一种抑制烟叶烘烤变黑的非转基因混合侵染方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及烟叶改良的非转基因方法，特别是指一种抑制烟叶烘烤变黑的非转基因混合侵染方法及其应用。根据NtPPO2、NtPPO7基因全长序列设计VIGS引物对；以K326烟草cDNA为模板，以引物对为引物，PCR扩增目标片段NtPPO2基因片段和NtPPO7基因片段；将目标片段NtPPO2基因片段和NtPPO7基因片段分别与pTRV2

【技术实现步骤摘要】
一种抑制烟叶烘烤变黑的非转基因混合侵染方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及烟叶改良的非转基因方法，特别是指一种抑制烟叶烘烤变黑的非转基因混合侵染方法及其应用。

技术介绍

[0002]烟叶中含有大量的酚类物质，在烘烤过程中烟叶中的多酚氧化酶（Polyphenol oxidase，PPO）将酚类物质氧化成醌类物质，随后与细胞内氨基酸、蛋白质等大分子发生反应生成红褐色物质（黑色素），进而使烟叶褐变成黑糟烟。
[0003]目前主要有3种方法抑制PPO引起的烟叶褐变，这些办法主要依靠烘烤调节、化学抑制剂抑制、转基因抑制3种途径。
[0004]有学者在定色期合理控制烤房温湿度，可以较好地抑制PPO的活性。还有学者在烘烤过程中，将一定酸碱度的K、Ca、Mg盐溶液放入烤房，即可调节烟叶pH值进而抑制褐变。烘烤调节技术要求对烟叶烘烤有着熟练的技巧、丰富的经验和深厚烘烤功底。一般的烘烤技术人员难以达到这样的要求。此方法在实际中烘烤难度很大。
[0005]常见的能够降低PPO活性的抑制剂有硫脲、Lr/>‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抑制烟叶烘烤变黑的非转基因混合侵染方法，其特征在于，步骤如下：（1）根据NtPPO2、NtPPO7基因全长序列设计VIGS引物VIPPO2
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XbaI
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F、VIPPO2
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BamHI
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R、VIPPO7
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XbaI
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F和VIPPO7
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BamHI
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R；（2）以K326烟草cDNA为模板，以步骤（1）的引物为引物，PCR 扩增目标片段NtPPO2基因片段和NtPPO7基因片段；（3）将步骤（2）的目标片段NtPPO2基因片段和NtPPO7基因片段分别与pTRV2
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VIGS载体相连，构建pTRV2
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NtPPO2
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VIGS载体和pTRV2
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NtPPO7
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VIGS载体；（4）将pTRV2
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NtPPO2
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：武兆云，徐世晓，孙聚涛，张小全，张智强，薛刚，杨铁钊，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：