一种牡丹花蕾提取物及其抑菌用途制造技术

公开了一种牡丹花蕾提取物，由包括如下步骤的制备方法得到：对牡丹花蕾干粉进行溶剂提取和超声波提取；然后使用DM130大孔吸附树脂和聚酰胺树脂纯化。此外，公开了上述提取物用于抑菌的用途，细菌选自金黄色葡萄球菌和大肠杆菌。该提取物针对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌更好。

【技术实现步骤摘要】
一种牡丹花蕾提取物及其抑菌用途
本专利技术属于生物医药
；涉及一种牡丹花蕾提取物及其抑菌用途。
技术介绍
随着我国大众生活水平的提高，绿色、自然、安全的健康理念逐渐为人们所接受。来自动植物等天然产物的研究开发逐渐受到国内外学术界和产业界的关注。我国拥有极其丰富的药用植物资源，而药用植物的提取物通常具有奇特的功能或疗效例如抗病毒、抗氧化、调节血脂、抑菌杀菌和增强免疫等。这其中，从药用植物中获取天然的抗菌物质逐渐成为热门的研究方向。所提取的抑菌物质可以广泛应用于各个领域，如化妆品、食品保鲜、作物防治等。因此，研究药用植物的天然植物抑菌成分，具有普遍的社会需求与令人期待的发展前景。牡丹是毛茛目芍药科芍药属木本植物。牡丹全身都是宝。牡丹根皮，又称丹皮，具有较好的药用作用。牡丹籽油富含不饱和脂肪酸，具有极高的保健和营养价值。牡丹种荚含有植物多糖，对降血糖和提高人体免疫力具有一定的作用。牡丹花蕾富含多酚、黄酮类和花色苷物质，具有抑菌、杀菌和抗炎功效。研究表明，牡丹花蕾中主要含有七种黄酮类物质，分别为山奈酚单糖苷、山奈酚二糖苷、芹黄素单糖苷、芹黄素二糖苷、木犀草素单糖苷、木樨草素二糖苷和木犀草素苹果酰葡萄苷。近年来的研究多涉及到具有抗菌能力的此类黄酮类物质的分离提取方法。唐浩国等人使用乙醇溶液提取牡丹叶干粉中的总黄酮，经大孔吸附树脂HPD600和D101吸附并且使用70％的乙醇水溶液洗脱，旋转蒸发浓缩洗脱液，再经截留分子量1万道尔顿的超滤膜分离，从而将总黄酮类物质的纯度提高至40％。牡丹叶总黄酮对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和沙门氏菌等3种细菌均有一定的抑制作用,其中对沙门氏菌的抑制作用最为显著。然而，上述方法所得到的总黄酮纯度不能令人满意，尤其是大孔吸附树脂纯化后得到的总黄酮针对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌效果甚至不如牡丹叶总黄酮提取液。范敬宜等人首先以不同制膜液配比制备不同孔径的超滤膜，用于牡丹黄酮粗提液的预过滤；然后利用两级不同孔径的纳滤膜进行分级过滤－浓缩牡丹黄酮提取液，以实现牡丹黄酮的精制。最终经过超滤-纳滤组合工艺提纯后所得黄酮纯度从15.6％提升至79％。牡丹黄酮对酪氨酸酶具有明显的抑制作用，其单酚酶为4.8mg/mL，二酚酶为13.8mg/mL，与高效美白剂苯乙基间苯二酚抑制效果比较接近。然而，该超滤-纳滤组合工艺不仅需要两种较为昂贵的卷式纳滤膜组件NWCO-1000和NWCO-300，同时超滤膜也是通过自制不同铸膜液配比调控得到的PES超滤膜；工艺和装置较为复杂。此外，无论是超滤膜还是纳滤膜，使用几次都会出现大分子杂质堆积在膜表面上，从而降低膜通量和膜性能。然而，上述现有技术所得到的牡丹黄酮类提取物针对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果仍然不能令人满意。因此，迫切需要针对上述技术缺陷，提供一种针对上述两种细菌的抑菌更好的牡丹花蕾提取物及其抑菌用途。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种针对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌更好的牡丹花蕾提取物及其抑菌用途。