红参多糖、提纯方法及联合顺铂在抗癌药物中的应用技术

本发明专利技术适用于药物技术领域，提供了红参多糖、提纯方法及联合顺铂在抗癌药物中的应用。红参多糖的提纯方法，包括以下步骤：红参多糖的提取：通过超声提取、乙醇沉淀、过滤、冻干处理，得到红参提取物；红参提取物复水后，用乙醇分级醇沉得到多糖组分；红参多糖的纯化：多糖组分采用DEAE‑纤维素离子交换层析和葡聚糖凝胶G‑75过滤层析纯化，得到纯化后的红参多糖。本发明专利技术提供一种红参多糖提纯方法，采用该方法制备得到的红参多糖与顺铂联合使用发生了协同作用，可用于治疗癌症、肿瘤、提高免疫力。

【技术实现步骤摘要】
红参多糖、提纯方法及联合顺铂在抗癌药物中的应用
本专利技术属于药物
，尤其涉及红参多糖、提纯方法及联合顺铂在抗癌药物中的应用。
技术介绍
红参多糖是红参的主要活性成分之一，具有增强免疫系统功能、免疫抗肿瘤和辅助抗肿瘤、降血糖及调控血细胞生成的作用。目前，红参多糖提取物的制备通常是以水提醇沉，其中中性多糖、酸性多糖含量低。但是，目前红参多糖的抗肿瘤、抗癌、增强免疫能力仅仅处于初步研究阶段，尚未见有关于红参多糖联合顺铂抗肿瘤、抗癌、增强免疫能力方面的报道。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提供红参多糖、提纯方法及联合顺铂在抗癌药物中的应用，旨在解决
技术介绍
中指出的现有技术存在的问题。本专利技术实施例是这样实现的，红参多糖的提纯方法，包括以下步骤：红参多糖的提取：通过超声提取、乙醇沉淀、过滤、冻干处理，得到红参提取物；红参提取物复水后，用乙醇分级醇沉得到多糖组分；红参多糖的纯化：多糖组分采用DEAE-纤维素离子交换层析和葡聚糖凝胶G-75过滤层析纯化，得到纯化后的红参多糖。作为本专利技术实施例的另一种优选方案，采用40～45％浓度的乙醇分级醇沉。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种上述方法制备得到的红参多糖。作为本专利技术实施例的另一种优选方案，所述红参多糖的分子量为27.4～28kDa。作为本专利技术实施例的另一种优选方案，所述红参多糖中多糖含量为90.3～97.6％。作为本专利技术实施例的另一种优选方案，所述红参多糖的糖链中含有α型糖残基。作为本专利技术实施例的另一种优选方案，所述红参多糖中包括以下单糖组分：葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖；葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的质量比为(33.5～35.2)：(6.3～7.1)：(44.3～45.2)：(9.1～9.8)：(4.1～4.6)。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种红参多糖联合顺铂在抗癌药物中的应用。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种所述的红参多糖联合顺铂在抗肿瘤药物中的应用。本专利技术实施例的另一目的在于提供一种所述的红参多糖联合顺铂在增强免疫力药物中的应用。本专利技术提供一种红参多糖提纯方法，采用该方法制备得到的红参多糖与顺铂联合使用发生了协同作用，可用于治疗癌症、肿瘤、提高免疫力。红参多糖与顺铂联合使用治疗肿瘤，可有效降低肿瘤体积和肿瘤质量。红参多糖与顺铂联合使用治疗癌症，可对肺癌A549细胞增殖产生较强的抑制效应，且随着红参多糖浓度的增加协同作用增强；可使肺癌A549细胞阻滞于G0/G1期和G2/M期；可诱使肺癌A549凋亡率显著提高；可有效降低肺癌A549细胞内Bcl-2基因mRNA和蛋白表达水平；可显著升高肺癌A549细胞内Bax表达水平。红参多糖与顺铂联合使用增强免疫力，可升高脾指数，改善顺铂所致的免疫低下。附图说明图1为葡萄糖标准曲线图；图2为红参多糖的紫外扫描图谱；图3为红参多糖的红外光谱图；图4为各组细胞调亡检测结果对比图；图5为各组肺癌肺癌A549细胞周期检测结果对比图；图6为各组肺癌A549细胞中Bcl-2基因mRNA表达水平对比图；图7为各组肺癌A549细胞中Bcl-2蛋白表达水平对比图；图8为各组肺癌肺癌A549细胞中Bax基因mRNA表达水平对比图；图9为各组肺癌A549细胞中Bax蛋白表达水平对比图；图10为各组肿瘤体积结果对比图；图11为各组肿瘤重量结果对比图；图12为各组肿瘤对比图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。以下结合具体实施例对本专利技术的具体实现进行详细描述。