一种替米考星肠溶制剂有关物质的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种替米考星肠溶制剂有关物质的检测方法，其过程包括供试样品的前置处理、对照品标准液配制、采用高效液相色谱进行检测、计算有关物质等步骤。通过供试样品的前置处理能有效提高检测数据的重现性和稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种替米考星肠溶制剂有关物质的检测方法
本专利技术属于药物分析
，涉及一种兽用药物制剂的有关物质检测方法，特别涉及替米考星肠溶制剂的有关物质检测方法。技术背景呼吸道系统疾病已成为我国许多规模化猪场和农村养殖大户十分关注的问题，是当前影响我国养殖业发展的主要疾病，给我国养殖业造成巨大的经济损失。替米考星具有抗菌谱广、抗菌活性强、耐药性低、毒副作用小等优势，该药先后在澳大利亚、巴西、法国、马来西亚、意大利、西班牙、美国等国家被批准临床用药，治疗猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病、猪气喘病等畜禽呼吸道感染效果明显。目前替米考星批准用于猪的剂型只有预混剂，然而由于替米考星苦味重，适口性较差，因此普通的替米考星预混剂在拌料给药时，对于采食量较大的猪（如种猪、母猪、育肥猪等）会造成采食量降低、药物摄入量不足，影响动物生长性能及药物治疗效果，同时替米考星内服对胃有刺激性作用，长期使用也会造成动物生产性能下降，因此开发了兽用替米考星肠溶制剂。产品的有关物质的控制对产品质量控制至关重要，而目前在国内外并无对替米考星肠溶制剂有关物质检测方法的报道。参照国内替米考星原料和替米考星预混剂及USP中替米考星原料和替米考星注射液的检测方法进行替米考星肠溶颗粒的有关物质检测，检测结果偏低，不准确，不能真实反应产品质量特征；国内常用的肠溶制剂多为人用药的肠溶胶囊剂或肠溶片剂，检测方法多为稀释液直接稀释溶解法，而替米考星肠溶颗粒因其为颗粒包衣，较片剂包衣的制剂，单位质量的药物包裹的包衣液较高，参照人用药方法的助力方法并不适用。因此，为了保证该制剂在研究、生产、贮存、销售和使用过程中的质量，确保药品安全有效，亟待开发一种兽用替米考星肠溶颗粒制剂有关物质的检测方法，以特性的、高效的检测产品的有关物质。
技术实现思路
基于以上实际运用中存在的问题，本专利技术旨在提供一种替米考星肠溶制剂的有关物质的检测方法。该检测方法检测线性关系良好，替米考星对照品溶液浓度适用范围为0.02~0.12mg/ml，线性范围广，实用性强，可用于肠溶制剂的替米考星。本专利技术提供一种替米考星肠溶制剂有关物质检测方法的前置处理方法，具体为：将待测替米考星肠溶制剂研磨成粉末，精密称定待测替米考星肠溶制剂粉末，加入pH值为6.5~7.0的磷酸盐缓冲液超声处理15~20分钟，放置于室温后加入乙腈，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液稀释至体积总量，过滤，取滤液，得供试样品溶液，其中待测替米考星肠溶制剂中替米考星、磷酸盐缓冲液、乙腈、体积总量的质量体积比为：0.08~0.48g:5~20ml:10~20ml:50ml。优选的，所述磷酸盐缓冲液制备方法为：取0.1mol/L的盐酸溶液和0.2mol/L的磷酸钠溶液，按3:1的体积比混合均匀，用2mol/L的盐酸和2mol/L的氢氧化钠调节pH为6.5~7.0。优选的，所述的pH为2.4~2.6的磷酸溶液配制方法为5.66~7.76g磷酸加水900ml，用12.5mol/L的氢氧化钠溶液调节pH为2.4~2.6，加水至1000ml制得。所述过滤为经0.45μm微孔滤膜过滤。