用于确定蛋白水平的方法技术

本发明专利技术提供了一种用于评定样品中功能性蛋白S的水平的体外方法。本发明专利技术还提供了用于确定样品中功能性蛋白S的水平的试剂盒。还提供了一种基于对功能性蛋白S的水平的确定然后给药治疗剂的治疗法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于确定蛋白水平的方法
本专利技术涉及用于确定样品中蛋白S的水平，特别是用于确定功能性蛋白S的水平的体外测定。
技术介绍
蛋白S是维生素K依赖性血浆蛋白，具有多种功能[1,2]。在人血浆中，它以两种形式循环，即游离蛋白(约30％)以及与补体调节剂C4b结合蛋白(C4BP)的复合物(约70％)[1,2]。游离蛋白S充当两种不同的抗凝蛋白的辅因子，即活化蛋白C(APC)和组织因子途径抑制剂α(TFPIα)[3-5]。对患有杂合蛋白S缺乏症的个体产生影响的静脉血栓形成的风险增加证明了蛋白S作为抗凝剂的生理重要性[6]。在婴儿患有纯合蛋白S缺乏症的罕见情况下，已有描述戏剧性的高凝状态。蛋白S敲除小鼠进一步证明了蛋白S的至关重要性，因为敲除可引致胚胎致死[7,8]。有趣的是，将蛋白S敲除与血友病A(FVIII敲除)或B(FIX敲除)结合使用时，小鼠没有明显的血栓形成或出血表型，证明蛋白S敲除的致死性是由于未受控的高凝作用引起的[9,10]。APC与蛋白S一起调节活化因子V(FVa)和活化因子VIII(FVIIIa)的活性，它们分别是酶因子Xa(F本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于确定样品中功能性蛋白S的水平的体外方法，所述方法包括以下步骤或由以下步骤组成：/n(a)使从受试者获得的样品与TFPIα和以下一种或多种接触：短段FV；或短段FV变体；或功能上等效的FV变体；/n(b)使所述样品与FXa接触；以及/n(c)测量所述样品中FXa活性的水平/n其中所述FXa活性的水平指示所述样品中功能性蛋白S的水平。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181004 SE SE-1851200-41.一种用于确定样品中功能性蛋白S的水平的体外方法，所述方法包括以下步骤或由以下步骤组成：
(a)使从受试者获得的样品与TFPIα和以下一种或多种接触：短段FV；或短段FV变体；或功能上等效的FV变体；
(b)使所述样品与FXa接触；以及
(c)测量所述样品中FXa活性的水平
其中所述FXa活性的水平指示所述样品中功能性蛋白S的水平。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述功能性蛋白S的水平是所述样品中蛋白S的活性水平，任选地其中所述活性是所述蛋白S充当TFPIα的辅因子的能力。


3.根据权利要求1所述的方法，其中所述功能性蛋白S的水平是所述样品中功能性蛋白S的量。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述样品中的所述功能性蛋白S是所述样品中的游离蛋白S。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述样品中的所述功能性蛋白S是所述样品中的非C4BP复合蛋白S。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中步骤(a)还包括使所述样品与能够允许蛋白组装的底物接触。


7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述能够允许蛋白组装的底物是磷脂囊泡。


8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中步骤(a)还包括钙。


9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括以下步骤或由以下步骤组成：
(d)提供基于功能性蛋白S的标准曲线；以及
(e)将步骤(c)的测量值与步骤(d)的所述标准曲线进行比较。


10.根据权利要求9所述的方法，其中使用从健康个体获得的血浆样品，或者使用已知量的纯化蛋白S，或者使用包含限定量的蛋白S的培养基溶液，来生成所述标准曲线。


11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所测量的所述FXa活性的水平指示对FXa的抑制，并且其中对FXa的抑制水平指示所述样品中功能性蛋白S的水平，任选地指示所述样品中功能性蛋白S活性的水平。


12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述样品是血浆，任选地其中所述样品是柠檬酸化血浆。


13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述样品具有高稀释因子，例如其中所述稀释因子介于1/10至1/2000之间，任选地其中所述稀释因子介于1/50至1/400之间。


14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(a)还包括使所述样品与C4BP接触。


15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(b)还包括在存在FXa的情况下使所述样品与能够发出可测量信号的组分接触。


16.根据权利要求11所述的方法，其中，在存在FXa的情况下发出的所述可测量信号是荧光或色彩，任选地其中所述组分选自：S2765、S-2222。


17.根据权利要求16所述的方法，其中所述能够发出可测量信号的组分是S2765，并且S2765的浓度介于0.1至2mM之间，优选地介于0.3至1mM之间，优选地其中S2765的浓度为0.8mM。


18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(a)和/或步骤(b)还包括使所述样品与凝血酶抑制剂接触。


19.根据权利要求18所述的方法，其中所述凝血酶抑制剂是水蛭素或Pefa-block。


20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述短段FV变体或FV变体是对凝血酶活化具有抗性的变体。


21.根据权利要求20所述的方法，其中所述FV短变体或FV变体包含从精氨酸突变为谷氨酰胺的凝血酶切割位点，任选地其中所述短段FV变体选自短段FVQQ、短段FVRQ和短段FVQR。


22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述短段FV变体或FV变体是具有增强或协同的TFPIα辅因子活性的变体。


23.根据权利要求22所述的方法，其中所述短段FV变体是FV-709-1476。


24.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述短段FV变体或FV变体是保留B结构域的酸性C-末端区域的变体。


25.根据前...

【专利技术属性】
技术研发人员：比约恩·达尔贝克，
申请(专利权)人：血栓形成和凝血公司，
类型：发明
国别省市：瑞典;SE