基于四面体三脚架辅助的多发夹串级联组装构建通用型电化学生物传感器超灵敏检测靶制造技术

核酸是人体重要的遗传物质，在存储，复制和传递遗传信息中发挥重要作用，甲基化DNA是主要表观遗传学修饰方式之一，异常的DNA序列，碱基突变和表观遗传学变化常导致癌症的发生，为实现早期靶标检测，我们设计一个四面体辅助多串联发夹级联组装检测靶标（DNA/RNA/甲基化DNA等）的通用电化学传感器，孵育多个发夹级联组装触发信号扩增反应，电信号检测在RuHex溶液中实现，其强有力的静电吸引作用到DNA磷酸骨架上导致DPV电流响应增加。靶标检测线性浓度范围为10 aM至100 pM，最低检测限到1.78 aM。借助特异性酶切反应，在电化学平台上孵育甲基化DNA进行相关实验进一步证明该平台的优越性。越性。越性。

【技术实现步骤摘要】
基于四面体三脚架辅助的多发夹串级联组装构建通用型电化学生物传感器超灵敏检测靶


[0001]本专利技术涉及生物分析
，构建多个发夹逐渐串联组装在DNA四面体三脚架的电化学生物传感器检测核酸 DNA和DNA甲基化。

技术介绍

[0002]核酸作为人体的主要遗传物质，决定着生物分子，蛋白质和细胞成分的结构，并且在体内存储，调节和传递遗 传信息方面起着至关重要的作用。核酸的结构异常，基因碱基突变和染色体异常大大增加了癌症和疾病等的发 生率。DNA甲基化是主要的表观遗传学修饰方式之一，甲基基团在DNA甲基转移酶(DNMT)的催化作用下与5
‑ꢀ
甲基胞嘧啶通过共价键结合，甲基化常发生在胞嘧啶
‑
磷酸
‑
鸟嘌呤位点(CpG岛)，表观遗传变化对于癌症的 早期诊断，预后和治疗起着至关重要的作用，有效的早期诊断将高度避免癌症和其他恶性肿瘤的发生，因此， 为了满足不断发展科学研究和临床需求，越来越多的超灵敏和超精确的DNA分子检测方法已在各个领域显得迫 在眉睫。
[0003]传统的核酸检测方法包括P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.基于构建一种稳定坚固的四面体三脚架辅助于多发夹串级联组装杂交反应超灵敏的电化学生物传感器优于检测核酸DNA和甲基化DNA，其方法技术都将进行在后详细说明。2.根据权利要求1所述“四面体三脚架”3条55碱基链和82碱基长链通过高温变性稳定形成，3条链5
’
端修饰巯基，合成后TECP还原于电极上稳定修饰。3.根据权利要求1所述多发夹串级联组装的均匀溶液各单独发夹通过高温变性后置室温过夜稳定形成，序列有效设计为靶标存在时促发逐个发夹后形成多发夹级联杂交链。4.根据权利要求2所述四面体三脚架凸出顶端部分稳定识别捕获靶标，权利要求2所述发夹H1第一结构域在靶标存在时被催化打开，两者稳定杂交后顺利促发多发夹串级联杂交反应。5.同时靶标和四面体凸出端含5
’‑
CCGG
‑3’
结合后在Hpa
ꢀⅡ
酶识别验证DNA甲基化,靶标:5
’‑
TCTCAAGGACCACCGCATCTCTACCGCAGGCCGG AGCTGCCGAGCTTT
‑3’
；四面体三脚架:5
’‑
ACATTCCTAAGTCTGAAACATTACAGCTTGCTACACGAGAAGAGCCGCCATAGTATTTAAAGCTCGGCAGCTCCGGCCTGCG
‑3’
。6.根据权利要求3所述4发夹杂交链串联组装，各发夹各部分的碱基互补配对部分层层级联反应形成树枝状杂交链，稳定于四面体支架，发夹H1:5
’‑
GTAGAGATGCGGTGGTCCTTGAGAGAATTCTTAACGTCGCCTCATACTGTCTCAAGGACCACCGCAT
‑3’
；发夹H2:5
’‑
TCTCAAGGACCACCGCATCTCTACATGCGGTGGTCCTTGAGACAGTATGCCTAGCAGAGTT
‑3’
；发夹H3:5
’‑
TCGCCTCCTAGCAGAGTTACTTTGAAACTCTGCTAGGAGGCGACGTTAAGAATTC
‑3’
；发夹H4:5
’‑
TCAAAGTAACTCTGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：易钢，黄玉麒，赵书慧，张文秀，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：