本发明专利技术涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一个柑橘bZIP转录因子的应用。本发明专利技术首次克隆了柑橘中的一个bZIP转录因子，并构建该基因的超表达载体，通过农杆菌介导的遗传转化方式将其转入到烟草和枳中，获得了转基因植株，经过表型观察和统计发现，转基因烟草和枳都有早花表型，表明本发明专利技术所克隆的bZIP转录因子具有早花功能，可以明显缩短童期。该基因的发现，为柑橘成花育种、缩短柑橘等多年生木本植物童期提供了新的遗传资源，该遗传资源的开发利用对于降低工业生产成本具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
柑橘bZIP转录因子在缩短植物童期中的应用
本专利技术涉及植物基因工程
，具体涉及一个柑橘bZIP转录因子在缩短植物童期中的应用。
技术介绍
柑橘是世界第一大水果，在我国园艺经济中具有十分重要的地位，我国柑橘的栽培面积和产量居世界首位。成花转变是果实形成的基础，柑橘童期较长，是柑橘育种的重要障碍之一，而创制短童期的新种质一直是柑橘育种的重要目标，柑橘成花转变机制的解析将为缩短童期提供重要的理论基础。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一个编码柑橘bZIP转录因子的基因在缩短植物童期中的应用，该基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。其中，所述基因是如下(1)至(2)中任一项所述的DNA分子：(1)其核苷酸序列为SEQIDNO:2所示的DNA分子；(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码权利要求1中所述蛋白的DNA分子。本专利技术的目的之二在于提供一种缩短植物童期的方法，所述方法包括上调编码柑橘bZIP转录因子基因的表达，所述编码柑橘bZIP转录因子的基因为权利要求2所述的基因。具体地，所述方法包括将bZIP转录因子转入植物细胞、组织或器官，获得转入bZIP转录因子的植物细胞、组织或器官。具体地，所述bZIP转录因子以包含在表达载体及农杆菌中的方式转入植物细胞、组织或器官。本专利技术的目的之三在于提供一种含有bZIP转录因子的表达载体或农杆菌在缩短植物童期中的应用，其特征在于，所述bZIP转录因子为上述的基因。其中，所述表达载体为PBI121载体。其中，所述植物为烟草或枳。本专利技术首次克隆了柑橘中的一个bZIP转录因子，并构建该基因的超表达载体，通过农杆菌介导的遗传转化方式将其转入到烟草和枳中，获得了转基因植株，经过表型观察和统计发现，转基因烟草和枳都有早花表型，表明本专利技术所克隆的bZIP转录因子具有早花功能，可以明显缩短童期。该基因的发现，为柑橘成花育种、缩短柑橘等多年生木本植物童期提供了新的遗传资源，该遗传资源的开发利用对于降低工业生产成本具有重要意义。附图说明图1为实施例2中转入了编码柑橘bZIP转录因子的烟草开花时间及叶片数统计结果，其中A为成花天数，B为叶片数；图2为实施例2中转入了编码柑橘bZIP转录因子的烟草开花情况；图3为实施例3中转入了编码柑橘bZIP转录因子的枳的开花情况。具体实施方式以下结合具体实施方式对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。烟草遗传转化中所用培养基类型及配方：MS共培养培养基：MS培养基+AS(乙酰丁香酮20mg/L)；MS筛选培养培养基：MS培养基+6-BA(2mg/L)+NAA(0.3mg/L)+Kan(50mg/L)+Cef(400mg/L)；MS生根培养基：MT培养基+Kan(50mg/L)+Cef(400mg/L)。枳遗传转化中所用培养基类型及配方：MT基本培养基：微量、铁盐、甘氨酸、肌醇、VB、VC各10mL，大量元素100mL，蔗糖40g/L，琼脂8g/L；柑橘试管播种培养基:MT+蔗糖25g/L+Agar8.0g/L；悬浮培养基(LM):MT+麦芽浸粉0.5g/L+谷氨酰胺1.5g/L；生芽培养基(SY):MT+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+KT0.5mg/L+Agar8g/L；共培养培养基(CM):SY+AS50mg/L+Agar8g/L；筛选培养基(SM):SY+Cef400mg/L+Km50mg/L+Agar8g/L；生根培养基(RIM):L/2MT+NAA0.5mg/L+IBA0.1mg/L+活性炭0.5g/L+Agar8g/L+Km25mg/L+Cef400mg/L。