高持久性的驱蚊生物制剂及制备方法技术

本发明专利技术涉及生物灭蚊农药技术领域，特别涉及高持久性的驱蚊生物制剂及制备方法；苏云金杆菌以色列亚种原菌在斜面种子培养基中进行种子培养，随后将种子接入种子罐的发酵培养基中进行种子培养，所述斜面种子培养基包括牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水的质量比为0.5～1：1～2：0.5～1：0.5～1：3～4：400～500，所述发酵培养基由以下重量百分比的各原料制得：玉米淀粉2～2.5％、蛋白胨0.2～0.4％、酵母粉0.1～0.2％、豆粕粉2.2～3.0％、玉米浆1.0～1.5％、磷酸二氢钾0.05～0.1％、硫酸镁0.01～0.03％、氯化钙0.1～0.2％、硫酸锰0.003～0.005％和去离子水92.065～94.337％。本发明专利技术的驱蚊生物制剂的持续时间长，产品稳定性高。产品稳定性高。

【技术实现步骤摘要】
高持久性的驱蚊生物制剂及制备方法


[0001]本专利技术涉及生物灭蚊农药
，特别涉及高持久性的驱蚊生物制剂及制备方法。

技术介绍

[0002]蚊子是传播人类疾病的重要媒介昆虫之一。灭蚊剂的发展经历了矿物油、植物粉和化学杀虫剂到微生物灭蚊剂等阶段。幼虫时期是防治蚊虫的关键时期。苏云金芽孢杆菌以色列亚种(Bacillus thuring iensis subsp.israelensis，简称Bti)以其对蚊科幼虫高毒，且高效安全、易于分解、低残留、与环境相容的特性，成为被广泛关注的新的灭蚊剂的代表。Bti是Goldberg和Margalit于1977年发现的一种对蚊科幼龄害虫具有高度毒力的病原细菌。自发现以来，人们利用Bti制剂为控制蚊媒病的传播做出了大量工作。然而，现有剂型持效期短，限制了Bti的更大规模的应用，通过改进制剂的持效性可以减少使用次数和防治成本，因此，研究开发有缓释作用持效期长的Bti剂型具有重要意义。
[0003]为此，提出高持久性的驱蚊生物制剂及制备方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供高持久性的驱蚊生物制剂及制备方法，该驱蚊生物制剂的持续时间长，产品稳定性高。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
[0006]高持久性的驱蚊生物制剂，苏云金杆菌以色列亚种原菌在斜面种子培养基中进行种子培养，随后将种子接入种子罐的发酵培养基中进行种子培养，所述斜面种子培养基包括牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水的质量比为0.5～1：1～2：0.5～1：0.5～1：3～4：400～500，所述发酵培养基由以下重量百分比的各原料制得：玉米淀粉2～2.5％、蛋白胨0.2～0.4％、酵母粉0.1～0.2％、豆粕粉2.2～3.0％、玉米浆1.0～1.5％、磷酸二氢钾0.05～0.1％、硫酸镁0.01～0.03％、氯化钙0.1～0.2％、硫酸锰0.003～0.005％和去离子水92.065～94.337％，其中，所述苏云金杆菌以色列亚种原菌的添加量为1
‑
2支斜面种子/T，所述发酵种子的添加量为1kg/T。
[0007]具体的，所述牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水的质量比为1：2：1：1：4：500。
[0008]具体的，所述发酵培养基由以下重量百分比的各原料制得：玉米淀粉2.5％、蛋白胨0.4％、酵母粉0.2％、豆粕粉3.0％、玉米浆1.5％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.03％、氯化钙0.2％、硫酸锰0.005％和去离子水92.065％。
[0009]高持久性的驱蚊生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0010](1)发酵种子的斜面种子培养基制备，按配比称取相应的原料组分，将牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水分别置于种子罐中，添加苏云金杆菌以色列亚种原菌，在PH 7.0～7.2以及培养温度为32℃的条件下培养4～5d，得到种子A；
[0011](2)发酵培养基的制备，按配比称取相应的原料组分，将玉米淀粉、蛋白胨、酵母粉、豆粕粉、玉米浆、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙、硫酸锰和去离子水分别置于种子罐中，在PH 7.5～7.8以及121℃的条件下灭菌30min，备用，得到发酵培养基B；
[0012](3)将种子A接入种子罐的发酵培养基B中进行种子培养，培养温度为32℃，控制通风比为1：1.1，培养时间为28～36h，当菌体中芽孢及晶体含量和芽孢总量大于90％，得到的含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液C，进行(4)步骤；
[0013](4)发酵液的预处理，将含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液C用盐酸调节PH至4.1～4.2，并用100目筛网过滤，取滤液且加入去离子水稀释，随后加入0.318％的硫酸锌，搅拌3min，再加入0.227％的黄血盐，搅拌1min，随后静置15min，离心去上清液，得到含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液D；
