一种人内胚层分化培养基以及培养方法技术

本发明专利技术提供了一种人内胚层诱导分化培养基，所述培养基由以下培养基A和培养基B组成：培养基A由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和ChIR99021；培养基B由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和LDN

【技术实现步骤摘要】
一种人内胚层分化培养基以及培养方法


[0001]本专利技术属于细胞培养
，具体涉及一种人内胚层分化培养基以及培养方法。

技术介绍

[0002]根据胚胎的早期发育机制，目前已有很多种将hPSCs分化为内胚层的方法。但目前还没有无异原性，全合成，低成本的方法出现。2005年Emmanuel E Baetge研究组使用含有2％FBS的RPMI
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1640作为基础培养基，通过加入Activin A和Wnt3A诱导内胚层分化，分化效率可达80％，但使用了血清和细胞因子，含有外源性成分血清，成本高(D'Amour et al.,2005)。2009年Douglas A.Melton研究组通过筛选4000多种小分子化合物发现IDE1和IDE2可以取代Activin A诱导内胚层分化，但是后续没有课题组可以重复出来，同时这种方法使用FBS含有外源性成分(Bogacheva et al.,2018；Borowiak et al.,2009)。2014年Rohit N.Kulkarni研究组使用通过在不含血清的基础培养基中加入Wnt3A和B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人内胚层诱导分化培养基，其特征在于，所述培养基由以下培养基A和培养基B组成：培养基A由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和ChIR99021；培养基B由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和LDN
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193189。2.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述维生素C的浓度为50～100mg/ml。3.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述ChIR99021的浓度为1～6μM。更优选地，所述ChIR99021的浓度为3μM。4.如权利要求1所述的诱导培养基，其特征在于，所述LDN
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193189的浓度为0.05～2μM。5.一种体外诱导干细胞向内胚层细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1预处理阶段：以Vitronectin作为细胞培养的基质胶，将干细胞在含有Y
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27632的E8培养基中培养，待细胞汇合度为80～90％时开始内胚层诱导；S2内胚层诱导阶段包括以下步骤：(a)将步骤S1得到的干细胞在如权利要求1所述的A培养基中诱导培养24h，每天换液；(b)在如权利要求1所述的B培养基中诱导培养48h，每天换液；得到由干细胞分化的内胚层细胞。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述干细胞为人胚胎干细胞或人诱导性多能干细胞。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养基A由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和ChIR99021；培养基B由以下组分组成：DMEM/F12培养基、维生素C和LDN
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193189。8.一种体外诱导干细胞向肝细胞分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1将权利要求5所述的步骤(b)得到的内胚层细胞在含有20ng/ml BMP2、30ng/ml FGF4和B...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹楠，赵志举，曾凡竹，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：