一种制备胰腺炎组织单细胞悬液的试剂盒和方法技术

本发明专利技术公开了一种制备胰腺炎组织单细胞悬液的试剂盒和方法，属于细胞分离制备领域。本发明专利技术的方法包括如下步骤：a)胰腺炎机械分离；b)使用含胶原酶、DNase I和Dispase的消化液消化；c)红细胞裂解；优选地，还包括d)Accutase消化液消化。本发明专利技术的方法可分离得到急性胰腺炎组织的单细胞，其单细胞率高，细胞活力大于80％，十分适用于单细胞测序文库构建。建。建。

【技术实现步骤摘要】
一种制备胰腺炎组织单细胞悬液的试剂盒和方法


[0001]本专利技术属于细胞分离制备领域。

技术介绍

[0002]急性胰腺炎(Acute Pancreatitis，AP)是一种常见危重急腹症，起病急骤，发展迅速，预后凶险，病死率高，是跨越多个世纪的医学难题。尽管AP的发病率只占胰腺炎的5
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10％，但100多年来其病死率保持50％以上，严重影响患者的预后。一直以来，多因素导致酶原在胰腺组织内的异常活化引起胰腺组织的自身消化是AP组织出血、坏死的重要原因之一，但其确切发病机制及细胞演进图谱并不清楚，虽然有多种AP动物模型可供研究AP发生和转归的机制，但目前所有的动物模型均不能有效模拟人AP的体内过程，故对人AP组织中的细胞图谱研究将能最真实反应AP细胞的动态过程，近年发展的单细胞测序技术提供了一个在单细胞水平探索AP细胞构成和类型转变的契机。
[0003]专利申请CN 110257318 A公开了一种慢性胰腺炎(CP)小鼠胰腺单细胞悬液的制备方法，该方法包括：使用浓度2:1的I型胶原酶(1～2mg/mL)和V型胶原酶(0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于制备胰腺炎组织单细胞悬液的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括如下试剂：试剂(1)：缓冲液，含有1～3％BSA，4～6％FBS，Typsin Inhibitor 0.05～0.15mg/mL，Protease Inhibitor 0.005～0.015mg/mL，Benzamidine HCl 0.05～0.15mg/mL，缓冲液的液体介质为PBS、生理盐水或动物细胞培养基；试剂(2)：消化液1，含有I、II、IV、VIII型胶原酶各0.5～1.5mg/mL，DNase I 0.5～1.5U/mL，Dispase 0.2～0.3U/mL，消化液1的液体介质为试剂(1)；试剂(3)：红细胞裂解液。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括如下部分：试剂(1)：缓冲液，含有2％BSA，5％FBS，Typsin Inhibitor 0.1mg/mL，Protease Inhibitor 0.01mg/mL，Benzamidine HCl 0.1mg/mL，余量为PBS、生理盐水或动物细胞培养基；试剂(2)：消化液1，含有I、II、IV、VIII型胶原酶各1mg/mL，DNase I 1U/mL，Dispase 0.25U/mL，消化液1的液体介质为试剂(1)；试剂(3)：红细胞裂解液。3.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆然，莫显明，黄巧容，李雪，范川文，赵今，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：