基于前置处理的方法，本专利技术提供了一种替米考星肠溶制剂有关物质检测方法，具体如下：（1）供试样品的前置处理：将待测替米考星肠溶制剂研磨成粉末，精密称定待测替米考星肠溶制剂粉末，置于可定容的容器中，加入pH值为6.5~7.0的磷酸盐缓冲液中超声溶解，放至室温后加入乙腈，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液稀释至定容总量，过滤，取其滤液，得供试样品溶液，其中替米考星（待测替米考星肠溶制剂中的替米考星）、磷酸盐缓冲液、乙腈、定容总量的质量体积比为0.08~0.48g:5~20ml:10~20ml:50ml；（2）对照品标准液配制：精密称定替米考星标准样品适量，加乙腈制成每1ml含0.1~0.6mg的替米考星溶液，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液将所配制替米考星溶液稀释定容至5倍体积，稀释后浓度为0.02~0.12mg/ml的替米考星溶液，摇匀制得；（3）参照《中华人民共和国兽药典2015版》高效液相色谱附录0512，精密量取供试样品和对照品标准液溶液，分别注入液相色谱仪，以水-磷酸二丁胺溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，记录色谱图至替米考星顺式异构体峰保留时间的2倍，检测采用条件为：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；进样量10μl；检测波长280nm；流速为1.1ml/min；理论塔板数按照替米考星顺式峰计算不低于3000；替米考星反式异构相对保留时间为0.9（反式异构为两个不完全分开的峰），替米考星顺式异构体的相对保留时间为1.0，替米考星顺式-8-差向异构体保留时间为1.1；所述流动相A（水-磷酸二丁胺溶液）的制备过程为：取磷酸加水稀释至磷酸原体积的10倍，配制成备用磷酸溶液；取二丁胺16.8ml，加入所述备用磷酸溶液70ml，边加边搅拌，冷却后用磷酸调节pH为2.4~2.6，加水稀释至100ml，制得磷酸二丁胺溶液；按照水、磷酸二丁胺溶液体积比975:25的配比配制成水-磷酸二丁胺溶液。所述梯度洗脱的程序为：0~30min：流动相A（水-磷酸二丁胺溶液）由82%梯度变化至60%，流动相B（乙腈）由18%梯度变化至40%。（4）供试品溶液的色谱图中杂质（除顺式、反式和顺式-8-差向异构体外的物质）含量按下式计算，其中所述杂质单个不得过3.0%，各杂质的和不得过10%，色谱图中任何小于对照品溶液顺式异构体峰面积0.01倍的峰可忽略不计，式中，A为供试品溶液色谱图中除顺式、反式和顺式-8-差向异构体，有关物质的峰面积的和或单个有关物质峰面积；As为对照品溶液色谱图中顺式和反式异构体峰面积和；Ws为对照品的重量，mg；W为供试品重量，mg；P为对照品的顺式和反式异构体的含量；C为替米考星肠溶颗粒的标示量；n为对照品与供试品的稀释倍数比。优选的，前置处理的线性关系良好，替米考星对照品溶液浓度适用范围达到0.02~0.12mg/ml，在此范围内，前处理过程较为灵活，以下前处理的试剂的用量均可满足检测要求：称取相当于0.08~0.48g替米考星的待测替米考星肠溶制剂粉末，加入pH值为6.8的磷酸盐缓冲液10ml，超声处理20min，放至室温后加入乙腈20ml，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液稀释至总体积50ml；经0.45μm微孔滤膜过滤，取溶液。称取相当于0.08~0.48g替米考星的待测替米考星肠溶制剂粉末，加入pH值为6.7的磷酸盐缓冲液10ml，超声处理15min，放至室温后加入乙腈10ml，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液稀释至总体积50ml；经0.45μm微孔滤膜过滤，取溶液。称取相当于0.08~0.48g替米考星的待测替米考星肠溶制剂粉末，加入pH值为6.9的磷酸盐缓冲液20ml，超声溶解15min，放至室温后加入乙腈10ml，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液稀释至总体积50ml；经0.4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种替米考星肠溶制剂有关物质检测方法的前置处理方法，其特征在于，将待测替米考星肠溶制剂研磨成粉末，精密称定待测替米考星肠溶制剂粉末，加入pH值为6.5~7.0的磷酸盐缓冲液超声处理，放置于室温后加入乙腈，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液稀释至体积总量，过滤，取滤液，得供试样品溶液，其中替米考星、磷酸盐缓冲液、乙腈、体积总量的质量体积比为：0.08~0.48g:5~20ml:10~20ml:50ml。/n

