一种依替巴肽注射液杂质及其制备和检测方法技术

本发明专利技术提供一种依替巴肽注射液杂质及其制备方法和检测方法，属于制药技术领域。式I所示的杂质，其结构式如下所示。本发明专利技术对依替巴肽注射液进行高温破坏和酸破坏时，制备式I所示的杂质。本发明专利技术可以分离制备式I所示的杂质，为依替巴肽注射液的杂质检测提供了新的对照品，更有利于依替巴肽注射液中有关物质检测方法的开发，从而控制产品质量。

【技术实现步骤摘要】
一种依替巴肽注射液杂质及其制备和检测方法
本专利技术属于制药
，具体涉及一种依替巴肽注射液杂质及其制备方法和检测方法。
技术介绍
依替巴肽注射液商品名为INTEGRILIN，由SCHERINGCORP开发，并于1998年05月18日经FDA批准在美国上市。依替巴肽注射液是一种血小板聚集抑制剂。临床上应用于治疗急性冠状动脉综合征(不稳定型心绞痛/非ST段抬高性心肌梗死)患者，包括接受药物治疗的患者和进行经皮冠状动脉介入术(PCI)的患者，以降低死亡或新发生心肌梗死的联合终点发生率。在美国已经使用了近22年，安全有效。2020年05月14日，国家药品监督管理局发布了《关于开展化学药品注射剂仿制药质量和疗效一致性评价工作的公告》(2020年第62号)，要求注射剂仿制药品与原研药品质量和疗效的一致性，其中比较重要的一个方面就是杂质谱的一致性研究。依替巴肽注射液在稳定性期间会逐渐降解产生杂质，如果不对其中的杂质进行结构确定，将会给依替巴肽注射液的质量控制带来较大的风险；只有通过确定杂质化学结构，了解杂质产生机理，进而对该步反应操作进行有效的控制，才能确保依替巴肽注射液符合质量要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是在现有技术的基础上，提供一种依替巴肽注射液杂质。本专利技术的另一目的是提供上述依替巴肽注射液杂质的制备方法。本专利技术的第三个目的是提供依替巴肽注射液中上述杂质的检测方法。本专利技术的第四个目的是该杂质在检测依替巴肽注射液的质量方面的应用。本专利技术的技术方案如下：式I所示的杂质，其结构式如下所示：本专利技术还提供式I所示的杂质的制备方法，其包括以下步骤：依替巴肽注射液在稳定性期间会逐渐降解产生杂质，且随着稳定性放样时间的延长，杂质降解量不断增加。本专利技术的专利技术人在依替巴肽注射液中发现式I所示的杂质，且随着稳定性放置时间的延长，该杂质含量会超过鉴定阈值0.2％，目前没有文献报道依替巴肽注射液中含有该未知杂质。参照ICH指导原则，有必要了解该未知杂质的产生机理，并进一步制备分离，通过LC-MS、NMR等表征手段对该杂质进行结构确定，从而有效控制依替巴肽注射液的产品质量。基于对依替巴肽的结构分析，本专利技术的专利技术人分别采用高温、酸、碱、氧化等破坏条件，对依替巴肽注射液和依替巴肽原料药的水溶液进行破坏研究，考察该未知杂质的降解途径。专利技术人在高温和酸破坏样品中均检测到了该未知杂质，且在酸破坏条件下，该杂质降解明显。因此，该未知杂质的降解途径主要为高温破坏和酸破坏。本专利技术将依替巴肽注射液和依替巴肽原料药的水溶液进行高温破坏时，此处的高温一般指75℃～100℃。在一种优选方案中，本专利技术的专利技术人将依替巴肽注射液进行高温破坏时，它包括如下步骤：依替巴肽注射液在75℃～85℃的条件下进行化学反应，制备式I所示的杂质。在一种更优选方案中，依替巴肽注射液进行高温破坏时，反应温度为80℃，反应时间为18～30小时，优选为24小时。在一种方案中，本专利技术将依替巴肽注射液进行酸破坏时，它包括如下步骤：将依替巴肽注射液与酸溶液在20℃～70℃的条件下进行化学反应，制备式I所示的杂质。对于本专利技术而言，依替巴肽注射液进行酸破坏时，所采用的酸为无机酸，可以但不局限于盐酸、硫酸或硝酸中的一种，例如，可以选择盐酸。在一种优选方案中，依替巴肽注射液进行酸破坏时，酸溶液的浓度为1～3mol/L，优选为1～2mol/L，更优选为2mol/L。本专利技术提及的依替巴肽注射液中依替巴肽的浓度为0.75mg/mL～2mg/mL，优选为1mg/mL。在一种优选方案中，依替巴肽注射液进行酸破坏时，依替巴肽注射液与酸溶液的体积比为1:15～40，优选为16.7～33:1；例如，16.7:1或33.3:1。在一种优选方案中，依替巴肽注射液进行酸破坏时，反应温度为25℃～60℃。进一步地，反应时间为10～20小时，优选为16小时。对于依替巴肽注射液进行酸破坏时制备的式I所示的杂质，专利技术人尝试采用高效液相色谱分离该杂质，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为WelchUltimateAQ，采用流动相A1和流动相B1为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A1为磷酸盐缓冲液，所述流动相B1为乙腈；所述梯度洗脱包括以下步骤：(1)在0-10分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比保持90:10不变；(2)在10-10.2分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比由90:10匀速渐变至15:85；(3)在10.2-15分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比保持15:85不变；(4)在15-15.2分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比由15:85匀速渐变至90:10；(5)在15.2-18分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比保持90:10不变。详细的洗脱程序如下表1所示。表1梯度洗脱程序在一种优选方案中，采用高效液相色谱进行分离该杂质时，具体采用的色谱柱为WelchUltimateAQ30mm×250mm，5μm，填料孔径：100A。在一种优选方案中，流动相A1为0.01～0.1mol/L磷酸盐缓冲溶液，例如，0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液。进一步地，检测波长为215～225nm，优选为220nm。进一步地，流速为20～40ml/min，优选为30ml/min。进一步地，柱温为20～50℃，优选为35℃。更进一步地，进样量为2000～4000μL，优选为3500μL。收集目标峰制备液，用干冰和乙醇预冻，然后避光冻干，得到式I所示的目标杂质固体。在提供杂质分离制备方法的基础上，本专利技术还提供了一种依替巴肽注射液中式I所示的杂质的检测方法，该检测方法采用高效液相色谱法进行检测，对该杂质进行定性或定量检测，其高效液相色谱条件包括：以十二烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，采用流动相A2和流动相B2为混合流动相进行梯度洗脱，其中：流动相A2由磷酸溶液、乙腈和庚烷磺酸钠溶液组成，所述磷酸溶液、乙腈和庚烷磺酸钠溶液的体积比为80～90:20～10:0.8；流动相B2由磷酸溶液、乙腈和庚烷磺酸钠溶液组成，所述磷酸溶液、乙腈和庚烷磺酸钠溶液的体积比为60～70:40～30:0.8；所述梯度洗脱包括以下步骤：(1)在0-43分钟内，流动相A2和流动相B2的体积比保持95:5不变；(2)在43-70分钟内，流动相A2和流动相B2的体积比由95:5匀速渐变至15:85；(3)在70-73分钟内，流动相A2和流动相B2的体积比保持15:85不变；(4)在73-74分钟内，流动相A2和流动相B2的体积比由15:85匀速渐变至95:5；(5)在74-85分钟内，流动相A2和流动相B2的体积比保持95:5不变。详细的洗脱程序如下表2所示。表2梯度洗脱程序在检测方法中，以十二烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱，色谱柱的型号为PhenomenexSynergiMax-RP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.式I所示的杂质，其结构式如下所示：/n

