用于碳水化合物抗原切割的酶促组合物，与其相关的方法、用途、设备和系统技术方案

本文提供了用于碳水化合物抗原切割的酶促组合物，与其相关的方法、用途、设备和系统。具体地，所述组合物包含两种酶GalNAc脱乙酰酶和半乳糖胺酶，并且所述组合物还可以包含拥挤剂。此外，发现本文所述的组合物在适于细胞存活的温度和pH水平下具有活性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于碳水化合物抗原切割的酶促组合物，与其相关的方法、用途、设备和系统相关申请的交叉引用本申请要求2018年8月17日提交的题为“用于碳水化合物抗原切割的酶促组合物，与其相关的方法、用途、设备和系统(ENZYMATICCOMPOSITIONSFORCARBOHYDRATEANTIGENCLEAVAGE,METHODS,USES,APPARATUSESANDSYSTEMSASSOCIATEDTHEREWITH)”的美国临时专利申请系列第62/719,272号的权益。
本专利技术涉及酶组合物领域。具体地，本专利技术涉及用于切割抗原的酶组合物，以及提供使用该组合物切割抗原的方法、用途、设备和系统。背景血型的正确匹配是输血医学的主要要求，因为A血型个体的血浆含有针对B抗原的抗体，反之亦然，因此不相容的输血可以导致补体激活和红血细胞(RBC)裂解(Daniels2010)。这些细胞表面抗原是分别终止于A型血和B型血的α-1,3-连接的-N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)或半乳糖(Gal)的碳水化合物结构。另一方面，O型RBC不含有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.组合物，所述组合物包含：/n(a)纯化的GalNAc脱乙酰酶蛋白；和/n(b)纯化的半乳糖胺酶蛋白。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180817 US 62/719,2721.组合物，所述组合物包含：
(a)纯化的GalNAc脱乙酰酶蛋白；和
(b)纯化的半乳糖胺酶蛋白。


2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物选自以下中的一种或多种：
(a)所述纯化的GalNAc脱乙酰酶蛋白，其选自以下中的一种或多种：SEQIDNO:2；SEQIDNO:4；SEQIDNO:5；SEQIDNO:17；SEQIDNO:23；SEQIDNO:29；SEQIDNO:31；SEQIDNO:32；SEQIDNO:33；SEQIDNO:34和SEQIDNO:35；以及
(b)所述纯化的半乳糖胺酶蛋白，其选自以下中的一种或多种：SEQIDNO:7；SEQIDNO:9；SEQIDNO:10；SEQIDNO:19；SEQIDNO:21；SEQIDNO:36和SEQIDNO:37。


3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含：具有GalNAc脱乙酰酶活性的纯化酶，其基本上由与SEQIDNO:2、4、5、17、23、29、31和32-35中之一所示序列至少90％相同的氨基酸序列组成；和具有半乳糖胺酶活性的纯化酶，其基本上由与SEQIDNO:7、9、10、19、21、36和37中之一所示序列至少90％相同的氨基酸序列组成。


4.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述组合物包含选自以下中的一种或多种的酶：
(a)所述纯化的GalNAc脱乙酰酶蛋白是SEQIDNO:2、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5的纯化的普氏梭杆菌(Flavonifractorplautii)的GalNAc脱乙酰酶蛋白；和
(b)所述纯化的半乳糖胺酶蛋白是SEQIDNO:7、SEQIDNO:9和SEQIDNO:10的纯化的普氏梭杆菌的半乳糖胺酶蛋白。


5.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述组合物选自以下中的一种或多种：
(a)所述纯化的GalNAc脱乙酰酶蛋白是SEQIDNO:17或SEQIDNO:32的纯化的第三梭状芽胞杆菌(Clostridiumtertium)的GalNAc脱乙酰酶蛋白；和
(b)所述纯化的半乳糖胺酶蛋白是SEQIDNO:19或SEQIDNO:36的纯化的第三梭状芽胞杆菌的半乳糖胺酶蛋白。


6.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，其中所述GalNAc脱乙酰酶和半乳糖胺酶能够在1μg/ml或低于1μg/ml下切割A抗原。


7.根据权利要求1-6中任一项所述的组合物，其中所述GalNAc脱乙酰酶和半乳糖胺酶在约6.5至约7.5的pH下具有A抗原切割活性。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述GalNAc脱乙酰酶和半乳糖胺酶在4℃至37℃的温度下具有A抗原切割活性。


