【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过重塑微生物实施时间和空间靶向的动态氮输送相关申请的交叉引用本申请案主张2018年7月11日提交的第62/696,452号美国临时申请案和2019年2月05日提交的第62/801,504号美国临时申请案的优先权，所述临时申请案中的每一个的内容以全文引用的方式并入本文中。关于序列表的声明与本申请一起以电子方式提交的文本文件的内容的全文通过引用并入本文中：序列表的计算机可读格式副本，文件名：PIVO_006_01WO_SeqList_ST25.txt，创建日期，2019年7月10日，文件大小约632千字节。
技术介绍
联合国粮食与农业组织(UnitedNations′FoodandAgricultureOrganization)预计，到2050年，粮食总产量必须提高70％以满足不断增长的人口的需求，这是一项挑战，因许多因素而更加严重，包含：淡水资源减少、对耕地的竞争加剧、能源价格上涨、投入成本提高以及作物可能需要适应更干、更热和更加极端的全球气候的压力。当前农业实践未经很好地装备以满足对粮食生产的此增长的需求，同时平衡由增加的农业强度造成的环境影响。满足全球粮食需求所需的主要农业输入之一是氮肥。然而，用于生产氮肥的当前工业标准是称为哈伯-博世法(Haber-Boschprocess)的人工固氮方法，其通过在高温和高压下使用金属催化剂与氢气(H2)的反应将大气氮(N2)转化为氨气(NH3)。此方法是资源密集型的且对环境有害。与合成哈伯-博世法相比，某些生物系统已进化以固定大气氮。这些系统利用称为...
【技术保护点】
1.一种向谷物植物提供固定大气氮的方法，其包括：/na.向一个地点提供多个非属间重塑细菌，其各自产生至少约5.49×10
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180711 US 62/696,452;20190205 US 62/801,5041.一种向谷物植物提供固定大气氮的方法，其包括：
a.向一个地点提供多个非属间重塑细菌，其各自产生至少约5.49×10-13mmolN/CFU/小时的固定N；以及
b.向所述地点提供多个谷物植物，
其中所述多个非属间重塑细菌定植所述多个谷物植物的根部表面并且向所述谷物植物供应固定N，并且其中所述多个非属间重塑细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约4.03×10-13mmolN/CFU/小时的固定N。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约25磅的固定N/英亩。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约50磅的固定N/英亩。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约75磅的固定N/英亩。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约100磅的固定N/英亩。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以根据图31、32、33、34或35的总计CFU/英亩浓度定植所述多个谷物植物的根部表面。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个谷物植物的根部表面至少约20天。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个谷物植物的根部表面至少约30天。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个谷物植物的根部表面至少约60天。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌与其定植其它根部同样地定植所述多个谷物植物的周边根部的根部表面。
13.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌比其定植其它根部程度更高地定植所述多个谷物植物的周边根部的根部表面。
14.根据权利要求1所述的方法，其中在施加所述多个非属间重塑细菌和谷物植物之后，不将外源氮施加到所述地点。
15.根据权利要求1所述的方法，其中在施加所述多个非属间重塑细菌和谷物植物之后，不将含有外源氮的侧施肥料施加到所述地点。
16.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤a)和b)之前，将外源氮施加到所述地点。
17.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤a)和b)之前，将外源氮施加到所述地点，并且在步骤a)和b)之后不将外源氮施加到所述地点。
18.根据前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其中所述谷物植物为玉米、水稻、小麦、大麦、高粱、小米、燕麦、黑麦或黑小麦。
19.根据权利要求1所述的方法，其中所述谷物植物为玉米植物，且所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的VT期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
20.根据权利要求1所述的方法，其中所述谷物植物为玉米植物，且所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的R1期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
21.根据权利要求1所述的方法，其中所述谷物植物为玉米植物，且所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的R6期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
22.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在暴露于其的所述多个中的个别谷物植物中产生1％或更多的固定氮。
23.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌能够在外源氮存在下固定大气氮。
24.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因或非编码多核苷酸中的至少一个基因变异。
25.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括可操作地连接于固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因的引入的控制序列。
26.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括可操作地连接于固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因的异源启动子。
27.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括至少一个基因变异，其被引入到选自由以下组成的群组的成员中：nifA、nifL、ntrB、ntrC、编码谷氨酰胺合成酶的多核苷酸、glnA、glnB、glnK、drat、amtB、编码谷氨酰胺酶的多核苷酸、glnD、glnE、nifJ、nifH、nifD、nifK、nifY、nifE、nifN、nifU、nifS、nifV、nifW、nifZ、nifM、nifF、nifB、nifQ、与固氮酶生物合成相关的基因，以及其组合。