【技术特征摘要】
1.式I所示的杂质，其结构式如下所示：





2.权利要求1所述的杂质的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤：





3.根据权利要求2所述的杂质的制备方法，其特征在于，将依替巴肽注射液在75℃～85℃的条件下进行化学反应，制备式I所示的杂质；优选地，反应温度为80℃；反应时间为18～30小时，优选为24小时。


4.根据权利要求2所述的杂质的制备方法，其特征在于，将依替巴肽注射液与酸溶液在20℃～70℃的条件下进行化学反应，制备式I所示的杂质。


5.根据权利要求4所述的杂质的制备方法，其特征在于，所述酸为无机酸；优选为盐酸、硫酸或硝酸，更优选为盐酸；所述酸溶液的浓度为1～3mol/L，优选为1～2mol/L，更优选为2mol/L。


6.根据权利要求4所述的杂质的制备方法，其特征在于，所述依替巴肽注射液中依替巴肽的浓度为0.75mg/mL～2mg/mL，优选为1mg/mL；反应温度为25℃～60℃；反应时间为10～20小时；所述依替巴肽注射液与酸溶液的体积比为1:15～40；优选为16.7～33.3:1；优选为16.7:1。


7.根据权利要求4所述的杂质的制备方法，其特征在于，该杂质采用高效液相色谱进行分离，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为WelchUltimateAQ，采用流动相A1和流动相B1为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A1为磷酸盐缓冲液，所述流动相B1为乙腈；所述梯度洗脱包括以下步骤：(1)在0-10分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比保持90:10不变；(2)在10-10.2分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比由90:10匀速渐变至15:85；(3)在10.2-15分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比保持15:85不变；(4)在15-15.2分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比由15:85匀速渐变至90:10；(5)在15.2-18分钟内，流动相A1和流动相B1的体积比保持90:10不变。


8.权利要求1所述的杂质的检测方...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐咏群，黄锡伟，丛艳波，胡铮，田欣欣，
申请(专利权)人：南京健友生化制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32