氟苯尼考中间体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种氟苯尼考中间体的制备方法。本发明专利技术的制备方法包括以下步骤：在反应体系中，在pH值为7.0的条件下，在酮还原酶和辅酶存在下，将化合物3进行如下式的还原反应，得到化合物1，即可；其中，所述的还原反应温度30℃；所述的酮还原酶的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示，“和/或”，与如SEQ ID NO.1所示同源性为96％以上的氨基酸序列。该方法在较短时间内转化率可达100％，且立体选择性较高。且立体选择性较高。且立体选择性较高。

【技术实现步骤摘要】
氟苯尼考中间体的制备方法


[0001]本专利技术涉及一种氟苯尼考中间体的制备方法。

技术介绍

[0002]氟苯尼考又称氟甲砜霉素、氯砜尼可等，为新一代的动物专用广谱抗菌药，其结构类似于甲砜霉素，但其抗菌能力可达甲砜霉素的10倍之多，而且它抗菌谱广，杀菌作用强大，安全高效，没有再生障碍性贫血、致畸、致癌和致突变作用，故其被广泛应用。目前，世界上已有20多个国家批准并允许其销售使用。在国内氟苯尼考已被批准用于猪、禽、鱼等多种动物。(1R,2R)-2-氨基-1-(4-(甲磺酰基)苯基)-1,3-丙二醇是氟苯尼考重要中间体，其结构式为其关键是手性中心的构建。
[0003]复旦大学专利CN105152989B公开了由2-(N-叔丁氧甲酰胺基)-3-(4-甲砜基苯基)-3-氧代丙酸乙酯经重排获得2-叔丁氧甲酰胺基-3-(4-甲砜基苯基)-3-氧代丙酸乙酯，再经钌催化剂催化不对称氢化伴随动态动力学拆分，制得(2S，3S)-3-羟基-2-(叔丁氧甲酰胺基)-3-(4-甲砜基苯基)丙酸乙酯，再经甲磺酰氯酯化，硼氢化钠还原，和脱保护制得(1R,2R)-2-氨基-1-(4-(甲磺酰基)苯基)-1,3-丙二醇。
[0004]此方法中关键手性中心的建立是采用化学催化法，需要昂贵的金属催化剂，以及产生重金属污染，对环境污染严重，不利于工业化生产。
[0005][0006]因此，亟须提供一种对对环境友好的氟苯尼考中间体的制备方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术所要解决的技术问题是为了克服现有技术中在化学催化方法中构建氟苯尼考重要中间体手性中心，需要昂贵的金属催化剂，转化率较低的缺陷，而提供了一种氟苯
尼考中间体的制备方法。本专利技术的制备方法在较短时间内转化率可达100％，且立体选择性较高。
[0008]本专利技术通过以下技术方案解决上述问题。
[0009]本专利技术提供了一种氟苯尼考中间体的制备方法，其包括以下步骤：溶剂中，在pH值为7.0的条件下，在酮还原酶和辅酶存在下，将化合物3进行如下式的还原反应，得到化合物1，即可；
[0010]其中，所述的还原反应的温度30℃；所述的酮还原酶的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示，“和/或”，与如SEQ ID NO.1所示同源性为96％以上的氨基酸序列；
[0011][0012]所述的还原反应中，所需要的pH值可通过使用缓冲液来调节和控制。其中，所述的缓冲液的浓度可以为0.09～0.12mol/L，还可以为0.1mol/L。所述的缓冲液可以本领域常规的缓冲液，还可以为磷酸盐缓冲液，进一步可以为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液。
[0013]所述的还原反应中，所述的反应体系还可以包括助溶剂。所述的助溶剂的可以为本领常规的助溶剂，还可以为二甲亚砜(DMSO)。所述的助溶剂与所述的反应体系的体积比可以为0.01:1～0.1:1，还可以为0.05:1。
[0014]所述的还原反应中，所述的酮还原酶的氨基酸序列可以为与如SEQ ID NO.1所示同源性为96％以上所示，还进一步可以为如SEQ ID NO.2所示。
[0015]所述的还原反应中，所述的酮还原酶的浓度可以为0.1～10U/mL，还可以为0.3～3.25U/ml，又可以为0.3U/ml或3.25U/ml。
[0016]所述的还原反应中，所述的辅酶可为本领域此类反应中常规的辅酶，还可以为NADH和/或NADPH。
[0017]所述的还原反应中，所述的辅酶的与化合物3的摩尔比可以为1:200-1:2，又可以为1:13。
[0018]所述的还原反应中，所述的辅酶可以采用辅酶再生系统原位生成辅酶，辅酶再生系统可以为本领域中常规的辅酶再生系统。当所述的辅酶为NADH和/或NADPH时，所述NADH和/或NADPH的制备方法可以包括以下步骤：在脱氢酶以及供氢体的存在下，将NAD
+
和/或NADP
+
进行还原反应，得到所述的NADH和/或NADPH即可。
[0019]所述NADH和/或NADPH的制备方法中，所述的脱氢酶可以为葡萄糖脱氢酶、醇脱氢酶或甲酸脱氢酶，还可以为醇脱氢酶，还进一步可为氨基酸序列的NCBI登录号为BAN05992.1。
[0020]所述NADH和/或NADPH的制备方法中，所述的供氢体可以为葡萄糖、异丙醇或甲酸盐，还可以为异丙醇。
[0021]所述NADH和/或NADPH的制备方法中，当所述的供氢体为异丙醇时，所述的醇脱氢酶的浓度可以为1～20U/mL，还可以为7.5U/mL。
