一种用于治疗B型血友病的产品制造技术

本申请公开了一种用于治疗B型血友病的产品。所述产品中包含：能够将目的基因插入到肝细胞中Alb(Albumin,白蛋白)的13号内含子上并使所述目的基因与Alb共表达的试剂；所述目的基因包括F9因子的编码基因。本申请首次选择肝细胞中Alb基因的13号内含子作为外源基因插入位点，并根据该位点设计的整合供体序列可以保证Alb的完整表达且与外源基因共表达，从而实现在不破坏内源基因表达的前提下实现外源基因高表达的目的。本申请所提供的产品可以改善B型血友病的治疗和预防效果，具有较高的效率和较好的安全性，在临床治疗方面具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗B型血友病的产品
本专利技术涉及基因治疗领域，具体说是一种用于治疗B型血友病的产品。
技术介绍
很多遗传疾病的发生是肝脏表达的某些代谢相关蛋白的基因突变导致的。这些突变后的蛋白往往失去功能，导致相关代谢过程或正常生理生化过程无法进行，出现如A型血友病、B型血友病、酪氨酸血症、苯丙酮尿症等疾病。现有的治疗机制多为蛋白替代治疗、肝脏移植以及以基因增补方式的基因治疗等，定点整合的基因治疗为这类疾病的治疗提供了新的选择。蛋白替代治疗和小分子药物治疗的价格往往较为昂贵，且需要长期接受治疗，对于患者的身体和经济而言都是沉重负担。而对于肝脏移植而言，也面临着供体不足，手术风险和免疫排斥几大问题。通过病毒递送的基因增补方式虽然解决了治疗基因在体内的递送问题，但随细胞分裂而疗效下降以及病毒引起的随机整合导致的插入突变限制了该方法的临床应用。在基因治疗的尝试上，以凝血因子F9缺乏的B型血友病为例，选择肝脏中高表达蛋白Alb为插入位点是一个新的尝试。不过已经进行的研究或者直接采用同源重组的方式，无法在非分裂细胞中插入，且修复效率较低，此外，由于较本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗和/或预防B型血友病的产品，其特征在于，所述产品中包含：能够将目的基因插入到肝细胞中Alb的13号内含子上并使所述目的基因与Alb共表达的试剂；/n所述目的基因包括F9因子的编码基因。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗和/或预防B型血友病的产品，其特征在于，所述产品中包含：能够将目的基因插入到肝细胞中Alb的13号内含子上并使所述目的基因与Alb共表达的试剂；
所述目的基因包括F9因子的编码基因。


2.如权利要求1所述的产品，其特征在于：所述F9因子的编码基因的序列如SEQIDNo.6所示。


3.如权利要求1或2所述的产品，其特征在于：所述试剂包括：核酸酶和sgRNA，或所述核酸酶的递送载体和所述sgRNA的递送载体；
所述sgRNA能够引导所述核酸酶对肝细胞中Alb的13号内含子进行切割并形成断裂位点；
所述sgRNA的靶序列包含SEQIDNo.1-5中任一所示的序列；更优选的，所述sgRNA的靶序列包含SEQIDNo.2所示的序列。


4.如权利要求3所述的产品，其特征在于：所述核酸酶选自Cas9、Cas3、Cas8a、Cas8b、Cas10d、Cse1、Csy1、Csn2、Cas4、Cas10、Csm2、Cmr5、Fok1、Cpf1中的一种或任意几种；优选的，所述核酸酶为Cas9，更优选的，所述Cas9选自来源于化脓性链球菌、肺炎链球菌或嗜热链球菌的Cas9，更优选的，所述Cas9选自来源于化脓性链球菌的Cas9。


5.如权利要求3或4所述的产品，其特征在于：所述试剂包括：供体修复模板、或所述供体修复模板的递送载体，
所述供体修复模板包括依次连接的Alb的14号外显子和所述目的基因，优选的，所述Alb的14号外显子的序列如SEQIDNo.7所示；
优选的，所述供体修复模板中所述Alb的14号外显子的上游设SA序列，更优选的，所述SA序列如SEQIDNo.8所示；
优选的，所述供体修复模板中所述Alb的14号外显子与所述目的基因之间设自剪切多肽编码基因，更优选的，所述自剪切多肽为2A多肽，更优选的，所述2A多肽为P2A、T2A、E2A和/或F2A，更优选的，所述2A多肽为T2A多肽，更优选的，所述T2A多肽的编...

【专利技术属性】
技术研发人员：李大力，陈曦，牛煦然，席在喜，刘明耀，
申请(专利权)人：华东师范大学，上海邦耀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31