一种超敏感的电化学LCR传感器用于检测关节液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌制造技术

本发明专利技术公开一种超敏感的电化学LCR传感器用于检测关节液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，包括如下步骤：（1）根据MecA基因的保守系列设计特异性的两条双链短探针（S

【技术实现步骤摘要】
一种超敏感的电化学LCR传感器用于检测关节液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌


[0001]本专利技术涉及一种超敏感的电化学LCR传感器用于检测关节假体周围感染病人关节液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），尤其涉及一种基于LCR的电化学传感技术检测关节假体周围感染病人关节液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的方法。

技术介绍

[0002]髋关节与膝关节假体周围感染（PJI）是人工关节置换术后的一种灾难性的严重并发症，大约发生于1%
‑
2%的人工关节置换术后病人。大多数PJI的致病菌为革兰氏阳性菌包括葡萄球菌属。一些研究表明大约74%的PJI病人是由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染引起的。传统的检测MRSA的方法是通过细菌培养。但由于许多PJI患者其MRSA位于生物膜内，单纯用关节液进行细菌培养很难得到足够量的细菌，同时这种方法需要较长的培养时间，这就导致结果出来前广谱抗生素的大量使用从而产生抗生素相关的副作用及增加病人的治疗费用。因此，迫切需要一种能够简单、快速、灵敏的方法用于关节液中MRSA的早期检测。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种超敏感的电化学LCR传感器用于检测关节假体周围感染病人关节液中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。2.根据权利要求1所述的检测关节假体周围感染病人关节液中MRSA，其特征在于，所述的待测MRSA能通过检测其MecA基因实现，通过NCBI查找出MecA基因的各种同源体系列，选取其中共同的保守系列设计探针，设计的探针系列分别为：完全匹配DNA目标链, T
‑
full DNA target 的MecA基因 : 5
’‑
CCTCTGCTCAACAAGTTCCAGATTACAACTTCACCAGGTT CAACTC
‑3’
； 5
’
端修饰SH
‑
C6的捕获探针, CP: 5
’‑
SH
‑ꢀ
TTTT TTTTTT GAGTTGAACCTGGTGA AGTTGTAA
‑3’
； 5
’ꢀ
端修饰PO4
‑ , 3
’ꢀ
端修饰生物素biotin的信号探针，SP: 5
’‑
PO4
‑
TCTGGA ACTTGT TGAGCAG AGG
‑
Biotin
‑3’
；部分目标探针1，Half
‑
target 1, hT
‑
1:5
’‑
CCTCTGCTCA ACAAGTTCCAGA
‑3’
;部分目标探针2，Half
‑
target 2, hT
‑
2: 5
’‑
CCTCTGCTCAACAAGTTC CAGA
‑3’
。3.权利要求1所述的超敏感的电化学LCR 传感器的检测方法，依序包含如下步骤：(1)LCR反应相关条件的设定，并向反应体系中加入扩增反应所需的标本探针、试剂及DNA连接酶；(2) 金电极的预处理及BSA修饰金电极的制备；(3) 将LCR扩增产物固定于BSA修饰金电极表面，滴加亲和素
‑
PolyHRP与L
‑
dsDNA上的生物素结合后，将步骤（2）制得的电极置于含TMB和H2O2的底液中，在HRP的催化下，H2O2氧化TMB生成双偶氮联苯胺类物质，产生电化学信号进行检测。4.根据权利要求所述的超敏感的电化学LCR 传感器的检测方法，其特征在于具体步骤如下：（1）通过NCBI查找出MecA基因的各种同源体系列，选取其中共同的保守系列设计探针，设计的探针系列分别为：MecA基因 : 5
’‑
CCTCTGCTCAACAAGTTCCAGATTACAACTTCACCAGGTT CAACTC
‑3’
；捕获探针，其端修饰SH
‑
C6, CP: 5
’‑
SH
‑ꢀ
TTTT TTTTTT GAGTTGAACCTGGTGA AGTTGTAA
‑3’
；信号探针，其5
’ꢀ
端修饰PO4
‑ , 3
’ꢀ
端修饰生物素biotin，SP: 5
’‑
PO4
‑
TCTGGA ACTTGTTGAGCAGAGG
‑
Biotin
‑3’
；部分目标探针1 :5
’‑
CCTCTGCTCA ACAAGTTCCAGA
‑3’
; 部分目标探针...

【专利技术属性】
技术研发人员：张文明，钟光贤，陈锦元，魏洪翔，方心俞，林建华，
申请(专利权)人：福建医科大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：