里氏木霉的突变株和使用该突变株的蛋白质的制造方法技术

本发明专利技术是包含序列号4～6的任一项所示的氨基酸序列的多肽的功能缺损或降低了的里氏木霉(Trichoderma reesei)的突变株，以及通过用包含乳糖的培养基培养该突变株来高产蛋白质的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】里氏木霉的突变株和使用该突变株的蛋白质的制造方法
本专利技术涉及蛋白质制造能力提高的里氏木霉(Trichodermareesei)突变株和使用该突变株的蛋白质的制造方法。
技术介绍
已知里氏木霉(Trichodermareesei)具有高的蛋白质制造能力，到目前为止已经进行了使用里氏木霉(Trichodermareesei)的蛋白质的制造的研究。里氏木霉(Trichodermareesei)在蛋白质之中特别是制造被分类为糖化酶的纤维素酶的能力优异，例如为了进一步提高纤维素酶制造量，进行了控制纤维素酶制造的因子的过表达、缺损、用于纤维素酶制造的培养条件的研究等。非专利文献1中，在里氏木霉(Trichodermareesei)的控制纤维素酶的制造的因子之中，通过使作为抑制纤维素酶的制造的转录因子的Cre1的功能降低，获得了具有高的纤维素酶制造能力的里氏木霉(Trichodermareesei)的突变株。另外，作为使里氏木霉(Trichodermareesei)的纤维素酶的生产量提高的方法，非专利文献2中记载了用添加了葡萄糖、乳糖的培养基对里氏木霉(Trichodermareesei)进行培养的方法。现有技术文献非专利文献非专利文献1:JulianoP，SinglenucleotidepolymorphismanalysisofaTrichodermareeseihyper-cellulolyticmutantdevelopedinJapan，Bioscience,Biotechnology,andBiochemistry，Volume77，2013，Issue3，P534-543非专利文献2:AntonellaA，Rugulationofcellulaseandhemicellulasegeneexpressioninfungi，Currentgenomics，Volume14，2013，P230-249
技术实现思路
专利技术要解决的课题如上所述，作为控制里氏木霉(Trichodermareesei)的蛋白质制造的因子之一的转录因子已经被阐明，但考虑这不过是控制机制的一部分。因此本专利技术中，以探索控制里氏木霉(Trichodermareesei)的蛋白质制造的新机制、获得蛋白质制造能力被进一步强化的里氏木霉(Trichodermareesei)的突变株和提供使用该里氏木霉(Trichodermareesei)的突变株的蛋白质的制造方法为课题。用于解决课题的手段本专利技术者考虑，如果能够特定到目前为止未知的能够增加蛋白质的生产量的基因，则能够进一步提高里氏木霉(Trichodermareesei)的蛋白质的制造量，进而进行了深入研究，结果发现，通过培养选自包含序列号4、5、6的任一项所示的氨基酸序列的多肽中的1种以上多肽的功能缺损或降低了的里氏木霉(Trichodermareesei)的突变株，能够提高蛋白质制造能力，从而完成了本专利技术。即，本专利技术由以下(1)～(15)构成。(1)里氏木霉(Trichodermareesei)的突变株，具有包含序列号4～6的任一项所示的氨基酸序列的多肽的功能缺损或降低的突变。(2)根据(1)所述的突变株，所述突变是包含序列号4所示的氨基酸序列的多肽的HSF型DNA结合结构域缺损的突变。(3)根据(2)所述的突变株，所述突变是伴随比HSF型DNA结合结构域更靠近N末端侧的区域中的突变而发生的移码突变。(4)根据(3)所述的突变株，所述突变是由序列号4所示的氨基酸序列的从N末端侧起第30位的组氨酸残基突变成除组氨酸以外的氨基酸残基而产生的移码突变。(5)根据(1)所述的突变株，所述突变是包含序列号5所示的氨基酸序列的多肽的TLD结构域缺损的突变。(6)根据(5)所述的突变株，所述突变是伴随比TLD结构域更靠近N末端侧的区域中的突变而发生的移码突变。(7)根据(6)所述的突变株，所述突变是由序列号5所示的氨基酸序列的从N末端侧起第3位的谷氨酰胺残基突变成除谷氨酰胺以外的氨基酸残基而产生的移码突变。