本发明专利技术用酶解提取独一味粗多糖，以酶用量、温度、提取时间、提取次数为影响因素，以多糖提取率为考察因素，通过单因素考察筛选出多糖提取率的最佳影响因素。利用响应面设计，优化得到最佳提取工艺为：温度60℃，提取时间30min，酶药比2％，PH＝8。本发明专利技术通过单因素考察及RSM试验,确定独一味多糖的最佳提取工艺条件为提取时间60min，PH为8,提取温度为60℃；本研究的结果表明酶解提取独一味多糖是一种有效、操作方便、可靠和可行的方法，其最佳提取工艺条件为提取时间60min，PH为8,提取温度为60℃，酶药比2％。
【技术实现步骤摘要】
响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺
本专利技术涉及独一味多糖提取
，具体涉及响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺。
技术介绍
藏药独一味系少数民族用药，最早收载于藏族医药学巨著《四部医典》及《晶珠本草》中，距今已有一千二百年历史。其味甘、微苦，温，主接骨、干黄水。现代临床用于治疗跌打损伤、筋骨疼痛、骨松质发炎等症，具有明显的镇痛、消炎作用，疗效可靠。国内外研究报道，独一味具有抗氧化、抗炎镇痛的药理活性，但全部关注与独一味中的环烯醚萜类，对其中的多糖组分的生物学功能未见有报道。本研究通过对多糖结构的表征，为其抗氧化、免疫调节等生物活性的研究提取前期基础。天然植物多糖属于植物体内一类非常重要的生物大分子,同时也是有效维持和保证生物体生命活动能够正常运转的基本物质,具有抗肿瘤、免疫调节、抗病毒及抗氧化等多种药理作用,可作为天然的免疫调节剂,已成为国内外学者的研究热点之一。目前，提取植物多糖的方法有热水浸提法、酸碱溶液提取法、微波提取法、超声提取法等多种方法。研究报道，使用水提醇沉法可获得独一味多糖，但该提取方法提取率低，而独一味为名贵中药，无法发挥其最大价值。酶尤其是果胶酶、纤维素酶、木瓜蛋白酶，其活性高、易得价廉，可应用于植物多糖的提取，因此本研究使用酶解提取，并优化其提取工艺。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，包括以下步骤：步骤一：将独一味粉末经80％的乙醇加热回流两次，脱脂、脱色、除去低聚糖和小分子杂质，挥干溶剂，得到处理样品；步骤二：称取3g预处理样品，加入适量蒸馏水，浸泡2h，通过加酶量、酶解温度、Ph值单因素的控制，然后再水浴锅中提取，收集上清液并减压浓缩至原体积的20％以下，加入无水乙醇至乙醇最终浓度为80％，在4℃温度下醇沉24h，离心后收集沉淀，利用Sevag法脱蛋白，用截留分子量3500Da的透析袋流水透析48h，最后冻干得到独一味粗多糖；步骤三：在步骤二单因素试验的基础上，利用Box－BehnkenDesign(BBD)中心组合设计，以PPs提取得率Y(％)为响应值，考察加酶量、酶解温度和pH值对提取得率的影响。优选地，所述加酶量为1.0-3.0％；所述PH为4-8；所述酶解温度为20-60℃。优选地，所述提取工艺中采用硫酸-苯酚法测定多糖含量；PPs提取得率(Y)公式:Y(％)＝(M/W)×100％，其中M是多糖的含量，W代表样品净重；以葡萄糖浓度(C)为横坐标，吸光度(Abs)为纵坐标，线性拟合绘制葡萄糖准曲线，获得回归方程为:Abs＝0.06329C-0.03835(R2＝0.9994)。优选地，所述提取工艺中糖含量的测定方法为：称取105℃干燥并恒重的葡萄糖标品0.01g，溶解于超纯水，并定容至100m1，得0.1mg/m1溶液；精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml至吸管中加超纯水补至2ml，各加入5％苯酚溶液1m1，摇匀，垂直液面快速加入浓硫酸5ml，摇匀；冷水浴至温度下降到室温，显色；以空白为对比，用紫外分光光度计测定490mm波长处的吸光度；以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程y＝0.0063x-0.0077(R2＝0.9992)；x为葡萄糖标准品浓度，单位mg/ml，y为吸光度值；计算多糖得率：公式(1)中，y：超声波提取多糖得率(％)；C：由标曲计算所得多糖浓度(mg/mL)；V：定容体积(mL)；N：稀释倍数；m：测定所用得粗多糖质量(mg)；M：粗多糖质量(g)；W：提取用独一味粉末质量(g)。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术通过单因素考察及RSM试验,确定独一味多糖的最佳提取工艺条件为提取时间60min，PH为8,提取温度为60℃；本研究的结果表明酶解提取独一味多糖是一种有效、操作方便、可靠和可行的方法，其最佳提取工艺条件为提取时间60min，PH为8,提取温度为60℃，酶药比2％。