实施例1基因的分离与克隆1.1编码柑橘bZIP转录因子基因的DNA全长扩增以柑橘DNA为模板，采用高保真酶进行扩增，扩增引物序列为：5’-ATGTGGCCATCTCCAGCTAGAAACA-3’和5’-TTATTCTTACTTCTCAAAATGGAGC-3’。扩增反应体系为：ddH2O18μL、2×PhantaMaxBuffer25μL、Senseprimer2μL、Antisenseprimer2μL、dNTPmix1μL、MaxSuper-FideLityDNAPoLymerase1μL、TempLe(DNA)1μL、TotaL50μL。扩增反应程序为：95℃预变性3min，95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸45s、35个循环；72℃延伸10min，16℃降温10min。1.2连接克隆载体采用上海捷瑞生物有限公司纯化回收试剂盒对扩增得到的产物进行纯化回收，将回收的目的片段连接到pEASY-BLunt载体(购自北京全式金生物技术有限公司)上，其连接体系为：回收产物0.5-4μL(按照1kb20ng的量计算)，但最多不超过4μL，载体加入1μL，用水补齐到5μL。在25℃条件下连接，连接时间为0.1-1Kb(含1Kb)为5-10min；1-2Kb(含2Kb)为10-15min；2-3Kb(含3Kb)为15-20min。1.3转化大肠杆菌将连接好的连接产物转入大肠杆菌DH5α感受态中，具体操作步骤如下：a、连接结束前5分钟从-80℃冰箱中取出大肠感受态DH5a，在冰上解冻；b、将连接产物全部加入感受态细胞中，并用枪头轻轻吸打混匀，置于冰上30min；c、在混匀仪中42℃热激1min30s，热击完后立即置于冰上2min；d、在感受态细胞中加入400μL的空白LB液体培养基，在37℃摇床上220r/min摇菌1h；e、摇完后6000r/min，离心2min，吸出上清液留100μL菌液，吸打混匀，涂布于km的LB培养基上，晾干封口，37℃恒温箱中培养过夜；f、挑斑进行PCR检测，将检测的阳性克隆送公司测序，然后对序列进行比对分析。编码柑橘bZIP转录因子的基因序列分析结果如下：该基因DNA长度为1022bp，碱基序列如SEQIDNO:2所示，包含3个外显子，2个内含子，开放阅读框为774bp，编码257个氨基酸，氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。编码的蛋白质等电点为9.514，预测的分子量为28.12kDa。1.4超表达载体的构建以测序正确的质粒为模板，设计重组引物将编码柑橘bZIP转录因子的基因全长扩增并插入至pBI121载体上的BamHⅠ和SacⅠ两个酶切位点中间，引物设计如下：与童期相关的-pBI121-F:5’-ACGGGGGACTCTAGAGGATCCATGTGGCCATCTCCAGCTAGA-3’；与童期相关的-pBI121-R:5’-CGATCGGGGAAATTCGAGCTCTTATTCTTACTTCTCAAAAT-3本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.编码柑橘bZIP转录因子的基因在缩短植物童期中的应用，其特征在于，该基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。/n
【技术特征摘要】
1.编码柑橘bZIP转录因子的基因在缩短植物童期中的应用，其特征在于，该基因编码的蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。
2.根据权利要求1所述的编码柑橘bZIP转录因子的基因在缩短植物童期中的应用，其特征在于，所述基因是如下(1)至(2)中任一项所述的DNA分子：
(1)其核苷酸序列为SEQIDNO:2所示的DNA分子；
(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码权利要求1中所述蛋白的DNA分子。
3.一种缩短植物童期的方法，其特征在于，所述方法包括上调编码柑橘bZIP转录因子的表达，编码柑橘bZIP转录因子的基因为权利要求2所述的基因。
4.根据权利要求3所述的缩短植物童期的方法，其特征在于，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：张金智，胡春根，叶丽霞，朱胜龙，张金霞，曾仁芳，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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