28.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因或非编码多核苷酸中的至少一个基因变异，其产生以下中的一个或多个：NifA或谷氨酰胺酶的增加的表达或活性；NifL、NtrB、谷氨酰胺合成酶、GlnB、GlnK、DraT、AmtB的减少的表达或活性；GlnE的减少的去腺苷酰基活性；或GlnD的减少的去尿苷酰基活性。
29.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子。
30.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质。
31.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变amtB基因，其使得缺少所述amtB基因的表达。
32.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括以下中的至少一个：突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子；突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质；突变amtB基因，其使得缺少所述amtB基因的表达；和其组合。
33.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括：突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子；和突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质。
34.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括：突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子；和突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质；和突变amtB基因，其使得缺少所述amtB基因的表达。
35.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到涉及选自由以下组成的群组的路径的基因中的至少一个基因变异：胞外多糖产生、内多半乳糖醛酸酶产生、海藻糖产生和谷氨酰胺转化。
36.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到选自由以下组成的群组的基因中的至少一个基因变异：bcsii、bcsiii、yjbE、fhaB、pehA、otsB、treZ、glsA2和其组合。
37.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括至少两种不同细菌物种。
38.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括相同细菌物种的至少两种不同菌株。
39.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括选自以下的细菌：水生拉恩氏菌、变栖克雷伯氏菌、精神无色杆菌、马德普拉塔无色杆菌、壁微杆菌、中间克吕沃尔氏菌、假甘蔗科萨克氏菌、肠杆菌属(Enterobactersp.)、生脂固氮螺菌(Azospirillumlipoferum)、甘蔗科萨克氏菌(Kosakoniasacchari)，和其组合。
40.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌为附生菌或根际菌。
41.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括选自以下的细菌：作为NCMA201701002保藏的细菌、作为NCMA201708004保藏的细菌、作为NCMA201708003保藏的细菌、作为NCMA201708002保藏的细菌、作为NCMA201712001保藏的细菌、作为NCMA201712002保藏的细菌，和其组合。
42.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括包含与选自SEQIDNO:177-260、296-303和458-469的核酸序列共有至少约90％序列一致性的核酸序列的细菌。
43.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括包含与选自SEQIDNO:177-260、296-303和458-469的核酸序列共有至少约95％序列一致性的核酸序列的细菌。
44.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括包含与选自SEQIDNO:177-260、296-303和458-469的核酸序列共有至少约99％序列一致性的核酸序列的细菌。
45.根据权利要求1所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括包含选自SEQIDNO:177-260、296-303和458-469的核酸序列的细菌。
46.一种向玉米植物提供固定大气氮的方法，其消除添加季中外源氮施用的需求，其包括：
a.向一个地点提供多个非属间重塑细菌，其各自产生至少约5.49×10-13mmolN/CFU/小时的固定N；以及
b.向所述地点提供多个玉米植物，
其中所述多个非属间重塑细菌定植所述多个玉米植物的根部表面且向所述玉米植物供应固定N，且其中所述多个非属间重塑细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约15磅的固定N/英亩，且其中在施加所述多个非属间重塑细菌和玉米植物之后，不将外源氮施加到所述地点。
47.根据权利要求46所述的方法，其中外源氮不作为侧施肥料施用。
48.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N。
49.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约4.03×10-13mmolN/CFU/小时的固定N。
50.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约25磅的固定N/英亩。
51.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约50磅的固定N/英亩。
52.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约75磅的固定N/英亩。
53.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约100磅的固定N/英亩。
54.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以根据图31、32、33、34或35的总计CFU/英亩浓度定植所述多个玉米植物的根部表面。
55.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个玉米植物的根部表面至少约20天。
56.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个玉米植物的根部表面至少约30天。
57.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个玉米植物的根部表面至少约60天。
58.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌与其定植其它根部同样地定植所述多个玉米植物的周边根部的根部表面。
59.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌比其定植其它根部程度更高地定植所述多个玉米植物的周边根部的根部表面。
60.根据权利要求46所述的方法，其进一步包括在步骤a)和b)之前，将外源氮施加到所述地点。
61.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的VT期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
62.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的R1期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
63.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的R6期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
64.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在暴露于其的所述多个中的个别玉米植物中产生1％或更多的固定氮。
65.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌能够在外源氮存在下固定大气氮。
66.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因或非编码多核苷酸中的至少一个基因变异。
67.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括可操作地连接于固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因的引入的控制序列。
68.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括可操作地连接于固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因的异源启动子。
69.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括至少一个基因变异，其被引入到选自由以下组成的群组的成员中：nifA、nifL、ntrB、ntrC、编码谷氨酰胺合成酶的多核苷酸、glnA、glnB、glnK、drat、amtB、编码谷氨酰胺酶的多核苷酸、glnD、glnE、nifJ、nifH、nifD、nifK、nifY、nifE、nifN、nifU、nifS、nifV、nifW、nifZ、nifM、nifF、nifB、nifQ、与固氮酶生物合成相关的基因，以及其组合。
70.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因或非编码多核苷酸中的至少一个基因变异，其产生以下中的一个或多个：NifA或谷氨酰胺酶的增加的表达或活性；NifL、NtrB、谷氨酰胺合成酶、GlnB、GlnK、DraT、AmtB的减少的表达或活性；GlnE的减少的去腺苷酰基活性；或GlnD的减少的去尿苷酰基活性。
71.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子。
72.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质。
73.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变amtB基因，其使得缺少所述amtB基因的表达。
74.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括以下中的至少一个：突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子；突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质；突变amtB基因，其使得缺少所述amtB基因的表达；和其组合。
75.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括：突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子；和突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质。
76.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括：突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子；和突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质；和突变amtB基因，其使得缺少所述amtB基因的表达。
77.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到涉及选自由以下组成的群组的路径的基因中的至少一个基因变异：胞外多糖产生、内多半乳糖醛酸酶产生、海藻糖产生和谷氨酰胺转化。
78.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到选自由以下组成的群组的基因中的至少一个基因变异：bcsii、bcsiii、yjbE、fhaB、pehA、otsB、treZ、glsA2和其组合。
79.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括至少两种不同细菌物种。
80.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括相同细菌物种的至少两种不同菌株。
81.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括选自以下的细菌：水生拉恩氏菌、变栖克雷伯氏菌、精神无色杆菌、马德普拉塔无色杆菌、壁微杆菌、中间克吕沃尔氏菌、假甘蔗科萨克氏菌、肠杆菌属、生脂固氮螺菌、甘蔗科萨克氏菌，和其组合。
82.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌为附生菌或根际菌。
83.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括选自以下的细菌：作为NCMA201701002保藏的细菌、作为NCMA201708004保藏的细菌、作为NCMA201708003保藏的细菌、作为NCMA201708002保藏的细菌、作为NCMA201712001保藏的细菌、作为NCMA201712002保藏的细菌，和其组合。
84.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括包含与选自SEQIDNO:177-260、296-303和458-469的核酸序列共有至少约90％序列一致性的核酸序列的细菌。
85.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括包含与选自SEQIDNO:177-260、296-303和458-469的核酸序列共有至少约95％序列一致性的核酸序列的细菌。
86.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括包含与选自SEQIDNO:177-260、296-303和458-469的核酸序列共有至少约99％序列一致性的核酸序列的细菌。
87.根据权利要求46所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌包括包含选自SEQIDNO:177-260、296-303和458-469的核酸序列的细菌。
88.一种增加每英亩的玉米产量的方法，其包括：
a.向一个地点提供多个非属间重塑细菌，其各自产生至少约5.49×10-13mmolN/CFU/小时的固定N；以及
b.向所述地点以至少35,000个种子/英亩的密度提供多个玉米植物，
其中所述多个非属间重塑细菌定植所述多个玉米植物的根部表面且向所述玉米植物供应固定N，且其中所述多个非属间重塑细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约15磅的固定N/英亩，且其中在施加所述多个非属间重塑细菌和玉米植物之后，不将外源氮施加到所述地点。
89.根据权利要求88所述的方法，其中外源氮不作为侧施肥料施用。
90.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N。
91.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约4.03×10-13mmolN/CFU/小时的固定N。
92.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约25磅的固定N/英亩。
93.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约50磅的固定N/英亩。
94.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约75磅的固定N/英亩。
95.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌各自产生至少约2.75×10-12mmolN/CFU/小时的固定N，并且其中所述多个细菌在至少约10天到约60天的过程中总体上产生至少约100磅的固定N/英亩。
96.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以根据图31、32、33、34或35的总计CFU/英亩浓度定植所述多个玉米植物的根部表面。
97.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个玉米植物的根部表面至少约20天。
98.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个玉米植物的根部表面至少约30天。
99.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌以约5×1013的总计CFU/英亩浓度定植所述多个玉米植物的根部表面至少约60天。
100.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌与其定植其它根部同样地定植所述多个玉米植物的周边根部的根部表面。
101.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌比其定植其它根部程度更高地定植所述多个玉米植物的周边根部的根部表面。
102.根据权利要求88所述的方法，其进一步包括在步骤a)和b)之前，将外源氮施加到所述地点。
103.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的VT期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
104.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的R1期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
105.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在所述玉米植物的R6期之前总体上产生至少约15磅的固定N/英亩。
106.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌在暴露于其的所述多个中的个别玉米植物中产生1％或更多的固定氮。
107.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌能够在外源氮存在下固定大气氮。
108.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因或非编码多核苷酸中的至少一个基因变异。
109.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括可操作地连接于固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因的引入的控制序列。
110.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括可操作地连接于固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因的异源启动子。
111.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括至少一个基因变异，其被引入到选自由以下组成的群组的成员中：nifA、nifL、ntrB、ntrC、编码谷氨酰胺合成酶的多核苷酸、glnA、glnB、glnK、drat、amtB、编码谷氨酰胺酶的多核苷酸、glnD、glnE、nifJ、nifH、nifD、nifK、nifY、nifE、nifN、nifU、nifS、nifV、nifW、nifZ、nifM、nifF、nifB、nifQ、与固氮酶生物合成相关的基因，以及其组合。
112.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括引入到固氮或同化遗传调节网络的至少一个基因或非编码多核苷酸中的至少一个基因变异，其产生以下中的一个或多个：NifA或谷氨酰胺酶的增加的表达或活性；NifL、NtrB、谷氨酰胺合成酶、GlnB、GlnK、DraT、AmtB的减少的表达或活性；GlnE的减少的去腺苷酰基活性；或GlnD的减少的去尿苷酰基活性。
113.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子。
114.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短GlnE蛋白质。
115.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括突变amtB基因，其使得缺少所述amtB基因的表达。
116.根据权利要求88所述的方法，其中所述多个非属间重塑细菌的每个成员包括以下中的至少一个：突变nifL基因，其已变异以包括插入到所述nifL基因中的异源启动子；突变glnE基因，其产生缺少去腺苷酰基AR结构域的截短G...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·塔姆希尔，S·布洛克，M·赖辛格，E·桑德斯，R·布罗格利，R·克拉克，K·特米，
申请(专利权)人：皮沃特生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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