一种急性心肌梗死治疗药物制造技术

本发明专利技术提供了一种急性心肌梗死治疗药物，属于心血管疾病药物技术领域。本发明专利技术首次证明了非编码RNA LOC101928034过表达能够有效的促进心肌细胞增殖并能够促进血管内皮细胞的血管生成，因此可将LOC101928034过表达试剂用于制备心肌细胞增殖促进剂和血管内皮细胞血管生成促进剂，进而可将其用于制备治疗急性心肌梗死的药物，为急性心肌梗死的治疗提供一种新的药物。

【技术实现步骤摘要】
一种急性心肌梗死治疗药物
本专利技术属于心血管疾病药物
，尤其涉及一种急性心肌梗死治疗药物。
技术介绍
急性心肌梗死是全世界发病率和死亡率最高的一种心血管疾病，其是由于急性持续性冠状动脉缺血缺氧引起的心肌坏死，最终导致心肌重构及难以逆转的新功能下降。目前，临床上对于心肌梗死患者的主要治疗方式是药物治疗，介入治疗，溶栓治疗和手术治疗。尽管这些方式有效的提高了心肌梗死患者的生存率，但是这些治疗方式无法有效的解决心肌修复的问题。非编码RNA是全基因组中的一类不编码蛋白质的RNA，这些RNA分子中缺乏开放阅读框。随着高通量技术的迅速发展，人们逐渐发现了多种ncRNAs，而且随着对ncRNAs研究的不断深入，越来越多的研究人员发现，ncRNAs在生物进程中发挥着重要的作用。ncRNAs不仅能够作用于机体的正常生长发育，而且与多种疾病的发生发展存在密切的关系。目前，关于ncRNAs在急性心肌梗死治疗中的相关机制尚未清楚。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种急性心肌梗死治疗药物，为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。第一方面，本专利技术提供了LC101928034在急性心肌梗死治疗中的应用，所述LOC101928034的RNA核酸序列如SEQIDNO.1所示。第二方面，本专利技术提供了促进LOC101928034表达的试剂在制备治疗急性心肌梗死药物中的应用。优选地，所述试剂为LOC101928034过表达质粒。第三方面，本专利技术提供了一种治疗急性心肌梗死的药物，所述药物中含有LOC101928034过表达质粒。第四方面，本专利技术提供了促进LOC101928034表达的试剂在制备心肌细胞增殖促进剂中的应用。优选地，所述试剂为LOC101928034过表达质粒。第五方面，本专利技术提供了一种心肌细胞增殖促进剂，所述促进剂中含有LOC101928034过表达质粒。第六方面，本专利技术提供了促进LOC101928034表达的试剂在制备血管内皮细胞血管生成促进剂中的应用。优选地，所述试剂为LOC101928034过表达质粒。最后，本专利技术提供了一种血管内皮细胞血管生成促进剂，所述促进剂中含有LOC101928034过表达质粒。本专利技术的有益效果是：本专利技术首次证明了非编码RNALOC101928034过表达能够有效的促进心肌细胞增殖并能够促进血管内皮细胞的血管生成，因此可将LOC101928034过表达试剂用于制备心肌细胞增殖促进剂和血管内皮细胞血管生成促进剂，进而可将其用于制备治疗急性心肌梗死的药物，为急性心肌梗死的治疗提供一种新的药物。附图说明图1pcDNA3.1-LOC101928034过表达检测结果；图2过表达LOC101928034对于心肌细胞增殖的影响；图3过表达LOC101928034对于内皮细胞血管生成的影响；图4过表达LOC101928034对于血管内皮生成因子表达的影响。具体实施方式为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。实施例1设计和验证LOC101928034过表达质粒（1）根据LOC101928034的RNA核酸序列NR_125947.1，SEQIDNO.1以及pcDNA3.1的EcoRI和XhoI酶切位点设计引物构建pcDNA3.1-LOC101928034过表达质粒，引物序列如下所示；上游引物：GAATTCACACAACTCACCAAACCA,SEQIDNO.2下游引物：CTCGAGCCGCACAAACCTATGAGG,SEQIDNO.3（2）将人心肌细胞AC16接种于6孔板中，待细胞密度达到80%时，使用lip2000脂质体对细胞进行转染，对照组转染pcDNA3.1，实验组转染pcDNA3.1-LOC101928034，每组设置3个重复；（3）转染48h后，弃去培养基，每孔使用2mlPBS清洗2次，弃去PBS后，加入1mlTrizol处理10min；（4）吹打后，将Trizol转移至新的无RNA酶EP管中，加入250ul氯仿，室温静置5min后，置于离心机中，4度，12500rpm离心15min；（5）将400ul上清转移至新的EP管中，加入等体积的预冷异丙醇混匀，室温静置10min后，置于离心机中，4度，12500rpm离心15min；（6）弃上清，在EP管中加入1ml75%乙醇，悬浮沉淀，置于离心机中，4度，7500rpm离心10min；（7）弃去上清，超净工作台中干燥10min，根据白色沉淀大小加入20-40ulDEPC水，检测RNA的浓度和纯度；以1组样本为例，RNA的质量结果为样本类型OD260/280OD260/230浓度（ng/ul）体积（ul）pcDNA3.11.872.26464.5830pcDNA3.1-LOC1019280341.902.07430.2130符合RNA提取要求，可以进行后续的实验；（8）去除基因组DNA配置如下的反应体系：5×gDNAEraserBuffer2.0μl，gDNAEraser1.0μl，TotalRNA1.0μg，RNaseFreedH2Oupto10.0μl；设定PCR仪参数为42℃2分钟，4℃；（9）进行逆转录反应配置如下的反应体系：步骤（8）的反应液10.0μl，PrimeScriptRTEnzymeMixI1.0μl，RTPrimerMix1.0μl，5×PrimeScriptBuffer24.0μl，RNaseFreedH2O4.0μl；设定PCR仪参数为37℃15分钟，85℃5秒，4℃；（10）设计LOC101928034引物并进行荧光定量PCR反应LOC101928034的引物序列如下：正向引物：GAGAGCGGATACTGCCTTCC,SEQIDNO.4反向引物：GAGCCACACCCTTGTTCTGT,SEQIDNO.5GAPDH的引物序列如下：正向引物：GATTTGGTCGTATTGGGCGC,SEQIDNO.6反向引物：GCCTTCTCCATGGTGGTGAA,SEQIDNO.7配置如下的反应体系:SYBRGreenPremixExTaq（2×）10.0μl，LOC101928034正向引物：0.4μl，LOC101928034反向引物：0.4μl，cDNA模板2.0μl，ddH2O7.2μl；设定PCR仪参数为95℃预变性3min，1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.LOC101928034在急性心肌梗死治疗中的应用，其特征在于，所述LOC101928034的RNA核酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.LOC101928034在急性心肌梗死治疗中的应用，其特征在于，所述LOC101928034的RNA核酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.促进LOC101928034表达的试剂在制备治疗急性心肌梗死药物中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂为LOC101928034过表达质粒。


4.一种治疗急性心肌梗死的药物，其特征在于，所述药物中含有LOC101928034过表达质粒。


5.促进LOC101928034表达的试剂在制备心肌细胞增殖促进剂中的应用。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：于婧，赵魏芳，张璐，刘广焕，
申请(专利权)人：青岛市中心医院，
类型：发明
国别省市：山东;37