ITM-2C6在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了化合物ITM

【技术实现步骤摘要】
ITM-2C6在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及ITM-2C6在制备预防和/或治疗肿瘤药物中的应用。

技术介绍

[0002]KLHL22是一个重要的E3泛素化连接酶，其底物包括PLK1，DEPDC5和PD-1等，在细胞生长，增殖以及癌症形成方面具有重要调控作用。在此前的报道中，KLHL22通过泛素化DEPDC5激活了mTOR信号通路进而促进三阴性乳腺癌的增殖。因此，我们期望开发一种能够抑制KLHL22-DEPDC5相互作用的药物来阻碍乳腺癌细胞的生长。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供化合物ITM-2C6或其药学上可接受的盐的新用途。
[0004]所述化合物ITM-2C6，其SMILES结构式：
[0005]OC＝2/C＝C(/OC/C1＝C/C＝C/C＝C1/C)C＝CC＝2/C3＝N/N/C＝C3/C＝4C＝CC＝CC＝4OC
[0006]其结构式如式I所示：
[0007][0008]本专利技术所提供的化合物ITM-2C6或其药学上可接受的盐的新用途是其在如下任一中的应用：
[0009]1)抑制KLHL22与DEPDC5的相互作用；
[0010]2)制备抑制KLHL22与DEPDC5相互作用的产品；
[0011]3)抑制真核生物肿瘤细胞增殖；
[0012]4)制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；
[0013]5)预防和/或治疗肿瘤；
[0014]6)制备预防和/或治疗肿瘤的产品。
[0015]所述真核生物为人或哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞为乳腺癌细胞，具体可为三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231。
[0016]所述肿瘤为癌；所述癌具体为乳腺癌，进一步可为三阴性乳腺癌。
[0017]所述产品均可为药品。
[0018]以ITM-2C6或其药学上可接受的盐为活性成分制备的下述产品也属于本专利技术的保护范围；所述产品具有如下任一用途：
[0019]a)抑制KLHL22与DEPDC5相互作用；
[0020]b)抑制肿瘤细胞增殖；
[0021]c)预防和/或治疗肿瘤。
[0022]需要的时候，在上述产品中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体；所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
[0023]上述药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式；上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
[0024]上述药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。
[0025]为了构建KLHL22-DEPDC5相互作用的模型，专利技术人曾尝试了ALPHA，NanoBit等系统。发现在原核表达的KLHL22-DEPDC5无法在ALPHA系统下工作。由此推测原核表达的KLHL22及DEPDC5难以进行相互作用。同样，专利技术人利用了NanoBit系统进行KLHL22-DEPDC5系统的构建，同样无法工作。最终选择了NanoBRET筛选系统，在该系统中，我们选择了KLHL22与DEP结构域的相互作用，其中DEP是DEPDC5与KLHL22相互作用的结构域。
[0026]在构建KLHL22-DEP相互作用系统时，专利技术人将KLHL22和DEP构建到了Promega NanoBRET的pHTC，pHTN，pNLF1-N和pNLF1-C上，由此得到了8个质粒。并且对不同的蛋白N，C端连接进行了测试，最终发现pHTC-KLHL22与pNLF1-N-DEP具有最好的相互作用效果(图2)。除了蛋白不同的连接方式，我们同样测试了质粒的转染比例，我们发现当pHTC-KLHL22的质粒量为2ug，pNLF1-N-DEP的质粒量为0.02ug时具有较高的相互作用，该条件更适合用于药物筛选(图3)。除此之外，我们还在pHTC-KLHL22和pNLF1-N-DEP过表达的同时，过表达了ha-DEP质粒。发现ha-DEP的过表达抑制了KLHL22-DEP的NanoBRET信号，说明本专利技术的系统真实反映了KLHL22-DEP的相互作用。
[0027]利用上述建立的KLHL22-DEPDC5相互作用模型对化合物ITM-2C6进行筛选，加入化合物ITM-2C6的细胞中，KLHL22-DEP的相互作用强度要明显低于对照组(ctrl)强度。说明化合物具有抑制KLHL22-DEP相互作用的功能。并通过典型的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231对上述化合物ITM-2C6抗癌效果进行验证，结果表明，加入药物组的细胞数量远低于对照组数量，说明该化合物具有抑制三阴性乳腺癌细胞生长的作用。
附图说明
[0028]图1为NanoBRET的方法检测蛋白相互作用原理图；NanoLuc产生460nm荧光，激活618ligand 600nm以上的荧光，600nm/460nm的强度即两个蛋白相互作用强度。
[0029]图2为对不同的KLHL22及DEP连接方式进行检测。
[0030]图3为对不同转染比例的KLHL-HT，NL-DEP进行相互作用的强度检测；KLHL-HT：NL-DEP：A 1μg+1μg，B 2μg+0.2μg，C 2μg+0.02μg，D 2μg+0.002μg，negative 2μg+0μg；positive 2μg P53-HT+0.2μg NL-MDM2。
[0031]图4为在过表达NanoBRET相关质粒的基础上再过表达空载体或ha-DEP，检测NanoBRET系统的信号强度，两者之间有显著性差异，p＝0.0062。
[0032]图5为化合物ITM-2C6对KLHL22-DEP蛋白相互作用的抑制。
[0033]图6为化合物ITM-2C6对MD A-MB-231的抑制作用。
具体实施方式
[0034]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步阐述，但本专利技术并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
[0035]下述实施例中：人类KLHL22(uniprot：Q53GT1)，DEP(DEPDC5 DEP结构域)
[0036]KLHL-HT代表pHTC-KLHL22；HT-KLHL代表pHTN-KLHL22；
[0037]KLHL-NL代表pNL1-C-KLHL22；NL-KLHL代表pNLF1-N-KLHL22；
[0038]DEP-NL代表pNLF1-C-DEP；NL-DEP代表pNLF1-N-DEP；
[0039]DEP-HT代表pHTC-DEP；HT-DEP代表pHTN-DEP.
[0040]下述实施例采用的方法：nanoBRET(promega，https://www.pro本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.式I所示的化合物ITM-2C6或其药学上可接受的盐在如下任一中的应用：1)抑制KLHL22与DEP的相互作用；2)制备抑制KLHL22与DEP相互作用的产品；3)抑制真核生物肿瘤细胞增殖；4)制备真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；5)预防和/或治疗肿瘤；6)制备预防和/或治疗肿瘤的产品。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述真核生物为人或哺乳动物；所述肿瘤细胞为癌细胞；所述癌细胞为乳腺癌细胞，进一步为三阴性乳腺癌细胞。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述乳腺癌细胞为三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为癌；所述癌为乳腺癌。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述乳腺...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏培雪，高凯瑜，刘颖，
申请(专利权)人：南京景瑞康分子医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：