双特异性HIV-1-中和抗体制造技术

在各个实施方案中，本发明专利技术一般涉及使用双特异性抗体来预防和治疗HIV。特异性抗体来预防和治疗HIV。

【技术实现步骤摘要】
双特异性HIV
‑1‑
中和抗体
[0001]本申请是基于2014年12月2日提交的申请号为201480074762.4的名为“经由细胞受体锚定使用具有天然架构的双特异性抗体改良的HIV
‑1‑
中和抗体效力和广度”的申请的分案申请。
[0002]相关申请的交叉引用
[0003]本申请要求2013年12月2日提交的美国临时专利申请号61/910,685(名称为IMPROVED HIV
‑1‑
NEUTRALIZING ANTIBODY POTENCY AND BREADTH VIA CELL RECEPTOR ANCHORING USING BISPECIFIC ANTIBODIES WITH NATIVE ARCHITECTURE)的优先权以及其权益，且通过引用的方式全文并入本文中。
专利

[0004]在各个实施方案中，本专利技术一般涉及使用双特异性抗体来预防和治疗HIV。

技术介绍

[0005]用抗体(Ab)被动免疫接种是一种预防与治疗传染病的公认方法。此方法可涉及从传染病恢复的供体制备人类免疫球蛋白并利用此类含有对感染生物体特异的Ab的制剂来保护接受者抵抗相同疾病。或者，治疗抗体可以通过用抗原免疫接种小鼠，然后工程改造/人源化小鼠Ab进入人类形式来制造。单克隆抗体(mAb)在物理特性和免疫化学反应性方面是同质的，且因此提供绝对特异性活性的可能性。
[0006]该特异性最终可为一些目标的限制，因此从业人员已开发由两种不同mAb且结合两种不同抗原类型的片段组成的“双特异性”mAb。这有利于例如结合仅弱表达的抗原。一些双特异性mAb可以刺激强免疫反应，从而限制其临床应用。一种改善此效应的最近方法是“CrossMab”方法，一种采用更天然的类抗体结构的双特异性抗体格式。
[0007]生成用于临床使用的抗病原体(如HIV)的高效力双特异性或二价抗体探索涉及许多不确定性。例如，HIV的低穗密度及穗结构可能妨碍抗体与HIV的二价结合，且细胞表面锚定的几何形状与空间关系没有进行明确表征。也未知HIV包膜上是否存在足够的表位可近性。锚定至宿主细胞膜的CrossMab双特异性抗体提供改良局部抗体浓度，指定顺序和/或相互依存的条目步骤，和补偿单价结合的可能性。

