新型CLDN 18.2特异性单克隆抗体及其使用方法技术

本文提供了新颖的抗CLDN 18.2抗体和嵌合抗原受体（CAR）、包含其的细胞或组合物、编码抗CLDN 18.2 CAR的载体或质粒、抗CLDN18.2抗体‑药物缀合物（ADC）、含有抗CLDN 18.2抗体的双特异性抗体、及其产生方法、或将其用于检测或治疗卵巢癌或前列腺癌的方法。本文还提供了抗CLDN 18.2抗体、包含其的组合物、编码其的核酸序列、以及用于检测CLDN 18.2的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型CLDN18.2特异性单克隆抗体及其使用方法相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2018年7月25日提交的美国临时申请62/703,036号的优先权，其内容在此通过引用合并于本专利技术。
本专利技术涉及新颖的CLDN18.2抗体和由其衍生的嵌合抗原受体(CAR)、包含它们的细胞或组合物、以及将其用于治疗包括实体瘤的治疗的方法。
技术介绍
紧密连接蛋白(claudin)-18(一种紧密连接分子)的同种型2(CLDN18.2)已知为选择性谱系标记。已经观察到它在原发性胃癌和转移中有很大比例表达。在胰腺、食道、卵巢和肺部肿瘤中也发现了外源性激活。尽管CLDN18.2在正常组织中的表达受到高度限制，但在多种癌症中都被异位激活。参见Sahinetal.,Claudin-18splicevariant2isapan-cancertargetsuitablefortherapeuticantibodydevelopment,Clin.CancerRes.2008；14)23(:7624–34。因此，针对这种同种型的抗体可用于治疗胃肠道(GI)肿瘤，例如胃、胰腺、食道、卵巢和肺部肿瘤(例如IMAB362(claudiximab，开发自GanymedPharmaceuticalsAG)。专利技术概述本专利技术提供了针对CLDN18.2的新型抗体及其组合物和使用方法。更具体地，本专利技术提供了用于治疗表达CLDN18.2的肿瘤(例如GI肿瘤，其包括但不限于胃、胰腺、食道、胆道、结直肠、结肠、直肠、卵巢和肺癌)的新型抗CLDN18.2抗体。靶标CLDN18.2在这些肿瘤的大多数中高度表达，但脱靶阳性率受到限制，因此具有理想的安全性。因此，一方面，所述组合物特别可用于治疗表达或过表达CLDN18.2的肿瘤或癌细胞。在一方面，本专利技术提供了分离的抗体，所述抗体包含重链(HC)免疫球蛋白可变域序列和轻链(LC)免疫球蛋白可变域序列，其中所述抗体结合CLDN18.2的表位。一方面，抗体结合CLDN18.2的表位，但不结合CLDN18.1的表位。一方面，该抗体是人源化抗体，其包含表3中鉴定的CDR中的一个或更多个、两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个、五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个或全部八个，以及表4中公开的抗体。在另一方面，所述抗体以高特异性结合，即它们以与表达CLDN18.2的细胞的结合的大于80％、或者大于85％、或者大于90％、或者大于95％的亲和力与CLDN18.2结合，而以小于20％、或者小于15％、或者小于10％，或者小于5％的亲和力与CLDN18.1结合。这样的例子在图1a、1b和9中示出。在那里，抗体对于表达CLDN18.2的肿瘤细胞更具特异性，并且由于它们不与表达CLDN18.1的正常细胞结合而具有较低的毒性。在一些实施方案中，抗体是对第二靶蛋白具有结合特异性的双特异性抗体。在一些实施方案中，第二靶蛋白选自IL-1、CD3、CD16、CD19、CD28、CD47、CD64、PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG-3、CD28、CD122、4-1BB、TIM3、OX-40、OX40L、CD40、CD40L、LIGHT、ICOS、ICOSL、GITR、GITRL、TIGIT、CD27、VISTA、B7H3、B7H4、HEVM、BTLA以及KIR。在一些实施方案中，抗体被包含在抗体和另一种试剂(例如毒素或药物)之间形成的抗体药物缀合物(ADC)中。在一些实施方案中，抗体可以缀合至治疗剂、前药、肽、蛋白质、酶、病毒、脂质、生物反应修饰剂、药剂和/或聚乙二醇(PEG)。在另一方面，本专利技术提供了本文所公开的分离的抗CLDN18.2抗体或其片段以及可检测或纯化的标记，其单独存在或与CLDN18.2抗原或其片段(例如VH1、VH2、VH3、VL1、VL2、VL3，重链和轻链CDR1、CDR2、CDR3)一起，其在一方面彼此结合形成抗原/抗体复合物。本文进一步提供了包含该抗原/抗体复合物的离体细胞。本专利技术的方面涉及一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含：(a)CLDN18.2抗体的抗原结合结构域(例如VH1、VH2、VH3、VL1、VL2、VL3，重链和轻链CDR1、CDR2、CDR3)；(b)铰链结构域；(c)跨膜结构域；以及(d)细胞内结构域。本专利技术的其他方面涉及一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含：(a)CLDN18.2抗体的抗原结合结构域(例如VH1、VH2、VH3、VL1、VL2、VL3，重链和轻链CDR1、CDR2、CDR3)；(b)铰链结构域；(c)CD28跨膜结构域；(d)选自CD28共刺激信号传导区域、4-1BB共刺激信号传导区域、ICOS共刺激信号传导区域和OX40共刺激区域的一个或多个共刺激区域；以及(e)CD3ζ信号传导结构域及其替代物。在另一方面，本专利技术提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含：(a)抗CLDN18.2抗体的抗原结合结构域(例如VH1、VH2、VH3、VL1、VL2、VL3，重链和轻链CDR1、CDR2、CDR3)，(b)CD8α铰链结构域；(c)CD8α跨膜结构域；(d)CD28和/或4-1BB共刺激信号传导区域；以及(e)CD3ζ信号传导结构域及其替代物。在另一方面，本专利技术提供了一种分离的核酸序列，其编码抗CLDN18.2抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体或抗CLDN18.2CAR。在另一方面，本专利技术提供了一种载体，其包含编码抗CLDN18.2抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、人源化抗体或抗CLDN18.2CAR的分离的核酸序列。在另一方面，本专利技术提供了一种载体，其包含编码抗CLDN18.2抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、人源化抗体或抗CLDN18.2CAR的分离的核酸序列。在另一方面，本专利技术提供了一种组合物，其包含载体和以下中的一种或多种：抗CLDN18.2抗体；和/或双特异性抗体；和/或嵌合抗体；和/或人源化抗体；和/或抗CLDN18.2CAR；和/或编码抗CLDN18.2抗体双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体或抗CLDN18.2CAR的分离的核酸；和/或包含编码抗CLDN18.2抗体、双特异性抗体、嵌合抗体、人源化抗体或抗CLDN18.2CAR的分离的核酸序列的载体；和/或包含抗CLDN18.2CAR的分离细胞。在一个方面，本专利技术提供了一种组合物，其包含载体和以下中的一种或多种，或基本上由其组成，或由其组成：抗体或其片段(例如VH1、VH2、VH3、VL1、VL2、VL3，重链和轻链CDR1、CDR2、CDR3)，编码抗体或其片段(例如VH1、VH2、VH3、VL1、VL2、VL3，重链和轻链CDR1、CDR2、CDR3)的核酸，包含编码抗体或其片段(例如VH1、VH2、VH3、VL1、VL2、VL3，重链和轻链CDR1、CDR2、CDR3)的核酸的载体，包含抗CLDN18.2CAR和/或编码抗体或其片段(例如VH1、VH2、VH3、VL1、VL2、VL3，重链和轻链CDR1、CDR2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的抗体，其包含重链（HC）免疫球蛋白可变域序列和轻链（LC）免疫球蛋白可变域序列，其中所述抗体结合CLDN 18.2的表位，并且不结合CLDN 18.1。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180725 US 62/703,0361.一种分离的抗体，其包含重链（HC）免疫球蛋白可变域序列和轻链（LC）免疫球蛋白可变域序列，其中所述抗体结合CLDN18.2的表位，并且不结合CLDN18.1。


