一种三颗针多糖的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种三颗针多糖的提取方法，包括以下步骤：仪器准备，准备好循环水多用真空泵、恒温水浴锅、数控超声波清洗器、紫外/可见分光光度计、台式高速冷冻离心机、电子分析天平和高速粉碎机，原料准备，准备好葡萄糖、浓硫酸、苯酚、无水乙醇、蒸馏水和三颗针，且上述试药均为国产分析纯试剂。该一种三颗针多糖的提取方法，在单因素试验基础上，采用响应面法试验设计对三颗针多糖的热水提取条件进行优化，以确定三颗针多糖的最佳提取工艺条件，有利于提高预测结果的可信度，能够快速确定多因素系统的最佳实验条件，且有利于为以三颗针为原料的植物多糖在中医药领域的进一步开发和利用提供参考。利用提供参考。利用提供参考。

【技术实现步骤摘要】
一种三颗针多糖的提取方法


[0001]本专利技术涉及三颗针多糖提取
，具体为一种三颗针多糖的提取方法。

技术介绍

[0002]三颗针，为小檗科植物等多种植物的根、茎及树皮，具有清热燥湿，泻火解毒功效，现代药理学研究证实其具有广谱抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌，以及钩端螺旋体等均有抑制作用，同时研究证明植物多糖是药用植物水煎剂的主要成分，具有复杂的生物活性和功能，被认为是中药发挥传统治疗作用的主要药效物质之一，近年来，由于不同植物来源的多糖结构组成复杂多变、功能活性多种多样，关于多糖提取、分离等研究受到学者们的重视。
[0003]现今市场上常用的植物多糖提取方法有溶剂提取法、超声波辅助溶剂提取法、微波辅助溶剂提取法、超声
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微波协同提取法、酶解法、超临界流体萃取法等，但上述提取方法操作比较繁琐，且提取过程中的液料比、提取温度、提取时间等均会对三颗针多糖得率造成影响，从而导致三颗针多糖提取效率低下，因此，我们便提出方便解决上述问题的三颗针多糖的提取方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种三颗针多糖的提取方法，以便解决上述中所提出的现今市场上常用的植物多糖提取方法操作比较繁琐，且提取过程中的液料比、提取温度、提取时间等均会对三颗针多糖得率造成影响，从而导致三颗针多糖提取效率低下的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种三颗针多糖的提取方法，包括以下步骤：/>[0006]S1：仪器准备，准备好循环水多用真空泵、恒温水浴锅、数控超声波清洗器、紫外/可见分光光度计、台式高速冷冻离心机、电子分析天平和高速粉碎机；
[0007]S2：原料准备，准备好葡萄糖、浓硫酸、苯酚、无水乙醇、蒸馏水和三颗针，且上述试药均为国产分析纯试剂；
[0008]S3：原料粉碎：将三颗针原料通过中草药粉碎机进行粉碎；
[0009]S4：滤渣获取：称取适量尺寸的三颗针粉末500g置于圆底烧瓶中，采用索氏提取器通过2L无水乙醇回流2.0h，回流完毕后进行过滤，挥干乙醇后保留滤渣备用；
[0010]S5：三颗针提取：精确称取2.0g三颗针固体粉末，按试验设计方案所需提取温度、提取时间、提取次数、液料比进行提取操作；
[0011]S6：三颗针离心：将提取后的提取液经80％体积的无水乙醇醇沉后离心，弃去上清液得到沉淀；
[0012]S7：三颗针多糖获取：将沉淀冷冻干燥后，即得到三颗针粗多糖；
[0013]S8：试验对比：通过试验筛选出提取三颗针多糖的最适条件。
[0014]优选的，所述步骤(六)的试验对比，包括如下步骤：
[0015]S1：对照品准备，将葡萄糖标准品放置在105℃下干燥至恒重，然后精密称取10mg于100mL容量瓶中，用蒸馏水溶解后定容，即可得到质量浓度为100μg/mL的葡萄糖标准储备液，并放置于4℃冰箱内储存备用；
[0016]S2：对照品标准曲线测定，分别吸取对照品储备液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL分别置于7只10mL具塞试管中，依次加入蒸馏水使其终体积为1.0mL，然后向各个具塞试管中分别加入5％苯酚溶液1.0mL，充分摇匀后，迅速加入浓硫酸5.0mL，摇匀后在22℃～28℃放置30min，接着于490nm处测定吸光度；
[0017]S3：标准曲线的绘制，以浓度C为横坐标，以吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：
[0018]A＝0.0099C
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0.0106(R2＝0.999)
[0019]S4：三颗针多糖得率测定，精密称取三颗针多糖1mg溶解于10ml蒸馏水中，配制成0.1mg/ml溶液，然后吸取1ml溶液并加入蒸馏水至2ml，接着加入5％苯酚1ml，摇匀后迅速垂直加入浓硫酸5ml，并充分摇匀，摇匀后冷水浴至温度下降到22℃～28℃，在分光光度计上测定490nm处的吸光度y值，将y值代入回归方程，计算各条件多糖含量：
[0020]得率＝多糖样品中糖的质量(g)/生药质量(g)
[0021]S5：三颗针多糖提取实验，
[0022]a：料液比对三颗针多糖得率的影响试验，固定提取时间为2h，提取温度为80℃，提取次数为1次的条件下，考察不同的料液比1:8、1:11、1:14、1:17、1:20对三颗针多糖得率的影响；
[0023]b：提取温度对三颗针多糖得率的影响试验，固定料液比为1:17，提取时间为2h，提取次数为1次，考察不同提取温度，60℃、70℃、80℃、90℃、100℃对三颗针多糖得率的影响；
[0024]c：提取时间对三颗针多糖得率的影响试验，固定液料比为1:14，提取温度为80℃，提取次数为1次，考察不同提取时间，30min、60min、90min、120min、150min、180min，对三颗针多糖得率的影响；
[0025]S6：实验数据收集，对上述实验的试验数据进行收集和记录；
