一种分离尿液中外泌体的方法技术

本发明专利技术提供了一种分离尿液中外泌体的方法。所述方法包括以下步骤：(1)将与磷酸基团有特异性相互作用的亲和色谱微球加入到尿液中混合孵育，离心收集沉淀；(2)向步骤(1)得到的沉淀中加入磷酸盐缓冲液进行竞争洗脱，离心取上清液，得到所述外泌体。本发明专利技术采用较高浓度的磷酸盐缓冲液洗脱与磷酸基团有特异性相互作用的亲和色谱微球上的外泌体，条件温和，有利于保持外泌体生物膜结构的完整性，提高了洗脱效率，实现了高效无损分离尿液中外泌体。实现了高效无损分离尿液中外泌体。实现了高效无损分离尿液中外泌体。

【技术实现步骤摘要】
一种分离尿液中外泌体的方法


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种分离尿液中外泌体的方法，尤其涉及一种高效无损分离尿液中外泌体的方法。

技术介绍

[0002]外泌体是一种由细胞分泌的直径约为40～200nm的囊泡，其富含蛋白质、脂质、DNA及RNA等生物分子，是细胞间分子交换和信息传递的重要载体，且已被证实在肿瘤发生、发展、转移、血管新生和免疫逃逸等过程中发挥着重要作用。近年来，外泌体成为肿瘤领域的研究热点之一，从体液(如血液、尿液、脑脊液或唾液等)中分离出外泌体进行检测，为发展无创的肿瘤诊断方法及研究肿瘤的发生发展机制提供了崭新的研究思路。外泌体的体积小、密度低，对其进行分析和功能研究前，需从体液中对其进行富集分离。
[0003]如今已发展了多种基于外泌体尺寸、密度及免疫表型的提取方法，包括超速离心法、密度梯度离心法、体积排阻色谱、聚合物沉淀法和免疫亲和法等。超速离心法是提取外泌体的经典方法，通过超速离心对外泌体进行富集，但是需要依赖昂贵的设备投入，且过程费时，得到的外泌体易受杂蛋白的干扰，且反复的高速离心会导致外泌体破裂，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离尿液中外泌体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将与磷酸基团有特异性相互作用的亲和色谱微球加入到尿液中混合孵育，离心收集沉淀；(2)向步骤(1)得到的沉淀中加入磷酸盐缓冲液进行竞争洗脱，离心取上清液，得到所述外泌体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.1～0.3M；优选地，步骤(2)所述磷酸盐缓冲液的pH为6.8～7.8。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在步骤(1)之前还包括对亲和色谱微球进行洗涤的步骤，优选为使用4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液洗涤亲和色谱微球，离心收集所述亲和色谱微球；优选地，所述4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液的浓度为20～55mM；优选地，所述4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液的pH为6.8～7.8；优选地，所述离心的离心力为1500～2500
×
g；优选地，所述离心的时间为1～3min；优选地，所述洗涤的次数为2～4次。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(1)之前还包括对尿液进行预处理的步骤；优选地，所述预处理包括对尿液进行离心、浓缩并过滤的步骤；优选地，所述离心的离心力为1500～3000
×
g；优选地，所述离心的时间为8～15min；优选地，所述浓缩为采用超滤离心管进行超滤浓缩；优选地，所述超滤离心管的截留分子量为30KD～50KD；优选地，所述过滤的滤器为0.20～0.25μm针式过滤器。5.根据权利要求1
‑
4任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(2)之前还包括对步骤(1)得到的沉淀进行洗涤的步骤，优选为向步骤(1)得到的沉淀中加入4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液并混合，离心收集沉淀；优选地，所述4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液的浓度为20～55mM；优选地，所述4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液的pH为6.8～7.8；优选地，所述混合后还包括振荡的步骤；优选地，所述振荡的温度为8～15℃；优选地，所述振荡的时间为3～7min；优选地，所述离心的离心力为4500～5500
×
g；优选地，所述离心的时间为1～5min；优选地，所述洗涤重复1～2次。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述与磷酸基团有特异性相互作用的固定化亲和色谱微球包括Ti
‑
IMAC固定化亲和色谱微球。7.根据权利要求1
...

【专利技术属性】
技术研发人员：林琳，胡思侠，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：