一种人KLF7基因启动子及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种人KLF7基因启动子及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。所述人KLF7基因启动子核苷酸序列选自如SEQ ID NO：1

【技术实现步骤摘要】
一种人KLF7基因启动子及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及一种人KLF7基因启动子及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]Kr
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ppel样因子(Kruppel
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like factors，KLFs)是一类存在于动物体内的转录因子，它们参与细胞增殖、分化和凋亡等多个生命过程的调控。目前，人体内共发现了17种KLF因子，它们的蛋白质结构特征是羧基端(carboxyl terminus，C端)具有三个典型的C2H2锌指结构作为DNA结合结构域，氨基端(amino terminus，N端)序列作为转录调控结构域在家族成员间保守性差。1998年，Matsumoto等通过简并PCR技术从人血管内皮细胞中克隆得到一个之前从未报道过的KLF因子，根据其广泛表达于成人多种组织的特性，将其命名为普遍存在的Kr
ü
ppel样因子(Ubiquitous KLF，UKLF)。根据系统命名法，UKLF又被命名为KLF7。
[0003]人KLF7(human KLF7，hKLF7)基因位于2号染色体2q33.3区域的反义链，数量遗传学报道显示人2q33.3与早发性关节炎(early
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onset osteoarthritis，FOA)和早发性肥胖(肥胖反弹的年龄)相关。KLF7单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)研究表明，KLF7是人类肥胖和2型糖尿病发生的相关基因。日本人群体研究表明，hKLF7第二内含子的一个SNP(rs2302870，chr2:207953406A/C)与2型糖尿病(type2diabetes)的发生相关。丹麦人群体研究显示rs2302870位点与2型糖尿病和肥胖没有显著相关，但是位于hKLF7 5
’
UTR的另一个SNP(rs7568369，chr2:208031315C/A)与肥胖相关。
[0004]采用SNP基因芯片与DNA池相结合(SNP Microarrays and Pooling，SNP
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MAP)的研究显示位于人KLF7和cAMP反应元件结合蛋白1(cAMP responsive element binding protein 1，CREB1)之间的一个SNP位点(rs991684)与人轻度智力障碍(Mild mental impairment，MMI)相关，该位点可能与KLF7和(或)CREB1处于连锁不平衡状态。一个瘢痕疙瘩家系5个个体(4例瘢痕疙瘩患者，1例健康人)的全基因组重测序结果显示，KLF7基因拷贝数变异(copy number variation,CNV)可能与瘢痕疙瘩的形成有关。
[0005]转录因子KLF7是一个核蛋白，具有核定位序列(Nuclear localization sequence，NLS)，主要定位于细胞核中。NCBI Gene数据库检索显示，hKLF7至少能够转录5种不同转录本，编码4种不同的蛋白质和1种长链非编码RNA。
[0006]目前被广泛研究的是编码最长链蛋白质的KLF7转录本，该转录本翻译的蛋白在脊椎动物间高度保守，各个结构域在高等动物(哺乳动物和鸟类)间的序列相似性大于85％。人编码最长KLF7蛋白质的转录本，编码302个氨基酸(amino acid，aa)，N端为转录调控域，C端是由3个高度保守的C2H2锌指结构组成的DNA结合结构域。KLF7蛋白质表达水平受到N端序列调控，缺失N端1
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76aa的序列明显提高KLF7的蛋白质表达水平。另外，多种药物在发挥作用的同时调控KLF7的表达。例如：吗啡可以提高人淋巴细胞中的KLF7转录和翻译水平，并且这种促进作用是纳洛酮可逆的(naloxone
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reversible)，提示了KLF7在吗啡介导的生理反应中具有重要作用。绿茶中的多酚
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儿茶素[(
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)
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catechin]在抑制KLF7表达的同时，能明
显促进3T3
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L1脂肪细胞脂联素的表达和分泌水平以及对葡萄糖的摄取能力，调控KLF7的表达水平有助改善脂肪细胞的内分泌功能和胰岛素敏感性。
[0007]KLF7表达量增加是小儿急性淋巴细胞白血病(pediatric acute lymphoblastic leukemia)预后不良的独立预测因子。虽然动物水平研究显示，KLF7
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/
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小鼠和KLF7+/+小鼠胚肝中HSPCs的活性相似，并且连续移植实验显示，KLF7
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细胞的长期多谱系植入能力(long
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term multilineage engraftment)和自我更新能力与KLF7+/+细胞相比没有明显差别。但是，体外研究显示过表达KLF7抑制髓系祖细胞生长，并且造成短期和长期再植活性的丢失；过表达KLF7抑制从造血干细胞到普通淋巴系祖细胞的多谱系生长，但不影响T细胞生长相反增强早期胸腺细胞的存活。这些结果提示，虽然KLF7不是正常的造血干细胞和祖细胞发挥功能必需的，但是增加KLF7表达能抑制骨髓细胞的增殖并促进早期胸腺细胞存活。此外，RNA表达分析显示，KLF7抑制髓系祖细胞生长不通过调控Cdkn1a(p21Cip1/Waf1)表达实现，缺失Cdkn1a不能拯救再植缺陷。
[0008]综上所述，KLF7是多种人类疾病发生的调控基因，揭示KLF7的表达调控机制对于治疗人类多种疾病具有重要意义。但是目前还没针对多种人KLF7多种转录本表达的启动子报道，确认人KLF7基因启动子，对于揭示多种人KLF7转录剪接体表达的调控机制和开发靶向KLF7表达的药物具有应用价值。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的是提供一种人KLF7基因启动子及其构建方法与应用，以解决上述现有技术存在的问题，可用于检测多种人KLF7基因转录本剪接体表达调控机制。
[0010]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0011]本专利技术提供一种人KLF7基因启动子，所述人KLF7基因启动子核苷酸序列选自如SEQ ID NO：1
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SEQ ID NO：18所示任一条序列。
[0012]进一步地，所述人KLF7基因启动子在真核细胞中具有启动子活性。
[0013]本专利技术还提供一种引物组，所述引物组包含上游引物如SEQ ID NO：21
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SEQ ID NO：31所示，下游引物如SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：32所示；
[0014]利用任一条所述上游引物和任一条所述下游引物组合，经PCR扩增获得所述的人KLF7基因启动子。
[0015]本专利技术还提供一种重组载体，包含所述的人KLF7基因启动子。
[0016]本专利技术还提供一种重组菌，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人KLF7基因启动子，其特征在于，所述人KLF7基因启动子核苷酸序列选自如SEQ ID NO：1
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SEQ ID NO：18所示任一条序列。2.一种引物组，其特征在于，所述引物组包含上游引物如SEQ ID NO：21
‑
SEQ ID NO：31所示，下游引物如SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20和SEQ ID NO：32所示；利用任一条所述上游引物和任一条所述下游引物组合，经PCR扩增获得权利要求1所述的人KLF7基因启动子。3.一种重组载体，其特征在于，包含权利要求1所述的人KLF7基因启动子。4.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志威，陈月婵，李瑶瑶，高玲羽，张燚，吴燕名，李泽泉，吴湘祁，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：