一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体公开了一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的方法和试剂盒。所述检测方法利用双抗原夹心的技术实现IgG/IgM总抗体的检测，具体为：将重组新冠病毒RBD蛋白包被于固相载体上，向包被有重组新冠病毒RBD蛋白的固相载体中加入待检样本，孵育、洗涤；向洗涤后的固相载体中加入生物素标记的新冠病毒RBD蛋白，孵育、洗涤，随后显色并结合标准曲线得到抗体含量。本发明专利技术利用双抗原夹心的技术原理，检测健康人血清原液无假阳性，能很好的区分健康人和病人；此可以推进新冠病毒大规模早筛应急血清学检测以及相关的疫苗研究推进及疫苗效果评价工作。

【技术实现步骤摘要】
一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的方法和试剂盒
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的方法和试剂盒。
技术介绍
酶联免疫吸附试验(ELISA)又称酶联免疫法，是将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。自上世纪70年代问世以来，ELISA作为体外诊断技术已广泛应用于多个医学生物学领域，可用于检测抗原、抗体及半抗原等；在实际应用方面，可用作疾病的临床诊断、疾病监察、疾病普查等。因此，其与免疫学、流行病学及传染病学等方面密切相关。当前，在新冠肺炎病毒(COVID-19)研究用试剂方面尚无检测新冠病毒总抗体的酶联免疫试剂盒面市。同时，现有的常规ELISA实验方法大多使用间接法，只能检测新冠病毒IgG抗体，对于感染窗口期先产生的IgM无法检测，并且使用间接法产品将健康人血清原液进行检测会有较高的假阳性测试效果，不利于对新冠病毒抗体的大规模早筛应急血清学检测以及相关的疫苗研究推进及疫苗效果评价工作。因此有必要结合双抗原夹心ELISA法检测测新冠病毒IgG/IgM总抗体，减少健康人血清原液检测出现较高的假阳性，并推进新冠病毒抗体的大规模早筛应急血清学检测以及相关的疫苗研究推进及疫苗效果评价工作。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的试剂盒，以克服现有试剂盒中检测效率低下，健康人血清原液检测出现较高的假阳性等缺陷。鉴于此，本专利技术为实现上述目的，技术方案为：一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的试剂盒，包括新型冠状病毒RBD重组蛋白及其生物素标记蛋白。根据本专利技术的实施例，所述新型冠状病毒RBD重组蛋白为ABclonalRP01258。本专利技术所述试剂盒中，所述生物素标记为Biotin-maleimide。进一步地，本专利技术所述试剂盒还包括新型冠状病毒RBD单抗；优选地，所述新型冠状病毒RBD单抗为ABclonalRM01763或ABclonalRM01764。本专利技术另一个目的在于，提出所述试剂盒在制备新冠病毒检测产品中的应用。本专利技术的还有一个目的在于，提出一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的方法，利用重组新冠病毒RBD及其生物素标记蛋白结合双抗原夹心ELISA方法检测新冠病毒IgG/IgM总抗体。进一步地，所述方法为：将重组新冠病毒RBD蛋白包被于固相载体上，向包被有重组新冠病毒RBD蛋白的固相载体中加入待检样本，孵育、洗涤；向洗涤后的固相载体中加入生物素标记的新冠病毒RBD蛋白，孵育、洗涤，随后显色并结合标准曲线得到总抗体含量。相比现有技术，本专利技术的有益效果为：1.本专利技术所述试剂盒及检测方法解决了市场上使用间接法ELISA检测方法无法定量总抗体、无法检测窗口感染期无法测试到抗体等技术问题，大大缩短了筛查时间，可用于对新冠病毒总IgG/IgM进行快速检测。2.本专利技术提出的双抗原夹心法检测试剂盒检测健康人血清原液无假阳性，能很好的区分健康人和病人，可实现对患者血清的快速检测和对疑似人群的高通量筛查。【附图说明】为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1是本专利技术各批次重组新冠病毒RBD蛋白活性检测结果示意图。图2是本专利技术生物素标记重组新冠病毒RBD蛋白活性检测结果示意图。图3是本专利技术双抗原夹心ELISA方法测试标准蛋白曲线。