AP-2alpha抗体及其在制备宫颈癌药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种AP

【技术实现步骤摘要】
AP
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2alpha抗体及其在制备宫颈癌药物中的用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，尤其涉及一种AP
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2alpha单克隆抗体及其联合用药在制备治疗宫颈癌的药物中的用途。

技术介绍

[0002]宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤。原位癌高发年龄为30～35岁，浸润癌为 45～55岁，近年来其发病有年轻化的趋势。近几十年宫颈细胞学筛查的普遍应用，使宫颈癌和癌前病变得以早期发现和治疗，宫颈癌的发病率和死亡率已有明显下降。
[0003]宫颈癌是一个受多基因网络调控的疾病。AP
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2作为一个重要的转录因子家族，研究表明AP
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2在宫颈癌中起着重要的调控作用。其中AP
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2alpha在细胞生长和肿瘤发生中起着重要作用AP
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2alpha的功能一部分是通过与AP
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2alpha下游基因启动子区域结合，促进其表达来实现。癌基因ErbB2在宫颈癌中广泛过表达，一直以来是研究治疗的靶点。ErbB2在肿瘤细胞中功能丢失将导致细胞生长抑制，并引起凋亡。最新研究报道ErbB2基因的表达下调促进了宫颈癌细胞的凋亡，从而达到治疗宫颈癌的目的。有研究表明AP
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2alpha与癌基因ErbB2基因启动子结合，促进ErbB2基因的转录和蛋白表达，从而显示了AP
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2alpha在宫颈癌发生发展中的调控作用。
[0004]CN 111647067 A公开了一种AP
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2alpha的单克隆抗体与索拉非尼联合用药治疗宫颈癌的用途。但该专利技术中仅仅是单克隆抗体与索拉非尼简单的混合即用于治疗，但是，本领域的技术人员知道，索拉非尼是化学药物，靶向性较差，且临床上主要用于不能手术的晚期肝癌患者治疗，因此不管是单独使用还是简单的与单克隆抗体混合使用，都会对其它的器官或组织产生伤害或耐药性，且对宫颈癌的治疗效果有限。另外，该专利技术中用于筛选单克隆抗体的抗原仅仅是AP
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2alpha 的一部分，其空间结构与靶蛋白可能存在一定的区别，因此，其筛选的单克隆抗体可能在特异性和敏感性方面存在一定的缺陷。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的问题，提出了一种AP
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2alpha单克隆抗体及其联合用药用于制备治疗宫颈癌的药物中的用途。
[0006]因此，本专利技术一方面提供了一种AP
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2alpha单克隆抗体，所述的单克隆抗体结合的抗原表位位于AP
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2alpha蛋白的aa55
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aa68；所述的aa55
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aa68的氨基酸序列为LSHTPNADFQPPYF。
[0007]优选地，本专利技术所述的单克隆抗体为IgG1亚型。
[0008]优选地，本专利技术所述的单克隆抗体制备用抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO2 所示。
[0009]优选地，本专利技术所述的编码单克隆抗体制备用抗原的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
[0010]再一方面，本专利技术还提供了一种药物组合物，所述的药物组合物由权利要求 1所述的AP
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2alpha单克隆抗体和博来霉素组成。
[0011]优选地，本专利技术所述的药物组合物中AP
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2alpha单克隆抗体和博来霉素通过 SPDP偶联在一起。
[0012]优选地，本专利技术所述的药物组合物中AP
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2alpha单克隆抗体与博来霉素的摩尔比为1:3～6。
[0013]优选地，本专利技术所述的药物组合物的用量为5mg/kg。优选地，本专利技术所述的。
[0014]本专利技术通过制备真核表达系统制备AP
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2alpha全蛋白，在此蛋白的基础上，通过杂交瘤细胞获得了特异性针对AP
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2alpha蛋白的高亲和力的单克隆抗体，该单克隆抗体具有较好的抑制宫颈癌细胞增殖的效果。并且，本专利技术通过将单克隆抗体与博来霉素偶联，相比于单独使用单克隆抗体或博来霉素或不偶联联合使用单克隆抗体、博来霉素，具有具有更好的抑制癌细胞增殖的效果，且比索拉非尼的效果更好。
附图说明
[0015]图1 AP
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2alpha蛋白的SDS
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PAGE图。
具体实施方式
[0016]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术中的一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0017]本专利技术所涉及的化学试剂均为国产试剂。
[0018]实施例1 AP
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2alpha蛋白的制备
[0019]将密码子优化后的AP
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2alpha蛋白的核苷酸序列(具体序列如SEQ ID NO.1 所示)克隆到真核表达载体(如)中，
[0020]以密码子优化的AP
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2alpha蛋白的核苷酸序列(具体序列如SEQ ID NO.1所示)为模板，分别用EcoRI和XhoI双酶切位点进行连接以构建 pFuse
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AP
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2alpha
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6His表达质粒。将鉴定为阳性的重组质粒送到华大生物公司进行序列测定，用软件对测定的核苷酸序列及编码的氨基酸序列进行分析比对，检查阅读框架的正确性。
[0021]将鉴定正确的pFuse
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AP
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2alpha
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6His表达质粒瞬时转染293T细胞，72小时后收获细胞培养上清，用镍柱(GE医疗)亲和纯化分泌表达的AP
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2alpha
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6His蛋白； BCA试剂盒(碧云天)测定浓度，并用SDS
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PAGE测定纯度。经测定，其表达产量能达到200mg/L，且SDS
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PAGE纯度(如图1所示)＞95％。测定后的蛋白分装冻存于
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80℃备用。其中，表达的AP
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2alpha蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0022]实施例2抗AP
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2alpha单克隆抗体的制备
[0023]用AP
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2alpha蛋白，免疫8周龄的BALB/c小鼠，首次免疫时，AP
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2alpha 蛋白与弗氏完全佐剂等体积乳化，腹腔接种小鼠，50μg蛋白/只；7天后AP
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2alpha 蛋白与弗氏不完全佐剂等体积乳化，第二次腹腔接种途径免疫小鼠，50μg蛋白/ 只；7天后第三次小鼠腹腔途径直接免疫AP
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2alpha蛋白，50μg/只；免疫后的第 3天，取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合，HAT选择性培养基培；10 天后以AP
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2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种AP
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2alpha单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体结合的抗原表位位于AP
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2alpha蛋白的aa55
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aa68；所述的aa55
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aa68的氨基酸序列为LSHTPNADFQPPYF。2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体为IgG1亚型。3.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的单克隆抗体制备用抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。4.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述的编码单克隆抗体制备用抗原的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫国，
申请(专利权)人：陈卫国，
类型：发明
国别省市：