2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述HC包含以下中的一个或多个：
（a）CDR1，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)GFTFSSYA，(ii)GFTFSDYY，(iii)GFNIKDYF，(iv)GYSFTGYN，(v)GFSLTSYG，(vi)GYNMN或其每一个的等效物；
（b）CDR2，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)ISGGGST，(ii)ISDGGGDT，(iii)IDPENGDT，(iv)ISNGGGST，(v)INPYNGGT，(vi)IWSDGRT，(vii)LINPYNGGTRYNQKFKG或其每一个的等效物；和/或
（c）CDR3，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)ARGGNIYDGYPYYFDY，(ii)GGNIYDGYPYYFDY，(iii)ARHRGSLDY，(iv)NVLGYGNYGHFYYAMDY，(v)ARHRGSLDF，(vi)ARMGLGNAMDY，(vii)ARHGRYDPYAMDY，(viii)MGLGNAMDY或其每一个的等效物；
所述LC包含以下中的一个或多个：
（a）CDR1，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)QNLLNSSNQKNY，(ii)ESVDNYGFSF，(iii)QSLVHSNGNTY，(iv)QNLLNSGNQKNY，(v)KSSQNLLNSGNQKNYLT或其每一个的等效物；
（b）CDR2，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)FAS，(ii)RAS，(iii)KVS，(iv)WAS，(v)WASTMES或其每一个的等效物；和/或
（c）CDR3，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)QQHYSTPLT，(ii)QQSNQGPLT，(iii)SQNTHVPRT，(iv)QQSNKVPLT，(v)QNDYIYPLP或其每一个的等效物。