为了实现上述目的，一方面，本专利技术所采取的技术方案如下：一种牡丹花蕾提取物，由包括如下步骤的制备方法得到：(1)对牡丹花蕾干粉先进行溶剂提取，然后在保温条件下进行超声波提取，过滤得到滤液；滤液离心取上清液，冷冻干燥得到粗提物干粉；其中，所述溶剂提取为：以50-70％乙醇溶液作为提取剂进行溶剂提取，料液比为1：10-20(g/mL)，提取温度为60-80℃，所述提取时间为1-3h；超声波提取为：超声波功率为200-300W，超声时间为10-30min；(2)将粗提物干粉溶解于50-70％乙醇溶液，二者的重量体积比为1-2mg：1mL，调节pH＝4-5，得到上样液；将DM130大孔吸附树脂浸泡在90-98％的乙醇溶液中进行预处理；采用湿法装柱，平衡层析柱8-16h上样；将上样液在预处理的DM130大孔吸附树脂上进行上样；上样液的流速为2-6BV/h；然后以50-70％乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱；洗脱剂的流速为2-6BV/h；(3)收集洗脱液，调节浓缩液中总黄酮含量为1-7mg/mL，优选2-6mg/mL，更优选2-4mg/mL，得到聚酰胺树脂的上样液；将聚酰胺树脂浸泡在90-98％乙醇溶液中进行预处理；采用湿法装柱，平衡层析柱8-16h上样；将上样液在预处理的聚酰胺树脂上进行上样；上样液的流速为1-3BV/h；然后以50-70％乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱；洗脱剂的流速为1-3BV/h；收集洗脱液，浓缩蒸发；最后冷冻干燥得到产物干粉。根据本专利技术所述的提取物，其中，所述步骤(1)中，溶剂提取为：以60％乙醇溶液作为提取剂进行溶剂提取，料液比为1：15(g/mL)，提取温度为70℃，提取时间为2h；和/或，超声波提取为：超声波功率为240W，超声时间为20min。根据本专利技术所述的提取物，其中，所述步骤(2)中，粗提物干粉与50-70％乙醇溶液的重量体积比为1.5mg：1mL，调节pH＝4.5。根据本专利技术所述的提取物，其中，所述步骤(2)中，将DM130大孔吸附树脂浸泡在95％的乙醇溶液中进行预处理；采用湿法装柱，平衡层析柱12h上样；和/或，上样液的流速为4BV/h；洗脱剂的流速为4BV/h。根据本专利技术所述的提取物，其中，所述步骤(3)中，调节浓缩液中总黄酮含量为3mg/mL。根据本专利技术所述的提取物，其中，所述步骤(3)中，上样液的流速为2BV/h；洗脱剂的流速为2BV/h；和/或，将聚酰胺树脂浸泡在95％乙醇溶液中进行预处理；采用湿法装柱，平衡层析柱12h上样。另一方面，本专利技术还提供了一种上述牡丹花蕾提取物用于抑菌的用途，所述菌选自金黄色葡萄球菌。根据本专利技术所述的用途，其中，所述金黄色葡萄球菌选自ATCC25923。又一方面，本专利技术还提供了一种上述牡丹花蕾提取物用于抑菌的用途，所述菌选自大肠杆菌。根据本专利技术所述的用途，其中，所述大肠杆菌选自ATCC25922。本专利技术的有益技术效果是：本专利技术的抑菌的牡丹花蕾提取物针对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌更好。不希望局限于任何理论，本专利技术所采取的DM130大孔吸附树脂和聚酰胺树脂的两步树脂纯化步骤导致总黄酮纯度(含量)更高，从而带来了预料不到的技术效果。具体实施方式必须指出的是，除非上下文另外明确规定，否则如本说明书及所附权利要求中所用，单数形式“一”、“一个/种”和“该/所述”既可包括一个指代物，又可包括多个指代物(即两个以上，包括两个)。除非另外指明，否则本专利技术中的数值范围为大约的，并且因此可以包括在所述范围外的值。所述数值范围可在本专利技术表述为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表述这样的范围时，另一个方面包括从所述一个特定值和/或至另一个特定值。