9.根据权利要求1-8中任一项所述的组合物，其中
(a)所述纯化的GalNAc脱乙酰酶和所述纯化的半乳糖胺酶是固定化的；
(b)所述纯化的GalNAc脱乙酰酶是固定化的；或者
(c)所述纯化的半乳糖胺酶是固定化的。


10.根据权利要求9所述的组合物，其中所述固定化酶连接到表面上，所述表面选自以下中的一种或多种：
(a)珠或微球体；
(b)容器；
(c)管；
(d)柱；或
(e)基质。


11.根据权利要求1-10中任一项所述的组合物，其中所述组合物还包含拥挤剂。


12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述拥挤剂选自以下中的一种或多种：右旋糖酐、硫酸右旋糖酐、糊精、普鲁兰多糖、聚(乙二醇)、聚蔗糖TM和惰性蛋白。


13.纯化的酶，其包含SEQIDNO:2、SEQIDNO:4或SEQIDNO:5的普氏梭杆菌的GalNAc脱乙酰酶。.


14.纯化的酶，其包含SEQIDNO:7、SEQIDNO:9或SEQIDNO:10的普氏梭杆菌的半乳糖胺酶。


15.纯化的酶，其包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:32的第三梭状芽胞杆菌的GalNAc脱乙酰酶蛋白。


16.纯化的酶，其包含SEQIDNO:19或SEQIDNO:36的第三梭状芽胞杆菌的半乳糖胺酶蛋白。


17.编码GalNAc脱乙酰酶的分离的核酸序列，其选自以下中的一种或多种：SEQIDNO:1；SEQIDNO:3；SEQIDNO:16；SEQIDNO:24；SEQIDNO:26；SEQIDNO:28和SEQIDNO:30。


18.编码半乳糖胺酶的分离的核酸序列，其选自以下中的一种或多种：SEQIDNO:6；SEQIDNO:8；SEQIDNO:18和SEQIDNO:20。


19.载体，其包含权利要求17或18所述的核酸以及异源核酸序列。


20.根据权利要求19所述的载体，其中所述异源核酸序列选自以下中的一种或多种：蛋白质标签和切割位点。


21.根据权利要求20所述的载体，其中所述蛋白质标签选自以下中的一种或多种：白蛋白结合蛋白(ABP)；碱性磷酸酶(AP)；AU1表位；AU5表位；Avi标签；噬菌体T7表位(T7标签)；噬菌体V5表位(V5标签)；生物素-羧基载体蛋白(BCCP)；蓝舌病毒标签(B标签)；单结构域骆驼科动物抗体(C标签)；钙调蛋白结合肽(CBP或钙调蛋白标签)；氯霉素乙酰转移酶(CAT)；纤维素结合结构域(CBP)；几丁质结合结构域(CBD)；胆碱结合结构域(CBD)；二氢叶酸还原酶(DHFR)；DogTag；E2表位；E标签；FLAG表位(FLAG标签)；半乳糖结合蛋白(GBP)；绿色荧光蛋白(GFP)；Glu-Glu(EE标签)；谷胱甘肽S转移酶(GST)；人流感血凝素(HA)；HaloTagTM；交替的组氨酸和谷氨酰胺标签(HQ标签)；交替的组氨酸和天冬酰胺标签(HN标签)；组氨酸亲和标签(HAT)；辣根过氧化物酶(HRP)；HSV表位；Isopeptag(Isopep标签)；类固醇异构酶(KSI)；KT3表位；LacZ；荧光素酶；麦芽糖结合蛋白(MBP)；Myc表位(Myc标签)；NE标签；NusA；PDZ结构域；PDZ配体；聚精氨酸(Arg标签)；聚天冬氨酸(Asp标签)；聚半胱氨酸(Cys标签)；聚谷氨酸(Glu标签)；聚组氨酸(His标签)；聚苯丙氨酸(Phe标签)；ProfinityeXact；蛋白C；Rho1D4标签；S1标签；S标签；Softag1；Softag3；SnoopTagJr；SnoopTag；Spot标签；SpyTag(Spy标签)；Streptavadin结合肽(...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯蒂芬·G·威瑟斯，彼得·拉费尔德，加雅善德兰·基萨科达特胡，
申请(专利权)人：不列颠哥伦比亚大学，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA