用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的应用制造技术

本发明专利技术公开了用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的应用。本发明专利技术提供了特异引物对，由SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子组成。本发明专利技术还提供了一种鉴定鸡性别的方法，包括如下步骤：以待测鸡的基因组DNA为模板，采用所述特异引物对进行PCR扩增，如果得到一种扩增产物、待测鸡为或候选为公鸡，如果得到两种扩增产物、待测鸡为或候选为母鸡。本发明专利技术与现有技术相比具有以下优点：公鸡和母鸡具有条带数量的区别，并且特征带的差异约为400bp，可通过琼脂糖电泳检测，操作简单方便，不容易误判，鉴别结果快速准确，便于基层推广和使用，具有广阔的市场应用前景。

【技术实现步骤摘要】
用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的应用
本专利技术属于生物
，涉及用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的应用。
技术介绍
商业化家禽品种大都是以配套系模式生产的，父系一般生长速度较快，母系一般繁殖效率较高，因此都需要早期进行性别鉴定，父系要提前淘汰母雏，母系要提前淘汰公雏。商品代肉鸡公鸡生长速度较快，公母分群饲养，养殖效益会更好。商品代蛋鸡出雏时只保留母雏，公雏直接淘汰。因此鸡早期性别鉴定在生产中具有重要的意义。目前鸡早期的性别鉴定除了伴性遗传(金银色羽、横斑羽、快慢羽)等方法外，主要通过翻肛观察生殖突起进行鉴别。但翻肛鉴别须在雏鸡出生24小时内进行，超过这个时间段，雏鸡肛门难以翻开，生殖突起萎缩甚至陷入泄殖腔深处，不便观察。翻肛鉴别劳动强度大、工作环境差、专业性高，误鉴率也较高。通过分子生物学手段，快速、准确鉴定鸡早期性别具有重要意义。目前分子性别鉴定一般是利用染色体螺旋蛋白基因(chromoboxhelicaseDNAbindinggene，CHD)，利用雌性个体中具有两个同源拷贝，而雄性个体中只有一个拷贝。但雌性个体CHD基因两个同源拷贝序列较为保守，一般只相差100-200bp，利用琼脂糖电泳，分辨率较低，极容易误判，利用分辨率高的聚丙烯酞胺凝胶电，实验过程过于繁琐，并且毒性很大。因此，需要开发一种简单方便，能够快速、准确鉴别鸡性别的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的应用。本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种可用于鸡早期性别快速鉴定的PCR引物对，并提供了应用所述引物对通过PCR鉴定鸡性别的试剂盒和方法。本发提供了一种特异引物对，由SEQIDNO.1所示的单链DNA分子和SEQIDNO.2所示的单链DNA分子组成。所述特异引物对的用途为鉴定或辅助鉴定鸡性别。本专利技术还保护一种鉴定或辅助鉴定鸡性别的试剂盒，包括所述特异引物对。本专利技术还保护所述试剂盒在鉴定或辅助鉴定鸡性别中的应用。本专利技术还保护所述特异引物对在鉴定或辅助鉴定鸡性别中的应用。本专利技术还保护所述特异引物对在制备鉴定或辅助鉴定鸡性别的试剂盒中的应用。本专利技术还提供了一种鉴定鸡性别的方法，包括如下步骤：以待测鸡的基因组DNA为模板，采用特异引物对进行PCR扩增，如果得到一种扩增产物、待测鸡为或候选为公鸡，如果得到两种扩增产物、待测鸡为或候选为母鸡；所述特异引物对由SEQIDNO.1所示的单链DNA分子和SEQIDNO.2所示的单链DNA分子组成。所述一种扩增产物为一种特征性扩增产物。该一种特征性扩增产物的大小为538bp；所述两种扩增产物为两种特征性扩增产物。该两种特征性扩增产物的大小分别为960bp和538bp。所述基因组DNA可提取自鸡的羽毛或血液。所述基因组DNA可提取自鸡的组织。所述基因组DNA可提取自鸡的器官。所述PCR扩增的反应体系具体可为：2×PCRMix(南京博尔迪生物有限公司)25μL，10μmol/L正向引物1μL，10μmol/L反向引物1μL，50-100μg/ml模板DNA2μL，超纯水21μL。所述PCR扩增的反应程序具体可为：95℃5min；95℃30s、60℃30s、72℃30s，35循环；72℃10min。