实施例1该实施例提供了一种红参多糖的提纯方法，包括以下步骤：(1)红参多糖(RGPS)的提取：通过超声提取、乙醇沉淀、0.22um滤膜过滤、冻干处理，得到红参提取物，其收率为19.58％；红参提取物用蒸馏水复水后，用42％浓度的乙醇分级醇沉得到多糖组分；(2)红参多糖的纯化：多糖组分采用DEAE-纤维素离子交换层析和葡聚糖凝胶G-75过滤层析纯化，得到纯化后的红参多糖(RGP-45)，其收率为12.59％。一、测定得到的红参多糖的分子量：测试方法：高效液相色谱仪(安捷伦1260示差检测器)，样品浓度及进样量(2mg/mL，20μL)，色谱柱shodex805-804-802，凝胶柱(8×300mm)串联柱，流动相20mMCH3COONH4，流速0.8mL/min，柱温箱40℃。结果：随着洗脱时间的延长，红参多糖只出现一个单一的、对称的窄峰，表明五个多糖组分均为均一多糖，红参多糖的平均分子量(Mw)为27.8kDa。二、测定得到的红参多糖的含量葡萄糖标准贮备液的配制：葡萄糖使用前，放入105℃烘箱中恒温烘干至恒重后，精密称取50mg，用蒸馏水溶解混匀后定容于500mL容量瓶中，从而得到0.1mg/mL葡萄糖标准溶液贮备液。葡萄糖标准曲线的绘制：分别吸取0.1mg/mL葡萄糖标准溶液0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL置于10mL带塞玻璃试管中，用蒸馏水补至1.0mL，分别向带塞玻璃试管中加入1.0mL5％的苯酚溶液，于涡旋振荡器上混匀后，分别逐滴匀速加入5mL浓硫酸溶液，充分混匀，置沸水浴中加热20min，取出后室温下冷却30min，以进行同样处理的蒸馏水为空白对照组，在波长为490nm条件下，测定其吸光度值。同一浓度的葡萄糖标准溶液分别重复测定3次，以葡萄糖含量为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，见图1所示。红参多糖的含量测定：按上述方法操作，平行测量3次，从回归方程中求出供试品溶液中葡萄糖的含量，按下式计算样品中多糖含量。多糖含量＝m0/m×100％m0：由标准曲线查得的供试品溶液葡萄糖含量；m：供试品的质量。结果：从图1可以看出，以葡萄糖含量(mg)为横坐标，吸光度A为纵坐标，得到标准曲线：y＝7.605x+0.0039，相关系数R2＝0.9996。红参多糖的多糖含量为91.57％，蛋白质含量为0。三、测定得到的红参多糖的单糖组成结果：所述红参多糖中包括以下单糖组分：葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖；其中葡萄糖醛酸和葡萄糖为主要单糖。葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖的质量比为34.6：6.8：44.9：9.5：4.3。四、对得到的红参多糖进行UV光谱分析红参多糖的紫外全波长扫描图谱见图2。从图2可以看出，样品在280nm和260nm处几乎没有紫外吸收，说明样品中几乎不含有蛋白质和核酸，纯度较髙。五、对得到的红本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.红参多糖的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：/n红参多糖的提取：/n通过超声提取、乙醇沉淀、过滤、冻干处理，得到红参提取物；/n红参提取物复水后，用乙醇分级醇沉得到多糖组分；/n红参多糖的纯化：/n多糖组分采用DEAE-纤维素离子交换层析和葡聚糖凝胶G-75过滤层析纯化，得到纯化后的红参多糖。/n

【技术特征摘要】
1.红参多糖的提纯方法，其特征在于，包括以下步骤：
红参多糖的提取：
通过超声提取、乙醇沉淀、过滤、冻干处理，得到红参提取物；
红参提取物复水后，用乙醇分级醇沉得到多糖组分；
红参多糖的纯化：
多糖组分采用DEAE-纤维素离子交换层析和葡聚糖凝胶G-75过滤层析纯化，得到纯化后的红参多糖。


2.根据权利要求1所述的红参多糖的提纯方法，其特征在于，采用40~45%浓度的乙醇分级醇沉。


3.一种如权利要求1~2任一所述的方法制备得到的红参多糖。


4.根据权利要求3所述的红参多糖，其特征在于，所述红参多糖的分子量为27.4~28kDa。


5.根据权利要求3所述的红参多糖，其特征在于，所述红参多糖中多糖含量为90....

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳维，翟凤国，梁启超，吴宜艳，张朝立，侯甲福，
申请(专利权)人：牡丹江医学院，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23