[0022]所述NADH和/或NADPH的制备方法中，所述的供氢体与所述的化合物3的摩尔比可
以为1：1～20：1，还可以为1：1～10：1，又可以为10：1。
[0023]所述的还原反应中，所述的化合物3的浓度可以为10～100mg/mL，还可以为10～15mg/mL，又可以为10mg/ml。
[0024]所述的还原反应可以在摇床进行，所述摇床的转速可以为100～300rpm，还可以为220rpm。
[0025]所述还原反应的进程可采用本领域此类反应中常规的监测方法进行监测(例如HPLC、LCMS)。一般以所述化合物3消失时作为反应的终点。所述还原反应的时间可为2～6小时，还可以为6小时。
[0026]在本专利技术一技术方案中，所述的氟苯尼考中间体的制备方法，其优选包括下列步骤：
[0027]步骤1、将所述的化合物3、所述的缓冲溶液和助溶剂混合，得一混合液；
[0028]步骤2、将所述的辅酶和所述的酮还原酶与步骤1得到的混合液混合，进行所述的还原反应。
[0029]其中，所述的缓冲溶液、所述的助溶剂、所述的辅酶和所述的酮还原酶均同前所述。
[0030]本专利技术中，浓度若无特殊说明，均为反应前所述化合物占整个反应体系的终浓度。
[0031]在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本专利技术各较佳实例。
[0032]本专利技术的酮还原酶、辅酶和化合物3均为自制，其它所用试剂和原料均市售可得。
[0033]本专利技术的积极进步效果在于：本专利技术的制备方法用于制备氟苯尼考中间体，转化率可达100％，ee值可达99％以上，且反应时间较短。
附图说明
[0034]图1为化合物1对照品的HPLC图谱。
[0035]图2为实施例3中化合物3的HPLC图谱。
[0036]图3为实施例4反应液的HPLC图谱。
[0037]图4为实施例5反应液的HPLC图谱。
[0038]图5为对照品DL-对甲砜基苯丝氨酸乙酯的手性图谱。
[0039]图6为实施例4中化合物1的ee值检测的图谱。
具体实施方式
[0040]下面通过实施例的方式进一步说明本专利技术，但并不因此将本专利技术限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氟苯尼考中间体的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：在反应体系中，在pH值为7.0的条件下，在酮还原酶和辅酶存在下，将化合物3进行如下式的还原反应，得到化合物1，即可；其中，所述的还原反应的温度30℃；所述的酮还原酶的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示，“和/或”，与如SEQ ID NO.1所示同源性为96％以上的氨基酸序列；2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的还原反应中，所述的酮还原酶的浓度为0.1～10U/mL；和/或，所述的还原反应中，所述的辅酶的与化合物3的摩尔比为1:200-1:2；和/或，所述的还原反应中，所述的化合物3的浓度为10～100mg/mL；和/或，所述的酮还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；和/或，所述的还原反应的时间为2～6小时。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的还原反应中，所述的酮还原酶的浓度为0.3～3.25U/ml；和/或，所述的还原反应中，所述的辅酶的与化合物3的摩尔比为1:13；和/或，所述的还原反应中，所述的化合物3的浓度为10～15mg/mL；和/或，所述还原反应的时间为6小时。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的还原反应中，所述的酮还原酶的浓度为0.3U/ml或3.25U/ml；和/或，所述的还原反应中，所述的化合物3的浓度为10mg/ml。5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的还原反应中pH值通过使用缓冲液来控制和调节；和/或，所述的还原反应中还包括助溶剂；和/或，所述的还原反应中，所述的酮还原酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示同源性为96％以上的氨基酸序列；和/或，所述的还原反应中，所述的辅酶为NADH和/或NADPH；和/或，所述的还原反应在摇床中进行。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的缓冲液的浓度为0.09～0.12mol/L；和/或，所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液；和/或，所述的助溶剂为二甲亚砜；和/或，所述的助溶剂与所述的反应...

【专利技术属性】
技术研发人员：程占冰，秦丽军，田振华，徐艳冰，刘巧，
申请(专利权)人：弈柯莱生物科技上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：