一种内皮细胞损伤抑制剂制造技术

本发明专利技术提供了一种内皮细胞损伤抑制剂，属于心血管疾病技术领域。本发明专利技术通过荧光定量PCR检测发现基因AL592494.4在ox

【技术实现步骤摘要】
一种内皮细胞损伤抑制剂


[0001]本专利技术属于心血管疾病
，尤其涉及一种内皮细胞损伤抑制剂。

技术介绍

[0002]目前，心血管相关疾病依然是全世界范围内威胁人类健康的首要原因。冠状动脉粥样硬化性心脏病也被称之为缺血性心脏病，其是指冠状动脉发生粥样硬化引起官腔狭窄或闭塞，导致心肌缺氧或坏死而引起的心脏病。动脉粥样硬化的发病机制目前尚未完全研究清楚。目前，公认的发病机制相关学说包括内皮损伤
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反应学说，脂质浸润学说，炎症学说，血小板聚集和血栓形成假说。其中，内皮损伤
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反应学说是目前公认度最高的学说。内皮损伤
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反应学说是指氧化低密度脂蛋白在血管壁上大量堆积，引发黏附分子、趋化蛋白在血管壁管腔内侧生产，最终导致内皮细胞损伤，内皮细胞损伤后会导致动脉粥样硬化病变的形成、进展和心血管事件的发生。因此，详细的研究内皮细胞损伤的机制，有效的减少冠状动脉内皮细胞损伤是治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的有效方式。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种能够有效减少冠状动脉内皮细胞损伤的抑制剂，从而为冠状动脉粥样硬化性心脏病提供新的治疗方式。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：其一，本专利技术提供了一种基因AL592494.4作为靶点分子在抑制冠状动脉内皮细胞损伤中的应用，所述基因AL592494.4的External Transcript ID为ENST00000437523.1。
[0005]其二，本专利技术提供了基因AL592494.4的抑制剂在制备冠状动脉粥样硬化性心脏病药物中的应用。
[0006]优选地，所述抑制剂为siRNA。
[0007]优选地，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.13所示，所述siRNA的反义链如SEQ ID NO.14所示。
[0008]其三，本专利技术提供了基因AL592494.4的抑制剂在制备冠状动脉内皮细胞损伤抑制剂中的应用。
[0009]优选地，所述抑制剂为siRNA，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.13所示，所述siRNA的反义链如SEQ ID NO.14所示。
[0010]其四，本专利技术提供了一种用于制备冠状动脉内皮细胞损伤抑制剂的siRNA，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.13所示，所述siRNA的反义链序列如SEQ ID NO.14所示。
[0011]其五，本专利技术提供了一种冠状动脉粥样硬化性心脏病治疗药物，所述药物含有基因AL592494.4的抑制剂，所述抑制剂为siRNA，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.13所示，所述siRNA的反义链如SEQ ID NO.14所示。本专利技术的有益效果是：本专利技术通过实验发现基因AL592494.4在ox
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LDL诱导的冠状动脉内皮细胞损伤中
显著高表达；其次，本专利技术提供了一种显著抑制AL592494.4表达的si
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AL592494.4；其次，本专利技术发现敲减AL592494.4能够有效的降低ox
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LDL导致的HCAECs细胞的生存率下降，细胞凋亡升高，Caspase3蛋白表达升高，因此，可将AL592494.4抑制剂用于制备冠状动脉内皮细胞损伤抑制剂，从而为治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病提供新的治疗方式。
附图说明
[0012]图1ox
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LDL诱导后，冠状动脉内皮细胞HCAECs中差异表达的基因；图2si
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AL592494.4的抑制剂效果结果图；图3敲减AL592494.4对于ox
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LDL导致的HCAECs细胞的生存率下降影响的结果图；图4敲减AL592494.4对于ox
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LDL导致的HCAECs细胞凋亡影响的结果图；图5敲减AL592494.4对于ox
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LDL导致的HCAECs细胞Caspase3蛋白表达上调影响的结果图。
具体实施方式
[0013]为能清楚说明本方案的技术特点，下面通过具体实施方式，对本方案进行阐述。
[0014]实施例1检测ox
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LDL诱导的冠状动脉内皮细胞HCAECs中差异表达的基因1.提取ox
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LDL处理后的HCAECs细胞RNA（1）将HCAECs细胞接种于6孔细胞培养板中，分别添加2ml 0μg/ml和100 μg/ml ox
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LDL，放入细胞培养箱中，培养24h；（2）培养24h后，每孔加入1ml Trizol，吹打混匀之后，室温静置5min；（3）将细胞转移至新的EP管中，加入200μl的氯仿，混匀之后，室温静置5min；（4）调整离心机参数为4℃，12000rpm/min，离心15min，离心之后，小心的吸取上层的水相至新的EP管中；（5）加入等体积预冷的异丙醇，混匀后，室温静置10min，4℃ 12000rpm/min 离心10min；（6）去除上清，加入DEPC水配置的75%乙醇洗涤沉淀，调整离心机参数为4℃，8000rpm/min，离心5min；（7）去除上清，置于超净工作台中，干燥至乙醇完全蒸发，加入30μl DEPC水；2.逆转录得到cDNA（1）去除基因组DNA反应体系如下：
反应条件如下：42℃ 2分钟，4℃保存。
[0015]（2）逆转录反应反应体系如下：反应条件如下：37℃ 15min；85℃ 5s；4℃保存。
[0016]3.实验荧光定量PCR检测差异表达的基因（1）设计RP11
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776H12.1, AL592494.4, AL162400.1, LINC01927, LINC01618的引物，具体序列如下：
（2）配置荧光定量PCR反应液，具体如下：
（3）按照如下反应条件进行荧光定量PCR反应：95℃ 1min；95℃ 5s，60℃ 40s，72℃ 60s，35个循环；（4）使用2
‑
ΔΔCt
法进行数据分析，相对表达量结果如图1。
[0017]从图中可以看出，基因RP11
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776H12.1的相对表达量为0.959
±
0.041，差异不具有统计学意义；基因AL592494.4的相对表达量为3.381
±
0.279，差异具有统计学意义；基因AL162400.1的相对表达量为0.737
±
0.074，差异具有统计学意义；基因LINC01927的相对表达量为1.105
±
0.045，差异不具有统计学意义；基因LINC01618的相对表达量为1.226
±
0.113，差异不具有统计学意义。
[0018]从上述结果可以看出，ox
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LDL处理后，HCAECs细胞中基因AL592494.4高表达且差异具有统计学意义。
[0019]实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因AL592494.4作为靶点分子在抑制冠状动脉内皮细胞损伤中的应用，其特征在于，所述基因AL592494.4的External Transcript ID为ENST00000437523.1。2.基因AL592494.4的抑制剂在制备冠状动脉粥样硬化性心脏病药物中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为siRNA。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述siRNA的正义链序列如SEQ ID NO.13所示，所述siRNA的反义链如SEQ ID NO.14所示。5.基因AL592494.4的抑制剂在制备冠状动脉内皮细胞损伤抑制剂中的应用。6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵魏芳，于婧，宫志华，刘玉敏，
申请(专利权)人：青岛市中心医院，
类型：发明
国别省市：