(8)根据(1)所述的突变株，所述突变是包含序列号6所示的氨基酸序列的多肽的F-box结构域区域的氨基酸序列的突变。(9)根据(8)所述的突变株，所述突变是由伴随F-box结构域区域的氨基酸序列的突变而发生的移码突变从而产生的包含序列号6所示的氨基酸序列的多肽的缺损。(10)根据(9)所述的突变株，所述突变是由序列号6所示的氨基酸序列中从N末端侧起第167位的丙氨酸残基突变成除丙氨酸以外的氨基酸残基而产生的移码突变。(11)蛋白质的制造方法，包括：培养(1)～(10)的任一项所述的突变株的工序。(12)蛋白质的制造方法，包括：用至少包含乳糖的培养基培养(1)～(10)的任一项所述的突变株的工序。(13)纤维素酶的制造方法，包括：培养(1)～(10)的任一项所述的突变株的工序。(14)纤维素酶的制造方法，包括：用至少包含乳糖的培养基培养(1)～(10)的任一项所述的突变株的工序。(15)糖的制造方法，包括：通过(13)或(14)所述的纤维素酶的制造方法来制造纤维素酶的工序，和使用通过上述工序得到的纤维素酶对含纤维素的生物质进行糖化的工序。专利技术的效果包含序列号4～6的任一项所示的氨基酸序列的多肽的功能缺损或降低了的里氏木霉(Trichodermareesei)的突变株，与该突变导入前的亲本株相比，蛋白质的制造能力提高，能够高产蛋白质。进而，在所制造的蛋白质是纤维素酶的情况下，还得到纤维素酶的各种比活性也提高这样的预料外的效果。具体实施方式本专利技术以通过在作为本来蛋白质的制造能力优异的微生物的里氏木霉(Trichodermareesei)的亲本株中导入突变而进一步提高蛋白质制造能力为特征。具体地，本专利技术涉及里氏木霉(Trichodermareesei)的突变株，以具有包含序列号4～6的任一项所示的氨基酸序列的多肽的功能缺损或降低的突变为特征。本专利技术中使用的里氏木霉(Trichodermareesei)的亲本株不限于野生株，以蛋白质制造能力提高的方式进行了改良的突变株也优选作为亲本株使用，例如，可以利用通过诱变剂、紫外线照射等施加了突变处理从而蛋白质的制造性提高了的突变株作为上述亲本株。作为上述亲本株使用的突变株的具体例，可列举作为属于里氏木霉(Trichodermareesei)的公知的突变株的QM6a株(NBRC31326)、QM9123株(ATCC24449)、QM9414株(NBRC31329)、PC-3-7株(ATCC66589)、QM9123株(NBRC31327)、RutC-30株(ATCC56765)、CL-847株(Enzyme.Microbiol.Technol.10，341-346(1988))、MCG77株(Biotechnol.Bioeng.Symp.8，89(1978本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.里氏木霉(Trichoderma reesei)的突变株，具有包含序列号4～6的任一项所示的氨基酸序列的多肽的功能缺损或降低的突变。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180829 JP 2018-1601561.里氏木霉(Trichodermareesei)的突变株，具有包含序列号4～6的任一项所示的氨基酸序列的多肽的功能缺损或降低的突变。


2.根据权利要求1所述的突变株，所述突变是包含序列号4所示的氨基酸序列的多肽的HSF型DNA结合结构域缺损的突变。


3.根据权利要求2所述的突变株，所述突变是伴随比HSF型DNA结合结构域更靠近N末端侧的区域中的突变而发生的移码突变。


4.根据权利要求3所述的突变株，所述突变是由序列号4所示的氨基酸序列的从N末端侧起第30位的组氨酸残基突变成除组氨酸以外的氨基酸残基而产生的移码突变。


5.根据权利要求1所述的突变株，所述突变是包含序列号5所示的氨基酸序列的多肽的TLD结构域缺损的突变。


6.根据权利要求5所述的突变株，所述突变是伴随比TLD结构域更靠近N末端侧的区域中的突变而发生的移码突变。


7.根据权利要求6所述的突变株，所述突变是由序列号5所示的氨基酸序列的从N末端侧起第3位的谷氨酰胺残基突变成除谷氨酰胺以外的氨基酸残基而产生的移码突变。

【专利技术属性】
技术研发人员：加川雄介，斋藤悠香，平松绅吾，山田胜成，
申请(专利权)人：东丽株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP