒而工程化为生产目的蛋白的哺乳动物或细菌细胞系。细胞在表达靶蛋白的同时也会表达很多其它的蛋白，将所需的蛋白与其它蛋白分离和纯化以达到足以用作人治疗剂的纯度水平是非常重要的环节，大规模且经济地纯化蛋白对于生物技术产业来说，已成为一个日益重要的问题。亲和层析分离技术(AffinityChromatography)是一种基于生物分子间的特异性结合而开发的蛋白纯化方法，生物分子间的特异性包括抗原抗体的识别、生物素亲和素的结合、辅酶与酶的亲和、金属螯合吸附、多核苷酸和核酸配体等。亲和层析有着结合特异性高、纯化步骤简便、纯化条件温和等优点，使得该技术在高纯度蛋白纯化、蛋白质结构功能研究上应用广泛。现有常用的亲和纯化方法有：His标签纯化(His-tag，Nature.1975Dec18；258(5536):598-9)，Strep标签纯化(Strep-tag本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种或多种目标蛋白或肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(a)一种目标蛋白或肽与一种HUH酶融合，和/或多种目标蛋白或肽分别与不同的HUH酶融合，形成融合蛋白；/n(b)融合蛋白中加入DNA固定相，使DNA与融合蛋白结合；所述DNA为不同HUH酶特异性识别核酸序列；/n(c)融合蛋白从DNA固定相上分离，再将目标蛋白或肽与HUH酶分离，获得纯化的目标蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种或多种目标蛋白或肽的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)一种目标蛋白或肽与一种HUH酶融合，和/或多种目标蛋白或肽分别与不同的HUH酶融合，形成融合蛋白；
(b)融合蛋白中加入DNA固定相，使DNA与融合蛋白结合；所述DNA为不同HUH酶特异性识别核酸序列；
(c)融合蛋白从DNA固定相上分离，再将目标蛋白或肽与HUH酶分离，获得纯化的目标蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HUH酶选自A*、Trwc、TYLCV-C1核酸内切酶中的至少一种。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述A*酶特异性识别核酸序列为5’-n-CAACTTGA-n-3’，和/或；
所述Trwc酶特异性识别核酸序列为5’-n-TGCGTATTGTCT-n-3’(SEQIDNO：7)，和/或；
所述TYLCV-C1酶特异性识别核酸序列为5’-n-TATTAC-n-3’；
其中，所述n代表一个或多个核苷酸碱基；优选地，所述n为0-30个核苷酸碱基。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述目标蛋白选自GFP、ECFP、Venus、SPG、POX中的至少一种。


5.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述目标蛋白或肽与HUH酶直接连接或通过柔性连接肽连接；优选地，所述目标蛋白或肽与HUH酶通过柔性连接肽连接形成融合蛋白。


6.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述DNA固定...

【专利技术属性】
技术研发人员：门冬，张先恩，周昆，曹姗姗，周娟，
申请(专利权)人：中国科学院武汉病毒研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42