3.根据权利要求1所述的抗体，其中HC可变区包含选自以下的多肽：
(a)EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISGGGSTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSYLRSEDTAVYYCARGGNIYDGYPYYFDYWGQGTTLTVSS
(b)EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCATSGFTFSDYYMFWIRQTPEKRLEWVASISDGGGDTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSRLKSEDTAMYYCARHRGSLDYWGQGTTLTVSS
(c)EVQLQQSGTELVRSGASVKLSCTTSGFNIKDYFLHWVKQRPEQGLEWIGWIDPENGDTKYAPKFQDKVTMTVDTSSNTACLHLSSLTSDDTAVYYCNVLGYGNYGHFYYAMDYWGQGTSVTVSS
(d)EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCATSGFTFSDYYMYWVRQTPEKRLEWVAYISNGGGSTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSRLKSEDTAMYYCARHRGSLDFWGQGTTLTVSS
(e)EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTGYNMNWVKQTHGKNLEWIGLINPYNGGTRYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYFCARMGLGNAMDYWGQGTSVTVSS
(f)QVQLKESGPGLVAPSQSLSITCTISGFSLTSYGIHWVRQPPGKGLEWLVVIWSDGRTTYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAMYYCARHGRYDPYAMDYWGQGTSVTVSS
(g)EVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFTGYNMNWVKQTHGKNLEWIGLINPYNGGTRYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYFCARMGLGNAMDYWGQGTSVTVSS
(h)EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTGYNMNWVRQMPGKGLEWMGLINPYNGGTRYNQKFKGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYFCARMGLGNAMDYWGQGTTVTVSS
(i)EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTGYNMNWVRQMPGKNLEWIGLINPYNGGTRYNQKFKGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYFCARMGLGNAMDYWGQGTTVTVSS
LC可变区包含选自以下的多肽：
(a)DIVMTQSPSSLAMSVGQKVTMSCKSSQNLLNSSNQKNYLAWYQQKPGQSPKLLVYFASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQQHYSTPLTFGAGTKLELK
(b)DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGFSFLHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLASGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVETDDVATYYCQQSNQGPLTFGAGTKLELK
(c)DVVMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSLVHSNGNTYLHWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSESGTDFTLKISRVEAEDLGIYFCSQNTHVPRTFGGGTKLEIR
(d)DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDNYGFSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSWSRTDFTLTINPVETDDVATYYCQQSNKVPLTFGAGTKLELK
(e)DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQNLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTMESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYIYPLPFGAGTKLELK
(f)DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQNLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTMESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYIYPLPFGQGTKLEIK
(g)DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQNLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTMESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYIYPLPFGAGTKLELK
(h)DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQNLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTMESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYIYPLPFGQGTKLEIK
(i)DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQNLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTMESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDYIYPLPFGQGTKLEIK，
或其等效物。


4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体，其包含表4所示的重链和轻链组合。


5.根据权利要求1-3所述的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体、嵌合或人源化抗体和/或被包含在免疫缀合物或抗体药物缀合物（ADC）中。