附图说明图1为本专利技术提取温度对独一味多糖得率的影响示意图；图2为本专利技术提取时间对独一味多糖得率的影响示意图；图3为本专利技术酶使用量对独一味多糖得率的影响示意图；图4为本专利技术pH对独一味多糖得率的影响示意图；图5为本专利技术独一味多糖红外吸收光谱图；图6为本专利技术独一味多糖紫外吸收图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1本实施例的响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，包括以下步骤：步骤一：将独一味粉末经80％的乙醇加热回流两次，脱脂、脱色、除去低聚糖和小分子杂质，挥干溶剂，得到处理样品；步骤二：称取3g预处理样品，加入适量蒸馏水，浸泡2h，通过加酶量、酶解温度、Ph值单因素的控制，然后再水浴锅中提取，收集上清液并减压浓缩至原体积的20％以下，加入无水乙醇至乙醇最终浓度为80％，在4℃温度下醇沉24h，离心后收集沉淀，利用Sevag法脱蛋白，用截留分子量3500Da的透析袋流水透析48h，最后冻干得到独一味粗多糖；步骤三：在步骤二单因素试验的基础上，利用Box－BehnkenDesign(BBD)中心组合设计，以PPs提取得率Y(％)为响应值，考察加酶量、酶解温度和pH值对提取得率的影响。本实施例的加酶量为1.0-3.0％；所述PH为4-8；所述酶解温度为20-60℃。本实施例的提取工艺中采用硫酸-苯酚法测定多糖含量；PPs提取得率(Y)公式:Y(％)＝(M/W)×100％，其中M是多糖的含量，W代表样品净重；以葡萄糖浓度(C)为横坐标，吸光度(Abs)为纵坐标，线性拟合绘制葡萄糖准曲线，获得回归方程为:Abs＝0.06329C-0.03835(R2＝0.9994)。本实施例的提取工艺中糖含量的测定方法为：称取105℃干燥并恒重的葡萄糖标品0.01g，溶解于超纯水，并定容至100m1，得0.1mg/m1溶液；精密吸取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml至吸管中加超纯水补至2ml，各加入5％苯酚溶液1m1，摇匀，垂直液面快速加入浓硫酸5ml，摇匀；冷水浴至温度下降到室温，显色；以空白为对比，用紫外分光光度计测定490mm波长处的吸光度；以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程y＝0.0063x-0.0077(R2＝0.9992)；x为葡萄糖标准品浓度，单位mg/ml，y为吸光度值；计算多糖得率：公式(1)中，y本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一：将独一味粉末经80％的乙醇加热回流两次，脱脂、脱色、除去低聚糖和小分子杂质，挥干溶剂，得到处理样品；/n步骤二：称取3g预处理样品，加入适量蒸馏水，浸泡2h，通过加酶量、酶解温度、Ph值单因素的控制，然后再水浴锅中提取，收集上清液并减压浓缩至原体积的20％以下，加入无水乙醇至乙醇最终浓度为80％，在4℃温度下醇沉24h，离心后收集沉淀，利用Sevag法脱蛋白，用截留分子量3500Da的透析袋流水透析48h，最后冻干得到独一味粗多糖；/n步骤三：在步骤二单因素试验的基础上，利用Box－Behnken Design(BBD)中心组合设计，以PPs提取得率Y(％)为响应值，考察加酶量、酶解温度和pH值对提取得率的影响。/n
【技术特征摘要】
1.响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：将独一味粉末经80％的乙醇加热回流两次，脱脂、脱色、除去低聚糖和小分子杂质，挥干溶剂，得到处理样品；
步骤二：称取3g预处理样品，加入适量蒸馏水，浸泡2h，通过加酶量、酶解温度、Ph值单因素的控制，然后再水浴锅中提取，收集上清液并减压浓缩至原体积的20％以下，加入无水乙醇至乙醇最终浓度为80％，在4℃温度下醇沉24h，离心后收集沉淀，利用Sevag法脱蛋白，用截留分子量3500Da的透析袋流水透析48h，最后冻干得到独一味粗多糖；
步骤三：在步骤二单因素试验的基础上，利用Box－BehnkenDesign(BBD)中心组合设计，以PPs提取得率Y(％)为响应值，考察加酶量、酶解温度和pH值对提取得率的影响。
2.根据权利要求1所述的响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，其特征在于，所述加酶量为1.0-3.0％；所述PH为4-8；所述酶解温度为20-60℃。
3.根据权利要求1所述的响应面法优化独一味多糖酶解提取工艺，其特征在于，所述提取工艺中采用硫酸-苯酚法测定多糖含量；
PPs提取得率(Y)公式:Y(％)＝(M/W)×100％，其中M是多糖的含量，...
【专利技术属性】
技术研发人员：候冉冉，李雨婷，邵湘玲，王硕宇，姜秩浩，卢道冉，李友英，袁千丝，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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