【技术特征摘要】
1.一种替米考星肠溶制剂有关物质检测方法的前置处理方法，其特征在于，将待测替米考星肠溶制剂研磨成粉末，精密称定待测替米考星肠溶制剂粉末，加入pH值为6.5~7.0的磷酸盐缓冲液超声处理，放置于室温后加入乙腈，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液稀释至体积总量，过滤，取滤液，得供试样品溶液，其中替米考星、磷酸盐缓冲液、乙腈、体积总量的质量体积比为：0.08~0.48g:5~20ml:10~20ml:50ml。


2.根据权利要求1所述一种替米考星肠溶制剂有关物质检测方法的前置处理方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液制备方法为：取0.1mol/L的盐酸溶液和0.2mol/L的磷酸钠溶液，按3:1的体积比混合均匀，用2mol/L的盐酸和2mol/L的氢氧化钠调节pH为6.5~7.0。


3.根据权利要求1所述的一种替米考星肠溶制剂有关物质检测方法的前置处理方法，其特征在于，所述的pH为2.4~2.6的磷酸溶液配制方法为称取5.66~5.76g磷酸加水900ml，用12.5mol/L的氢氧化钠溶液调节pH为2.4~2.6，加水至1000ml制得。


4.根据权利要求1所述的一种替米考星肠溶制剂有关物质检测方法的前置处理方法，其特征在于，所述过滤为采用0.45μm微孔滤膜过滤。


5.一种替米考星肠溶制剂有关物质的检测方法，采用权利要求1~4中任一项所述的一种替米考星肠溶制剂有关物质检查的前置处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）供试样品的前置处理：配制pH值为6.5~7.0的磷酸盐缓冲液和pH为2.4~2.6的磷酸溶液，精密称定相当于0.08~0.48g替米考星的待测替米考星肠溶制剂粉末，置于可定容的容器中，加入pH值为6.5~7.0的磷酸盐缓冲液，超声处理，放冷至室温后加乙腈，再加入pH为2.4~2.6的磷酸溶液稀释至定容总量，过滤取滤液，得供试样品溶液，所述替米考星、磷酸盐缓冲液、乙腈、定容总量的质量体积比为：0.08~0.48g:5~20ml:10~20ml:50ml；
（2）对照品标准液配制：精密称定替米考星标准样品，加入乙腈，配制成浓度为0.1~0.6mg/ml的替米考星溶液，再用pH为2.4~2.6的磷酸溶液将所述替米考星溶液稀释定容至5倍体积，摇匀制得；
（3）参照《中华人民共和国兽药典2015版》高效液相色谱附录0512，精密量取供试样品和对照品标准溶液，分别注入液相色谱仪，以水-磷酸二丁胺溶液为流动相A，乙腈为流动相B进行梯度洗脱，记录色谱图至替米考星顺式异构体峰保留时间的2倍；检测采用条件为：填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；进样量10μl；检测波长280nm；流速为1.1ml/min；理论塔板数按照替米考星顺式峰计算不低于3000；替米考星反式异构体相对保留时间为0.9，替米考...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪娇，聂丽娜，刘爱玲，李守军，李亚玲，曹春芳，吴燕子，
申请(专利权)人：天津瑞普生物技术股份有限公司，瑞普天津生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12