一种富含营养的固定化冻干微生物菌剂及制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种富含营养的固定化冻干微生物菌剂及制备方法与应用。本发明专利技术提供的富含营养的固定化冻干微生物菌剂的制备方法包括步骤：在液体发酵培养基中加入枯草芽孢杆菌MES 810粉剂和海藻酸钠后，滴入到氯化钙溶液中进行固定化，制得固定化小球，然后进行冷冻干燥，得到富含营养的固定化冻干微生物菌剂。本发明专利技术提供的富含营养的固定化冻干微生物菌剂芽孢萌发速度快，芽孢成活率高，显著提升了菌剂的使用效果，而且不会对土壤和植株造成不利影响。利影响。利影响。

【技术实现步骤摘要】
一种富含营养的固定化冻干微生物菌剂及制备方法和应用


[0001]本专利技术属于微生物菌剂
，具体涉及一种富含营养的固定化冻干微生物菌剂及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]微生物菌剂是指目标微生物(有效菌)经过工业化生产扩繁后，利用多孔的物质作为吸附剂(如草炭、蛭石)，吸附菌体的发酵液加工制成的活菌制剂。这种菌剂用于拌种或蘸根，具有直接或间接改良土壤、恢复地力、预防土传病害、维持根际微生物区系平衡和降解有毒害物质等作用。农用微生物菌剂恰当使用可以提高农产品产量、改善农产品品质、减少化肥用量、降低成本、改良土壤、保护生态环境。
[0003]但是微生物菌剂对使用时的外界环境要求较高，烈日天气紫外线过强影响芽孢萌发，降雨天气雨水稀释菌剂，使使用效果大打折扣。现有的微生物菌剂厂家追求的是产品中含有的芽孢数，对芽孢在短时间内的萌发情况不去要求，但是在日常使用的时候适宜芽孢萌发的环境不会维持很长时间，所以只有少量的芽孢起到了效果，其他的芽孢因为自然原因失去了作用，大大降低了菌剂的实际使用效果和性价比。同时传统微生物菌剂见效缓慢，只有菌株在土壤里大量生长繁殖的时候才可以起到改良土壤、恢复地力、预防土传病害的功效。
[0004]因此，如何保证菌剂中含有大量芽孢又可以使芽孢快速萌发繁殖，是需要解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种富含营养的固定化冻干微生物菌剂及制备方法和应用。本专利技术提供的固定化冻干微生物菌剂芽孢萌发速度快，芽孢成活率高，显著提升了菌剂的使用效果，而且不会对土壤和植株造成不利影响。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种富含营养的固定化冻干微生物菌剂的制备方法，包括步骤：在液体发酵培养基中加入枯草芽孢杆菌粉剂和海藻酸钠后，滴入到氯化钙溶液中进行固定化，制得固定化小球，然后进行冷冻干燥，得到富含营养的固定化冻干微生物菌剂。本专利技术采用的液体发酵培养基组分不是固定的，组分可以如下：大豆蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，水1000mL，pH值为7.0
‑
7.2。
[0008]本专利技术提供的富含营养的固定化冻干微生物菌剂，相比于传统微生物菌剂，不仅可以使芽孢快速萌发，并且萌发后活菌数和芽孢数均优于传统微生物菌剂，将对企业经济效益的提高具有重要的指导意义。
[0009]作为上述方案的进一步改进：
[0010]优选的，枯草芽孢杆菌粉剂中有效活菌数不少于2.5
×
10
10
cfu/g(含芽孢数不低于250亿/g)。
[0011]优选的，海藻酸钠的质量浓度为2.0％
‑
3.5％，优选为3.5％。此处海藻酸钠的质量浓度，是指海藻酸钠相对于液体发酵培养基中水的质量百分比。
[0012]优选的，氯化钙溶液的质量浓度为2.0％
‑
3.5％，优选为2.5％。
[0013]优选的，枯草芽孢杆菌粉剂中的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)MES810，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期为2017年8月10日，保藏编号为：CGMCC No.14514，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本专利技术采用的枯草芽孢杆菌是申请人从张家口马铃薯田地里分离得到，为革兰氏阳性需氧菌，单个细胞大小为(0.7
‑
0.8)μm
×
(2
‑
3)μm，着色均匀；无荚膜，周生鞭毛，能运动；芽孢(0.6
‑
0.9)μm
×
(1.0
‑
