敲除棉花GhTSTs基因的sgRNA组合物及其在创制棉花无短绒突变体中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种敲除棉花GhTSTs基因的sgRNA组合物及其在创制棉花无短绒突变体中的应用，属于植物基因工程技术领域。本发明专利技术针对8个GhTSTs基因的保守区段设计的3条基因编辑用sgRNA，构建二套CRISPR

【技术实现步骤摘要】
敲除棉花GhTSTs基因的sgRNA组合物及其在创制棉花无短绒突变体中的应用


[0001]本专利技术属于植物基因工程
，具体涉及敲除棉花GhTSTs基因的sgRNA组合 物及其在创制棉花无短绒突变体中的应用。

技术介绍

[0002]棉花(Anemone vitifolia Buch)是重要的经济作物，在世界及我国国民经济中占 有重要地位。棉纤维是纺织工业生产棉质产品不可缺少的原料，棉纺品涉及人们生活 的各个方面，包括衣着用棉纺品、装饰用棉纺品、工业用棉纺品等。在棉花产量中， 纤维约占40％，其余为棉籽。
[0003]棉纤维使用最为广泛的纤维材料。棉纤维是由受精胚珠的表皮细胞经伸长、加厚 而成的种子纤维，可以分为长绒和短绒。它的主要组成物质是纤维素(cellulose)， 纤维素是大分子多糖组成。植物通过光合作用合成葡糖糖并进行有效分配，植物中含 有数量众多，功能丰富的糖转运子，分别为单糖转运子家族、蔗糖转运子家族和 SWEET转运子家族。在拟南芥中有53个单糖转运子及类似蛋白，分为7个小家族， 主要参与己糖、戊糖、四碳糖及多元醇在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.GhTSTs基因在创制棉花无短绒突变体中的应用。2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述GhTSTs基因为以下序列中的一种：Gh_D13G0564、Gh_A13G0568、Gh_A04G1428、Gh_D04G1487、Gh_A01G0820、Gh_D01G0848的DNA序列。3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述GhTSTs基因还包括以下序列中的一种：Gh_D02G1974和Gh_A03G1506。4.一种用于敲除棉花GhTSTs基因的sgRNA组合物，其特征在于，所述sgRNA组合物包括sgRNA1和以下sgRNA中的一种；sgRNA2和sgRNA3；所述sgRNA1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述sgRNA2的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述sgRNA3的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。5.一种用于敲除棉花GhTSTs基因的重组载体，其特征在于，所述重组载体包括pRGEB32
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GhTST12或pRGEB32
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GhTST13；所述pRGEB32
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GhTST12为在骨架载体pRGEB32
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7中插入权利要求4所述sgRNA组合物的sgRNA1和sgRNA2；所述pRGEB32
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GhTST13为在骨架载体pRGEB32
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7中插入权利要求4所述sgRNA组合物的sgRNA1和sgRNA3。6.一种敲除GhTSTs基因的试剂在创制棉花无短绒突变体中的应用。7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述敲除GhTSTs基因的试剂为权利要求4所述sgRNA组合物或权利要求5所述重组载体。8.一种创建棉花无短绒突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)构建含权利要求4所述sgRNA组合物的重组载体；2)将所述重组载体用农杆菌介导转入棉花中，得到转基因棉花；3)将所述转基因棉花进行阳性检测，得到棉花无短绒突变体。9.根据权利要求8所述方法，其特征在于，构建含权利要求4所述sgRNA组合物的重组载体的方法包括构建pRGEB32
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GhTST12重组载体的方法或构建pRGEB32
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GhTST13重组载体的方法；所述构建pRGEB32
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GhTST12重组载体的方法，包括以下步骤：A.以pGTR4质粒为模板，分别采用pGREB32
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7F/TSTs
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1a引物对或TSTs
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1s/TSTs
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2a引物对进行PCR扩增，得到两条PCR扩增产物；B.以两条PCR扩增产物为模板，用infpRGE...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨细燕，夏林杰，邓晋武，孙伟男，涂礼莉，张献龙，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：