以上任一所述鸡具体可为茶花鸡或藏鸡。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：公鸡和母鸡具有条带数量的区别，并且特征带的差异约为400bp，可通过琼脂糖电泳检测，操作简单方便，不容易误判，鉴别结果快速准确，便于基层推广和使用，具有广阔的市场应用前景。基于本专利技术方法开发的检测试剂盒，可产生可观的经济效益和良好的社会价值。附图说明图1为实施例1中的PCR扩增产物的电泳图谱。图2为实施例2中的PCR扩增产物的电泳图谱。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1、方法的建立供试样本：10只已知性别的成年茶花鸡，编号为1-5的5只为公鸡，编号6-10的5只为母鸡。1、取供试样本的血液，提取基因组DNA。2、以步骤1得到的基因组DNA为模板DNA，进行PCR扩增。PCR扩增采用的引物对如下：正向引物(SEQIDNO.1)：5'-TGTATTTTGGTTCTACAGGC-3'；反向引物(SEQIDNO.2)：5'-ATCATCATAACCATAAATCT-3'。PCR扩增的反应体系(50μL)：2×PCRMix(南京博尔迪生物有限公司)25μL，10μmol/L正向引物1μL，10μmol/L反向引物1μL，50-100μg/ml模板DNA2μL，超纯水21μL。PCR扩增的反应程序：95℃5min；95℃30s、60℃30s、72℃30s，35循环；72℃10min。3、完成步骤2后，PCR扩增产物进行1.5％琼脂糖凝胶电泳。电泳图见图1。图1中，泳道1至10依次对应于编号1至10的供试样本。所有公鸡均显示单一特征带(经测序，均为538bp)。所有母鸡均显示两条特征带(经测序，一条均为有960bp，另一条均为538bp)。结果表明，本专利技术的引物对以及相应的PCR检测方法能够快速准确对鸡进行性别鉴定，并且简单易于操作。实施例2、方法的应用供试样本：17只未知性别的藏鸡雏鸡。方法同实施例1。电泳图见图2。图2中，泳道1至17依次代表17个供试样本。其中，部分供试样本显示538bp的单一特征带(泳道1、3、6、7、8、10、11、15、17)、判断为公鸡，部分供试样本显示960bp和538bp的两条特征带(泳道2、4、5、9、12、13、14、16)、判断为母鸡。供试样本经过解剖，进行性器官观察，以上鉴定结果完全正确。以上对本专利技术进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本专利技术的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本专利技术。虽然本专利技术给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本专利技术作进一步的改进。总之，按本专利技术的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本专利技术的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。序列表<110>江苏省家禽科学研究所<120>用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异引物对，由SEQ ID NO.1所示的单链DNA分子和SEQ ID NO.2所示的单链DNA分子组成。/n

【技术特征摘要】
1.特异引物对，由SEQIDNO.1所示的单链DNA分子和SEQIDNO.2所示的单链DNA分子组成。


2.一种鉴定或辅助鉴定鸡性别的试剂盒，包括权利要求1所述特异引物对。


3.权利要求1所述特异引物对在鉴定或辅助鉴定鸡性别中的应用。


4.权利要求1所述特异引物对在制备鉴定或辅助鉴定鸡性别的试剂盒中的应用。


5.权利要求2所述试剂盒在鉴定或辅助鉴定鸡性别中的应用。


6.一种鉴定鸡性...

【专利技术属性】
技术研发人员：高玉时，贾晓旭，陆俊贤，唐修君，樊艳凤，唐梦君，马尹鹏，张静，姬改革，顾荣，葛庆联，黄胜海，周倩，张晶鑫，
申请(专利权)人：江苏省家禽科学研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32