1.5)μm，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭；可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。
[0014]优选的，固定化的时间为1
‑
2h。
[0015]优选的，滴入是使用恒流泵以25
‑
35转/分的速度进行滴加，优选为30转/分。
[0016]优选的，固定化小球的直径为3
‑
5mm。固定化小球的直径越大弹性会减小，容易破裂。
[0017]本专利技术还提供了根据上述方法制备得到的富含营养的固定化冻干微生物菌剂。
[0018]本专利技术提供了上述富含营养的固定化冻干微生物菌剂在改良土壤中的应用。
[0019]本专利技术提供的技术方案，具有如下的有益效果：本专利技术提供的方法能有效提高微生物菌剂中芽孢萌发速度、芽孢成活率，大大提升菌剂的使用效果：一是将营养物质与芽孢相结合，在微生物生长的初期，芽孢对周围环境要求较高，遇到合适的天气时却因为周围土壤环境营养缺乏而不能大量繁殖，本专利技术为芽孢初期生长提供了充足的营养；二是本专利技术采用了固定化技术是营养物质和芽孢紧密成团，不会在使用时因为各个物质溶解度的不同而导致渗入不同的土壤深度；三是本专利技术采用了冷冻干燥的方法，避免了温度过高对芽孢的伤害，同时对固定化小球进行干燥处理也使芽孢在富含营养的情况下不会萌发；四是本专利技术采用的是无毒、清洁、易与细胞混匀的海藻酸钠作为包埋载体，通过“钙盐法”来生产固定化的富含营养的菌剂，这种办法简单、实用，生产速度快，珠体质量好，而且不会对土壤和植株造成不利影响。
[0020]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例2中的传统菌剂使用72h后土壤表面效果图；
[0022]图2为本专利技术实施例2中的新型菌剂使用72h后土壤表面效果图。
具体实施方式
[0023]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只是作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0024]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试
验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
[0025]本专利技术涉及的菌株来源具体如下：本专利技术使用的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)MES810保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2017年8月10日，保藏编号为：CGMCC No.14514。该菌种已在专利号C N201710862006.3(专利名称：一种防治马铃薯枯萎病的菌株及其制剂的制备方法和应用)中公开。
[0026]实施例1
[0027]本实施例通过对比不同浓度的海藻酸钠与氯化钙溶液对固定化冻干微生物菌剂机械强度的影响，从而选择出最适海藻酸钠和氯化钙溶液的浓度，优化筛选的检测指标以机械强度为主要指标。
[0028]1、实验方法
[0029]通过筛选不同浓度的海藻酸钠、氯化钙溶液，确定出最佳本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种固定化冻干微生物菌剂的制备方法，其特征在于，包括步骤：在液体发酵培养基中加入枯草芽孢杆菌粉剂和海藻酸钠后，滴入到氯化钙溶液中进行固定化，制得固定化小球，然后进行冷冻干燥，得到所述固定化冻干微生物菌剂。2.根据权利要求1所述的固定化冻干微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌粉剂中有效活菌数不少于2.5
×
10
10
cfu/g。3.根据权利要求1所述的固定化冻干微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述海藻酸钠的质量浓度为2.0%
‑
3.5%，优选为3.5%。4.根据权利要求1所述的固定化冻干微生物菌剂的制备方法，其特征在于：所述氯化钙溶液的质量浓度为2.0%
‑
3.5%，优选为2.5%。5.根据权利要求1所述的固定化冻干微生物菌剂的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：王焱，孙海远，赵晓琛，王淑会，冯美元，
申请(专利权)人：天津开发区坤禾生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：