相似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，应当理解，所述特定值形成另一个方面。还应当理解，数值范围中每一个的端点在与另一个端点的关系中均是重要的并独立于另一个端点。在说明书和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牡丹花蕾提取物，由包括如下步骤的制备方法得到：/n(1)对牡丹花蕾干粉先进行溶剂提取，然后在保温条件下进行超声波提取，过滤得到滤液；滤液离心取上清液，冷冻干燥得到粗提物干粉；其中，所述溶剂提取为：以50-70％乙醇溶液作为提取剂进行溶剂提取，料液比为1：10-20(g/mL)，提取温度为60-80℃，所述提取时间为1-3h；超声波提取为：超声波功率为200-300W，超声时间为10-30min；/n(2)将粗提物干粉溶解于50-70％乙醇溶液，二者的重量体积比为1-2mg：1mL，调节pH＝4-5，得到上样液；将DM130大孔吸附树脂浸泡在90-98％的乙醇溶液中进行预处理；采用湿法装柱，平衡层析柱8-16h上样；将上样液在预处理的DM130大孔吸附树脂上进行上样；上样液的流速为2-6BV/h；然后以50-70％乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱；洗脱剂的流速为2-6BV/h；/n(3)收集洗脱液，调节浓缩液中总黄酮含量为1-7mg/mL，优选2-6mg/mL，更优选2-4mg/mL，得到聚酰胺树脂的上样液；将聚酰胺树脂浸泡在90-98％乙醇溶液中进行预处理；采用湿法装柱，平衡层析柱8-16h上样；将上样液在预处理的聚酰胺树脂上进行上样；上样液的流速为1-3BV/h；然后以50-70％乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱；洗脱剂的流速为1-3BV/h；收集洗脱液，浓缩蒸发；最后冷冻干燥得到产物干粉。/n...

【技术特征摘要】
1.一种牡丹花蕾提取物，由包括如下步骤的制备方法得到：
(1)对牡丹花蕾干粉先进行溶剂提取，然后在保温条件下进行超声波提取，过滤得到滤液；滤液离心取上清液，冷冻干燥得到粗提物干粉；其中，所述溶剂提取为：以50-70％乙醇溶液作为提取剂进行溶剂提取，料液比为1：10-20(g/mL)，提取温度为60-80℃，所述提取时间为1-3h；超声波提取为：超声波功率为200-300W，超声时间为10-30min；
(2)将粗提物干粉溶解于50-70％乙醇溶液，二者的重量体积比为1-2mg：1mL，调节pH＝4-5，得到上样液；将DM130大孔吸附树脂浸泡在90-98％的乙醇溶液中进行预处理；采用湿法装柱，平衡层析柱8-16h上样；将上样液在预处理的DM130大孔吸附树脂上进行上样；上样液的流速为2-6BV/h；然后以50-70％乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱；洗脱剂的流速为2-6BV/h；
(3)收集洗脱液，调节浓缩液中总黄酮含量为1-7mg/mL，优选2-6mg/mL，更优选2-4mg/mL，得到聚酰胺树脂的上样液；将聚酰胺树脂浸泡在90-98％乙醇溶液中进行预处理；采用湿法装柱，平衡层析柱8-16h上样；将上样液在预处理的聚酰胺树脂上进行上样；上样液的流速为1-3BV/h；然后以50-70％乙醇溶液作为洗脱剂进行洗脱；洗脱剂的流速为1-3BV/h；收集洗脱液，浓缩蒸发；最后冷冻干燥得到产物干粉。


2.根据权利要求1所述的提取物，其中，所述步骤(1)中，溶剂提取为：以60％乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘瑞强，王汝芹，
申请(专利权)人：山西为众生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山西;14