图4是本专利技术采用双抗原夹心ELISA方法对人血清原液检测的结果示意图。图5是本专利技术对比例新冠病毒IgG抗体试剂盒间接法测试标准蛋白曲线。图6是本专利技术对比例新冠病毒IgG抗体试剂盒间接法检测结果。图7是本专利技术新冠病毒IgG抗体试剂盒间接法检测实施例中随机健康人群的结果。【具体实施方式】以下实例用于说明本专利技术，但不限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和实质的前提下，对本专利技术的方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。本专利技术所提供的检测试剂盒中：新冠RBD蛋白：将新型冠状病毒RBD蛋白基因克隆至大肠杆菌表达系统，获得重组大肠杆菌；对所述重组大肠杆菌进行培养，对培养液进行分离和纯化，获得重组新冠病毒RBD蛋白。RBD兔单抗：使用重组新冠病毒RBD蛋白制备获得兔单抗。实施例新冠病毒IgG/IgM总抗体试剂盒产品双抗原夹心法建立及检测1.1包被蛋白活性验证新冠RBD蛋白与其受体ACE2在有活性的情况可产生结合。测试包被蛋白活性时，我们选取ABclonal开发的4个不同批次的蛋白(货号分别为RP01258、RP01278、RP01282，编号分别为RP01258_9603040401、RP01258_9601050101(RP01258的两个不同的批次)，RP01278_9601050901、RP01282_9601060904)进行活性测试，以选择出活性最好的批次，用于新冠病毒IgG/IgM总抗体试剂盒产品双抗原夹心法的开发，具体方法如下：1)按2-10ug/ml浓度，在微孔板包被重组ACE2蛋白，4℃过夜。2)甩掉孔内液体，使用2％BSA进行封闭，37℃，2小时。3)甩掉孔内液体，使用0.1MPBS，0.2％Twen-20，进行洗板，每孔350ul，洗3次，每次浸泡1分钟；完成后，将酶标板真空包装并储存在4℃备用。4)从板框上取下待用的微孔板条，将剩余的板条放回装有干燥剂的铝箔袋中，然后重新密封保存。5)每孔加入洗涤缓冲液350μL，静置40秒后弃去液体，该步骤共洗涤3次。6)在空白孔中添加100μL稀释液做为空白对照。7)在其他孔中分别加入100μL不同浓度的新冠RBD蛋白，用封板膜封闭板孔，37℃孵育2小时。8)在使用前15分钟配制好生物素(Biotin-maleimide)新冠RBD抗体工作液。9)弃去孔中液体，重复步骤3)中的洗涤步骤。10)使用前15分钟配制好链霉亲和素-HRP的工作液。11)弃去孔中液体，重复步骤3)中的洗涤步骤。12)每孔中加入链霉亲和素-HRP工作液(100μL/孔)，并盖上新的封板膜，37℃孵育30分钟。13)预热酶标仪。14)弃去孔中液体，重复步骤3)中的洗涤步骤。15)向孔中加入TMB底物(100μL/孔)，在37℃下避光孵育15-20分钟。16)加入终止液(50μL/孔)，并立即放入酶标仪，在5min内测定每个孔450nm的OD值。测试结果如图1所示，从活性测试数据看，两个批次的RP01258活性一致性相同，且优于另外两个批次的蛋白，因此我们选择活性最优的R本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的试剂盒，其特征在于，包括新型冠状病毒RBD重组蛋白及其生物素标记蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测新冠病毒IgG/IgM总抗体的试剂盒，其特征在于，包括新型冠状病毒RBD重组蛋白及其生物素标记蛋白。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒RBD重组蛋白为ABclonalRP01258。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记为Biotin-maleimide。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括新型冠状病毒RBD单抗。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒RBD单抗为ABclonalRM0176...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉，聂舒芳，
申请(专利权)人：武汉爱博泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42