技术实现思路

[0008]在一方面，本专利技术涉及一种用于中和HIV的双特异性抗体。所述双特异性抗体包括第一抗体和第二抗体的一部分，其中所述第一抗体结合HIV包膜蛋白。在某些实施方案中，所述第一抗体是选自PGT145、PG9、PGT128、PGT121、10
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1074、3BNC117、VRC01、PGT151、4E10、10E8和其变体。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包括第二抗体的一部分，其中所述第二抗体结合细胞膜蛋白。例如，所述第二抗体可结合细胞受体蛋白或细胞膜共受体蛋白。在实施方案中，所述第二抗体是选自CD4抗体、CCR5抗体及CXCR4抗体，诸如Pro 140、伊巴利单抗(ibalizumab)、515H7或其变体。在各个实施方案中，所述双特异性抗体具有CrossMab格
式。
[0009]在另一方面，本专利技术提供一种包括第一抗体和第二抗体的一部分的双特异性抗体，其中所述第一抗体结合HIV包膜蛋白且所述第二抗体结合细胞膜蛋白。在各个实施方案中，所述双特异性抗体具有CrossMab格式。
[0010]在各个实施方案中，也提供包括本文所公开的双特异性抗体的药物组合物。所述药物组合物可调配成用于经口、鼻内、肺、真皮内、透皮、皮下、肌肉内、腹膜内或静脉内递送。
[0011]在又一方面，提供中和HIV的方法。所述方法包括使抗原结合位点与结合HIV包膜蛋白的双特异性抗体接触和使另一抗原结合位点与结合细胞膜蛋白的双特异性抗体接触的步骤。
[0012]在另一方面，也提供用于治疗感染HIV的患者的方法。所述方法包括对所述患者施用如本文所公开的双特异性抗体或药物组合物中的任一种。在实施方案中，所述患者为人类。
[0013]附图简述
[0014]在附图中，类似的元件符号一般是指贯穿不同视图的相同部件。此外，附图不一定按标度，而是一般设置重点说明本专利技术原理。在以下描述中，不同的本专利技术实施方案是参考以下附图进行描述，其中：
[0015]图1是说明衍生自两种IgG单克隆抗体的CrossMab抗体的图示。
[0016]图2A是说明靶向CD4的iMab抗体(单克隆抗体伊巴利单抗的简写)和靶向CCR5的Pro 140抗体的图示。
[0017]图2B是说明靶向HIV包膜gp120的mAb的图示。
[0018]图3是比较使用iMab与10E8抗体的组合与CrossMab双特异性10E8/iMab抗体的抗细胞对细胞至细胞HIV传输的最大抑制率百分比(MPI)的图。除非另外声明，否则所有基于iMab的双特异性抗体是使用MV1变体构建。
[0019]图4是比较使用各种浓度的10E8、Pro 140或10E8/P140抗体对X4和双向性HIV的各种菌株的抑制率的一系列图。P140是Pro 140的简写。
[0020]图5是比较使用各种浓度的10E8、Pro 140、10E8/P140或个别10E8和Pro 140单克隆抗体的组合对各种HIV菌株的抑制率的一系列图。
[0021]图6是比较使用各种浓度的10E8、X19、10E8/X19或10E8/P140抗体对各种HIV菌株的抑制率的一系列图。
[0022]图7是比较使用各种浓度的10E8、Pro 140、10E8/P140和10E8/αHer2抗体对各种HIV菌株的抑制率的一系列图。
[0023]图8A是比较CrossMab双特异性抗体10E8/iMab和Δ10E8/iMab与HIV
‑
1醣蛋白MPER的结合的图。
[0024]图8B是比较10E8(浅灰线)和Δ10E8(深灰线)抗iMab耐药性R5病毒(图A)和X4病毒(图B)的抑制率百分比，以及10E8/iMab(浅灰线)和Δ10E8/iMab(深灰线)抗iMab耐药性R5病毒(图C)和X4病毒(图D)的抑制率百分比的一系列图。
[0025]图9是比较使用各种浓度的10E8、Δ10E8、4E10、10E8/P140、Δ10E8/P140和4E10/P140抗体对各种HIV菌株的抑制率的一系列图。
[0026]图10是比较CrossMab抗体10E8/Pro140和10E8/iMab、其亲本单克隆抗体10E8、Pro140和iMab、以及多种其它靶向HIV包膜的单克隆抗体抗大量HIV包膜假型病毒的抗病毒覆盖率的图。
[0027]图11是比较单克隆抗体iMab(在所有图中为灰条)和CrossMab抗体PGT145/伊巴利单抗(145/iMab；左上图)、PGT128/伊巴利单抗(128/iMab；中上图)、PGT151/伊巴利单抗(151/iMab；右上图)、3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种能够中和HIV的具有CrossMab格式的双特异性抗体，其中所述抗体包含结合HIV包膜蛋白的第一抗体10E8或其变体的轻链和重链部分，以及结合细胞膜受体蛋白或细胞膜共受体蛋白的第二抗体伊巴利单抗或其变体的轻链和重链部分，其中所述第一抗体10E8的轻链部分包含与SEQ ID NO:33具有至少97％相同的氨基酸序列，并且所述第一抗体10E8的重链部分包含与SEQ ID NO:34具有至少97％相同的氨基酸序列，以及所述第二抗体伊巴利单抗的轻链部分包含与SEQ ID NO:1具有至少97％相同的氨基酸序列，并且所述第二抗体伊巴利单抗的重链部分包含与SEQ ID NO:2具有至少97％相同的氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其中所述第一抗体10E8的轻链部分包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列，并且所述第一抗体10E8的重链部分包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的双特异性抗体，所述第二抗体伊巴利单抗的轻链部分包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列，并且所述第二抗体伊巴利单抗的重链部分包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。4.一种能够中和HIV的具有CrossMab格式的双特异性抗体，其中所述抗体包含结合HIV包膜蛋白的第一抗体10E8或其变体的轻链和重链部分，以及结合细胞膜受体蛋白或细胞膜共受体蛋白的第二抗体Pro140或其变体的轻链和重链部分，其中所述第一抗体10E8的轻链部分包含与SEQ ID NO:31具有至少94％相同的氨基酸序列，并且所述第一抗体10E8的...

【专利技术属性】
技术研发人员：何大一，黄耀星，于健，
申请(专利权)人：纽约市哥伦比亚大学理事会，
类型：发明
国别省市：