经修饰的甾醇酰基转移酶制造技术

本发明专利技术涉及经修饰的甾醇酰基转移酶，所述经修饰的甾醇酰基转移酶具有朝向要在维生素D3的生物技术生产中使用的维生素D3前体7‑脱氢胆固醇(7‑DHC)的酰化的改善的活性和/或特异性。本发明专利技术还涉及一种表达所述经修饰的酶的酵母菌株，以及所述酵母菌株在用于产生维生素D3或其衍生物和/或代谢产物的方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】经修饰的甾醇酰基转移酶本专利技术涉及经修饰的甾醇酰基转移酶，所述经修饰的甾醇酰基转移酶具有朝向要在维生素D3的生物技术生产中使用的维生素D3前体7-脱氢胆固醇(7-DHC)的酰化的改善的活性和/或特异性。本专利技术还涉及一种表达所述经修饰的酶的酵母菌株，以及所述酵母菌株在用于产生维生素D3或其衍生物和/或代谢产物的方法中的用途。维生素D3(也称为胆钙化醇或胆骨化醇)可以在哺乳动物皮肤中由前维生素D3(也称为7-脱氢胆固醇或7-DHC)合成，前维生素D3是在暴露于紫外光时胆固醇生物合成的产物，由此7-DHC被光化学转化为前维生素D3，前维生素D3在体温下异构化为生物活性形式维生素D3。在肝脏中，维生素D3转化为无生物活性的25-羟基维生素D3(也称为骨化二醇(calcidiol/calcifediol)、25-羟基胆钙化醇、25-OH-D3或HyD)，这是维生素D3的主要循环形式。进一步的羟基化发生在肾脏中。对于维生素D3的工业生产，(原则上)化学和生物技术合成两者都是可行的。化学合成开始于从例如羊毛脂中分离出胆固醇，然后将所述胆固醇脱氢成7-DHC，7-DHC是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有甾醇酰基转移酶活性的经修饰的酶，所述经修饰的酶包含在与根据SEQ IDNO:1的多肽中的选自592和/或595位的残基对应的一个或多个位置处的一个或多个氨基酸取代，优选地与F592L和/或G595D对应的取代。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180522 CH 00627/181.一种具有甾醇酰基转移酶活性的经修饰的酶，所述经修饰的酶包含在与根据SEQIDNO:1的多肽中的选自592和/或595位的残基对应的一个或多个位置处的一个或多个氨基酸取代，优选地与F592L和/或G595D对应的取代。


2.根据权利要求1所述的经修饰的酶，所述经修饰的酶催化包括7-脱氢胆固醇(7-DHC)和酵母甾醇在内的甾醇的酯化，其中与使用相应的未修饰酶的催化中的7-DHC与酵母甾醇的比率相比，所述甾醇酯中7-DHC与酵母甾醇的比率增加了至少约15％。


3.根据权利要求1或2所述的经修饰的酶，其中所述氨基酸取代选自G595D。


4.一种宿主细胞，优选地酵母，更优选地产生甾醇的酵母，甚至更优选地产生胆固醇的酵母，所述宿主细胞包含根据权利要求1至3中任一项所述的经修饰的酶。


5.根据权利要求4所述的宿主细胞，所述宿主细胞用于产生包含7-DHC和酵母甾醇的甾醇混合物，其中与表达未修饰的酶的宿主细胞相比，7-DHC与酵母甾醇的比率增加了至少约15％。


6.根据权利要求4或5所述的宿主细胞，其中ERG5和ERG6被灭活。


7.根据权利要求4至6中任一项所述的宿主细胞，其中所述细胞表达选自具有甾醇Δ24还原酶活性的EC1.3.1.72的异源酶，优选地其中所述异源酶源自植物或脊椎动物，更优选地源自人、猪、狗、小鼠、大鼠、马或斑马鱼。


8.根据权利要求4至7中任一项所述的宿主细胞，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托弗·马克·法雷尔，丽莎·安·拉普拉德，奥托·马丁·莱曼，约书亚·特鲁哈特，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL