一种快速检测MS-222的磁性免疫层析试纸条及方法技术

本发明专利技术属于渔用麻醉剂检测技术领域，具体涉及一种快速可视化定量MS‑222的试纸条和检测方法。本发明专利技术结合超顺磁性磁珠及免疫层析试纸条技术，采用竞争检测模式进行水产品中MS‑222的快速定量检测。本发明专利技术中的试纸条包括样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，以及硝酸纤维素膜上的检测线和质控线，其中检测线上包被3‑氨基苯甲酸‑BSA完全抗原，质控线上包被羊抗鼠IgG。本发明专利技术实现了水产品中MS‑222的快速检测，滴加样品15‑20min后即可肉眼定性判定结果，利用磁性免疫层析分析仪还可进一步定量分析MS‑222的含量。本发明专利技术还提供了上述试纸条的制备方法和检测方法，无需复杂前处理即可对大批量样品进行现场快速检测，易于推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测MS-222的磁性免疫层析试纸条及方法
本专利技术属于生物技术和检测领域，具体涉及一种适用于低成本快速检测水产品或者水样中MS-222的磁性免疫层析试纸条的制备及其应用方法。
技术介绍
麻醉是鲜活水产品运输的常见方法，适当使用麻醉剂能够使鲜活水产品保持安静，降低新陈代谢，提高成活率和运输密度，延长运输时间，减少运输损失、降低运输成本，且操作方便、管理简便。MS-222(3-氨基苯甲酸乙酯甲基磺酸盐)，又名三卡因、鱼安定，是常见渔用麻醉剂之一。美国、加拿大、欧盟等国家和地区均允许将MS-222应用在鲜活水产品中，但对其休药期和最大残留量的要求有所不同，其中，美国要求经MS-222处理的水产品休药期为21d，最大残留量为1μg/mL；加拿大要求休药期为5d。过多摄入的MS-222可蓄积在脾脏和肝脏中损害人体生理机能，造成过敏、造血紊乱等不良反应，甚至产生致癌作用，近年来，经监管部门和媒体曝光，某些商家受利益驱使，在水产品中加入过量MS-222，且未经休药期就将水产品进行出售，麻醉剂残留已成为鲜活水产品食品质量安全的一大重要隐患。渔用麻醉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测MS-222的磁性免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板及底板上依次粘贴的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；/n所述的硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；检测线上包被3-氨基苯甲酸-载体蛋白完全抗原，质控线上包被羊抗鼠IgG。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速检测MS-222的磁性免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板及底板上依次粘贴的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；
所述的硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；检测线上包被3-氨基苯甲酸-载体蛋白完全抗原，质控线上包被羊抗鼠IgG。


2.权利要求1所述的快速检测MS-222的磁性免疫层析试纸条，其特征在于，3-氨基苯甲酸-载体蛋白完全抗原是指以为半抗原、BSA或OVA为载体蛋白合成的偶联物；3-氨基苯甲酸与载体蛋白用1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺偶联，或者3-氨基苯甲酸与载体蛋白用三乙胺和氯甲酸异丁酯偶联。


3.权利要求2所述的快速检测MS-222的磁性免疫层析试纸条，其特征在于，3-氨基苯甲酸-载体蛋白完全抗原的制备方法包括以下步骤：
1)活化：3-氨基苯甲酸用N,N-二甲基苯胺或N,N-二甲基甲酰胺溶解至浓度10-60mg/mL，加入2％-5％体积比的三乙胺，2-8℃反应10-20min，随后加入0.5％-1％体积比氯甲酸异丁酯低温反应1-3h；或者，
3-氨基苯甲酸用N,N-二甲基苯胺或N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入质量比为1：1-2的1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺，3-氨基苯甲酸与1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺盐酸盐用量比为1：1-2；反应体系中3-氨基苯甲酸浓度为10-60mg/mL；
2)偶联：加入BSA或OVA于上述溶液，过夜反应8-12h，BSA或OVA与3-氨基苯甲酸质量比为1：1.5-2；
3)纯化：将上述偶联物置于20-40kD透析袋中，用pH＝7.0-7.4的磷酸盐缓冲液透析。


4.一种快速检测MS-222的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将待测样品与磁纳米探针混合后反应1-30min；所述的磁纳米探针为偶联了MS-222单抗的超顺磁性纳米颗粒；
(2)加入层析液充分混匀5-60s，滴加到权利要求1-3任一项所述至磁性...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢瑛，戴晓娜，谢晶，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海;31