[0014](5)发酵液的离心浓缩，用碟片式离心机将含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液D浓缩3～4倍，弃去上清液，并控制芽孢晶体损失率小于1％，得到含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵浓缩液E；
[0015](6)喷雾造粒，先将含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵浓缩液E进行喷雾干燥得到含有苏云金杆菌以色列亚种的菌粉，随后进行制粒，得到驱蚊生物制剂。
[0016]具体的，所述(4)步骤中的滤液与去离子水的质量比为7：4。
[0017]本专利技术的有益效果为：
[0018](1)本专利技术的驱蚊生物制剂使用方便，原料来源广泛，制剂成本低，无化学污染，对环境无危害，具有广阔的应用前景；
[0019](2)本专利技术的驱蚊生物制剂持续时间长，产品稳定性高。
具体实施方式
[0020]下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0021]实施例1
[0022]高持久性的驱蚊生物制剂，苏云金杆菌以色列亚种原菌在斜面种子培养基中进行种子培养，随后将种子接入种子罐的发酵培养基中进行种子培养，所述斜面种子培养基包括牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水的质量比为1：2：1：1：4：500，所述发酵培养基由以下重量百分比的各原料制得：玉米淀粉2.5％、蛋白胨0.4％、酵母粉0.2％、豆粕粉3.0％、玉米浆1.5％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.03％、氯化钙0.2％、硫酸锰0.005％和去离子水92.065％，其中，所述苏云金杆菌以色列亚种原菌的添加量为35g/L，所述种子的添加量为1kg/T。
[0023]高持久性的驱蚊生物制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0024](7)发酵种子的斜面种子培养基制备，按配比称取相应的原料组分，将牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水分别置于种子罐中，添加苏云金杆菌以色列亚种原菌，在PH 7.0～7.2以及培养温度为32℃的条件下培养4～5d，得到种子A；
[0025](8)发酵培养基的制备，按配比称取相应的原料组分，将玉米淀粉、蛋白胨、酵母
粉、豆粕粉、玉米浆、磷酸二氢钾、硫酸镁、氯化钙、硫酸锰和去离子水分别置于种子罐中，在PH 7.5～7.8以及121℃的条件下灭菌30min，备用，得到发酵培养基B；
[0026](9)将种子A接入种子罐的发酵培养基B中进行种子培养，培养温度为32℃，控制通风比为1：1.1，培养时间为28～36h，当菌体中芽孢及晶体含量和芽孢总量大于90％，得到的含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液C，进行(4)步骤；
[0027](10)发酵液的预处理，将含有苏云金杆菌以色列亚种的发酵液C用盐酸调节PH至4.1～4.2，并用100目筛网过滤，取滤液且加入去本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.高持久性的驱蚊生物制剂，苏云金杆菌以色列亚种原菌在斜面种子培养基中进行种子培养，随后将种子接入种子罐的发酵培养基中进行种子培养，其特征在于，所述斜面种子培养基包括牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水，所述牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水的质量比为0.5～1：1～2：0.5～1：0.5～1：3～4：400～500，所述发酵培养基由以下重量百分比的各原料制得：玉米淀粉2～2.5％、蛋白胨0.2～0.4％、酵母粉0.1～0.2％、豆粕粉2.2～3.0％、玉米浆1.0～1.5％、磷酸二氢钾0.05～0.1％、硫酸镁0.01～0.03％、氯化钙0.1～0.2％、硫酸锰0.003～0.005％和去离子水92.065～94.337％，其中，所述苏云金杆菌以色列亚种原菌的添加量为35g/L，所述种子的添加量为1kg/T。2.根据权利要求1所述的高持久性的驱蚊生物制剂，其特征在于，所述牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、琼脂和去离子水的质量比为1：2：1：1：4：500。3.根据权利要求1所述的高持久性的驱蚊生物制剂，其特征在于，所述发酵培养基由以下重量百分比的各原料制得：玉米淀粉2.5％、蛋白胨0.4％、酵母粉0.2％、豆粕粉3.0％、玉米浆1.5％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.03％、氯化钙0.2％、硫酸锰0.005％和去离子水92.065％。4.根据权利要求1
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3任一所述的高持久性的驱蚊生物制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)发酵种子的斜面种子培养基制备，按配比称取相应的原料组分，将牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：雍思龙，林诗琪，张虎，陈衍学，李婵，刘畅，
申请(专利权)人：湖北绿天地生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：