6.根据权利要求5所述的抗体，其中所述双特异性抗体具有对第二靶蛋白特异的结合，所述第二靶蛋白选自IL-1、CD3、CD16、CD19、CD20、CD28、CD64、PD-1、PD-L1、CTLA-4、LAG-3、CD28、CD122、4-1BB、TIM3、OX-40、OX40L、CD40、CD40L、LIGHT、ICOS、ICOSL、GITR、GITRL、TIGIT、CD27、VISTA、B7H3、B7H4、HEVM、BTLA和KIR。


7.根据权利要求5所述的抗体，其中所述免疫缀合物或所述抗体药物缀合物（ADC）包含所述抗体和另外的试剂。


8.根据权利要求7所述的抗体，其中所述另外的试剂选自毒素、药物、治疗剂、前药、肽、蛋白质、酶、病毒、脂质、生物反应修饰剂、药剂和/或聚乙二醇（PEG）。


9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体选自单克隆抗体、嵌合抗体或人源化抗体。


10.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含选自Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv和Fv的抗原结合片段。


11.根据权利要求1至10中任一项所述的抗体，其中所述抗体是针对CLDN18.2片段或其等效物而产生的。


12.根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，其中等效物包括与多肽具有至少80％氨基酸同一性的多肽或由在高严格条件下与编码多肽的多核苷酸的互补序列杂交的多核苷酸编码的多肽。


13.一种嵌合抗原受体（CAR），其包含：（a）CLDN18.2抗体的抗原结合结构域，（b）CD8α铰链结构域；（c）CD8α跨膜结构域；（d）4-1BB共刺激信号传导区域；以及（e）CD3ζ信号传导结构域。


14.根据权利要求13所述的CAR，其中所述抗CLDN18.2抗体的抗原结合结构域包含抗CLDN18.2重链（HC）可变区和抗CLDN18.2轻链（LC）可变区。


15.根据权利要求14所述的CAR，其进一步包含位于抗CLDN18.2HC可变区和抗CLDN18.2LC可变区之间的接头多肽。


16.根据权利要求14或15所述的CAR，其中所述HC包括以下中的一个或多个：
（a）CDR1，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)GFTFSSYA，(ii)GFTFSDYY，(iii)GFNIKDYF，(iv)GYSFTGYN，(v)GFSLTSYG，(vi)GYNMN或其每一个的等效物；
（b）CDR2，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)ISGGGST，(ii)ISDGGGDT，(iii)IDPENGDT，(iv)ISNGGGST，(v)INPYNGGT，(vi)IWSDGRT，(vii)LINPYNGGTRYNQKFKG或其每一个的等效物；和/或
（c）CDR3，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)ARGGNIYDGYPYYFDY，(ii)0GGNIYDGYPYYFDY，(iii)ARHRGSLDY，(iv)NVLGYGNYGHFYYAMDY，(v)ARHRGSLDF，(vi)ARMGLGNAMDY，(vii)ARHGRYDPYAMDY，(viii)MGLGNAMDY或其每一个的等效物；
所述LC包含以下中的一个或多个：
（a）CDR1，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)QNLLNSSNQKNY，(ii)ESVDNYGFSF，(iii)QSLVHSNGNTY，(iv)QNLLNSGNQKNY，(v)KSSQNLLNSGNQKNYLT或其每一个的等效物；
（b）CDR2，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)FAS，(ii)RAS，(iii)KVS，(iv)WAS，(v)WASTMES或其每一个的等效物；和/或
（c）CDR3，其包含选自以下的氨基酸序列：(i)QQHYSTPLT，(ii)QQSNQGPLT，(iii)SQNTHVPRT，(iv)QQSNKVPLT，(v)QNDYIYPLP或其每一个的等效物。


17.根据权利要求14或15所述的CAR，其中HC可变区包含选自以下的多肽：
(a)EVKLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGFTFSSYAMSWVRQTPEKRLEWVASISGGGSTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMSYLRSEDTAVYYCARGGNIYDGYPYYFDYWGQGTTLTVSS
(b)EVKLVESGGGLVQPGGSLKLSCATSGFTFSDYYMFWIRQTPEKRLEWVASISDGGGDTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSRLKSEDTAMYYCARHRGSLDYWGQGT...

【专利技术属性】
技术研发人员：林海山，理查德·张，
申请(专利权)人：阿克罗斯生物科学公司，
类型：发明
国别省市：美国;US