一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法技术

本发明专利技术属于代谢组学分析技术领域，具体涉及一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法。针对上述现有技术中的困难，本发明专利技术提供的分析方法包括如下步骤：(1)将MXene纳米材料与细胞共培养后得到待分析生物样品；(2)提取待分析生物样品中的非靶向水溶性代谢物样品、非靶向脂溶性代谢物样品和靶向水溶性代谢物样品中的至少一种；(3)通过液相色谱‑质谱对非靶向水溶性代谢物样品，和/或，非靶向脂溶性代谢物样品进行检测，和/或，通过气相色谱‑质谱对靶向水溶性代谢物样品进行检测。本发明专利技术还对生物样品的处理条件、提取条件及检测条件进行了优选。本发明专利技术为后续MXene纳米材料的改性与临床应用研究提供新的研究方法，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法
本专利技术属于代谢组学分析
，具体涉及一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法。
技术介绍
代谢组学作为一种具有各类特征和显著优势的经典检测和分析技术，其内在相关原理和实际应用目前已引起了研究者们的巨大的关注。而该技术在揭示体内代谢过程与生命行为等领域同样显示出了卓越的优势，同时基于现代代谢组学的进一步技术创新和发展的研究也已经持续了多年且成果丰硕。目前代谢组学已成功实现对数千种代谢物小分子(<1500Da)结构与含量进行检测与分析，揭示了它们与生物体的固有联系。由于代谢组学所具有的表型的生物相容性、高通量分析过程、低廉的检测成本和信息丰富的分析结果等优势，其已被广泛用于微生物，细胞，植物，哺乳动物和环境等各类生命体系，考察生命体内的代谢变化规律。同时，代谢组学在毒理学评价，新药物开发，临床诊断，疾病治疗，食品安全和环境化学等研究领域也取得了许多前沿而有意义的结果。近期基于代谢组学的相关研究主要集中于技术改进和新型研究领域的开发，这对代谢物检测种类与灵敏度的发展提出了更高的要求。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)取与MXene纳米材料作用后的待分析生物样品；/n(2)提取待分析生物样品中的非靶向水溶性代谢物样品、非靶向脂溶性代谢物样品和靶向水溶性代谢物样品中的至少一种；/n(3)通过液相色谱-质谱对非靶向水溶性代谢物样品，和/或，非靶向脂溶性代谢物样品进行检测，和/或，通过气相色谱-质谱对靶向水溶性代谢物样品进行检测；/n其中，所述非靶向水溶性代谢物样品检测时溶于水中，色谱条件为：流动相以体积分数5-10％的乙腈水溶液为A相，体积分数90-95％的乙腈水溶液为B相；色谱柱采用酰胺基亚乙基桥杂化颗粒为填料；/n和/或，所...

【技术特征摘要】
1.一种MXene生物响应特性代谢组学分析方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取与MXene纳米材料作用后的待分析生物样品；
(2)提取待分析生物样品中的非靶向水溶性代谢物样品、非靶向脂溶性代谢物样品和靶向水溶性代谢物样品中的至少一种；
(3)通过液相色谱-质谱对非靶向水溶性代谢物样品，和/或，非靶向脂溶性代谢物样品进行检测，和/或，通过气相色谱-质谱对靶向水溶性代谢物样品进行检测；
其中，所述非靶向水溶性代谢物样品检测时溶于水中，色谱条件为：流动相以体积分数5-10％的乙腈水溶液为A相，体积分数90-95％的乙腈水溶液为B相；色谱柱采用酰胺基亚乙基桥杂化颗粒为填料；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品检测时溶于二氯甲烷/甲醇混合溶液中，色谱条件为：流动相以体积分数60-70％的乙腈水溶液为A相，体积分数90-95％异丙醇的乙腈溶液为B相；色谱柱采用C30或C18硅胶色谱柱；
和/或，所述靶向水溶性代谢物样品检测时溶于甲醇中，色谱条件为：载气为氦气；色谱柱采用聚二甲基硅氧烷颗粒为填料。


2.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：步骤(1)中，所述细胞为人血管内皮细胞、肝细胞或者肾细胞；
和/或，所述待分析生物样品是与MXene纳米材料共培养后的生物样品，共培养时间大于等于12小时，优选共培养时间为24～48小时。


3.按照权利要求1所述的分析方法，其特征在于：步骤(2)中，所述非靶向水溶性代谢物样品的提取方法为：用磷酸缓冲液清洗所述待分析生物样品，加入胰蛋白酶，得到细胞悬浮液，用甲醇分离，取上清液，干燥，即得；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品的提取方法为：用磷酸缓冲液清洗所述待分析生物样品，加入胰蛋白酶，得到细胞悬浮液，用甲醇和甲基叔丁基醚分离，取上清液，浓缩，即得；
和/或，所述靶向水溶性代谢物样品的提取方法为：取非靶向水溶性代谢物样品，复溶，衍生化，并再次分离，取上清液，干燥，即得。


4.按照权利要求3所述的分析方法，其特征在于：步骤(2)中，所述非靶向水溶性代谢物样品的提取方法为：用磷酸缓冲液清洗所述待分析生物样品，加入0.25wt.％的胰蛋白酶溶液，加入量为1～2ml/10000000个细胞，优选为1ml/10000000个细胞，得到细胞悬浮液，加入体积分数75-80％的甲醇水溶液，优选为，80％的甲醇水溶液，超声处理20～30min，优选为30min，涡旋震荡20～30min，优选为20min，10000～13000rpm离心5～10min，优选为13000rpm离心5min，取上清液，干燥，即得；
和/或，所述非靶向脂溶性代谢物样品的提取方法为：用磷酸缓冲液清洗所述待分析生物样品，加入0.25wt.％的胰蛋白酶溶液，加入量为1～2ml/10000000个细胞，优选为1ml/10000000个细胞，得到细胞悬浮液，加入甲醇，涡旋震荡5～10min，优选为5min，依次加入甲基叔丁基醚和水，10000～13000rpm离心5～10min，优选为13000rpm离心5min，取上清液，浓缩，即得；
和/或，所述靶向水溶性代谢物样品的提取方法为：取非靶向水溶性代谢物样品，用吡啶复溶，衍生化，10000～13000rpm离心5～10min，优选为13000rpm离心5min，取上清液，干燥，即得。


5.按照权利要求3或4所述的分析方法，其特征在于：所述衍生化的过程为：加入甲氧基胺盐酸盐的吡啶溶液在60-65℃下孵育90-100min，优选为在60℃下孵育90min；然后加入N-甲基-N-(三甲基甲硅烷基)三氟乙酰胺在60-65℃下孵育20-30min，优选为在60℃下孵育30min。


6.按照权利要求3-5任一项所述的分析方法，其特征在于：所述靶向水溶性代谢物样品中包括如下特征代谢物中的至少一种：乌头酸，4-氨基丁酸，柠檬酸，磷...

【专利技术属性】
技术研发人员：张定坤，龚萌，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51