[0026]S7：试验数据处理，使用软件Design
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Expert(版本8.0.6)中Box
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BehnkenDesign(BBD)进行试验设计，选取液料比(A)、提取温度(B)、提取时间(C)3个对三颗针多糖提取效果有影响的试验因素为自变量，分别以1、0、－1对每个自变量的高、中、低实验水平进行编码，以三颗针多糖得率(Y)为响应值，建立三因素三水平BBD响应面试验研究，利用D
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E软件对实验结果进行数据处理分析；
[0027]S8：试验验证，重复三次得到试验结果，计算多糖得率，以确定三颗针多糖的最优提取工艺。
[0028]优选的，所述步骤(五)在三颗针多糖提取实验的过程中，以液料比、提取温度、提取时间为单因素进行试验，筛选出各因素的最适条件。
[0029]优选的，所述步骤(七)对试验数据处理的过程中，以三颗针多糖得率(Y)为响应值运用Design
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Expert(8.0.6)软件进行响应面分析，得到由响应值与自变量A、B、C所构成的3D响应面图及其二维平面上投影所得的等高线图。
[0030]优选的，所述步骤(八)在试验验证设计的过程中，以A、B、C为自变量，Y(多糖得率)为响应值，建立三颗针多糖得率与提取条件的二次多项式回归方程：
[0031]Y＝0.26
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0.067A
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0.14B+0.073C+0.076AB+0.080AC
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0.0004933BC+0.14A2+0.14B2
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0.094C2
[0032]优选的，所述步骤(八)在试验验证过程中，选取响应面试验分析得出的最佳工艺参数作为提取条件，根据响应面法设计三因素试验考察，本次实验共有分为两种类型的17个试验点，第一类为析因点，是自变量取值在A、B、C所构成的三维顶点本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种三颗针多糖的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：仪器准备，准备好循环水多用真空泵、恒温水浴锅、数控超声波清洗器、紫外/可见分光光度计、台式高速冷冻离心机、电子分析天平和高速粉碎机；S2：原料准备，准备好葡萄糖、浓硫酸、苯酚、无水乙醇、蒸馏水和三颗针，且上述试药均为国产分析纯试剂；S3：原料粉碎：将三颗针原料通过中草药粉碎机进行粉碎；S4：滤渣获取：称取适量尺寸的三颗针粉末500g置于圆底烧瓶中，采用索氏提取器通过2L无水乙醇回流2.0h，回流完毕后进行过滤，挥干乙醇后保留滤渣备用；S5：三颗针提取：精确称取2.0g三颗针固体粉末，按试验设计方案所需提取温度、提取时间、提取次数、液料比进行提取操作；S6：三颗针离心：将提取后的提取液经80％体积的无水乙醇醇沉后离心，弃去上清液得到沉淀；S7：三颗针多糖获取：将沉淀冷冻干燥后，即得到三颗针粗多糖；S8：试验对比：通过试验筛选出提取三颗针多糖的最适条件。2.根据权利要求1所述的一种三颗针多糖的提取方法，其特征在于：所述步骤(六)的试验对比，包括如下步骤：S1：对照品准备，将葡萄糖标准品放置在105℃下干燥至恒重，然后精密称取10mg于100mL容量瓶中，用蒸馏水溶解后定容，即可得到质量浓度为100μg/mL的葡萄糖标准储备液，并放置于4℃冰箱内储存备用；S2：对照品标准曲线测定，分别吸取对照品储备液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL分别置于7只10mL具塞试管中，依次加入蒸馏水使其终体积为1.0mL，然后向各个具塞试管中分别加入5％苯酚溶液1.0mL，充分摇匀后，迅速加入浓硫酸5.0mL，摇匀后在22℃～28℃下放置30min，接着于490nm 处测定吸光度；S3：标准曲线的绘制，以浓度C为横坐标，以吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：A＝0.0099C
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0.0106(R2＝0.999)S4：三颗针多糖得率测定，精密称取三颗针多糖1mg溶解于10ml蒸馏水中，配制成0.1mg/ml溶液，然后吸取1ml溶液并加入蒸馏水至2ml，接着加入5％苯酚1ml，摇匀后迅速垂直加入浓硫酸5ml，并充分摇匀，摇匀后冷水浴至温度下降到22℃～28℃，在分光光度计上测定490nm处的吸光度y值，将y值代入回归方程，计算各条件多糖含量：得率＝多糖样品中糖的质量(g)/生药质量(g)S5：三颗针多糖提取实验，a：料液比对三颗针多糖得率的影响试验，固定提取时间为2h，提取温度为80℃，提取次数为1次的条件下，考察不同的料液比1:8、1:11、1:14、1:17、1:20对三颗针多糖得率的影响；b：提取温度对三颗针多糖得率的影响试验，固定料液比为1:17，提取时间为2h，提取次数为1次，考察不同提取温度，60℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：候冉冉，程磊，李梦瑶，孙俊乐，李友英，许志强，丁城沣，高飞，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：