【技术实现步骤摘要】
一种检测神经元特异性烯醇化酶的夹心型电化学免疫传感器的制备方法及应用
本专利技术属于免疫分析和生物传感
，提供了一种检测神经元特异性烯醇化酶免疫传感器的制备及应用。
技术介绍
神经元特异性烯醇化酶是烯醇化酶的糖酵解神经特异性同工酶，可提供小细胞肺癌和神经母细胞瘤的病程和治疗结果等信息。临床诊断发现，当人血清中的神经元特异性烯醇化酶浓度大于100ng/mL时，小细胞肺癌发生的几率很大。此外，已有报道称神经元特异性烯醇化酶也可作为预测脑梗死，创伤性脑损伤和克雅氏病的生物标志物。因此，实现神经元特异性烯醇化酶的定量准确检测对早期临床诊断很有必要。到目前为止，检测神经元特异性烯醇化酶的分析方法多种多样，如电化学发光酶免疫法，荧光免疫分析法，电化学适配传感器等。值的得注意的是，电化学免疫分析法是将免疫分析与电化学分析相结合的产物。因其相当大的灵敏度、可接受的特异性、操作便捷、成本低等优点而被认为是最有潜力的分析方法。其中，基于抗原和抗体特异性识别的夹心型电化学免疫传感器具有选择性好，背景噪声低的优点，已被用于抗体的定量检测。本专利技术采用负载钯纳米粒子的双壳Cu2O空心球PdNPs@DSHSs-Cu2O作为信号放大策略，具有高比表面积的双壳空心结构提供了丰富的催化活性位点，基于DSHSs-Cu2O与PdNPs的协同作用实现了对H2O2的有效还原，放大了电流信号。更重要的是，通过Pd-N键可以增加与第二抗体Ab2的偶联。采用负载金纳米粒子的氧化石墨烯掺杂的聚3，4乙二氧基噻吩纳米棒AuNPs/PED...
【技术保护点】
1.一种检测神经元特异性烯醇化酶的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)负载钯纳米粒子的双壳Cu
【技术特征摘要】
1.一种检测神经元特异性烯醇化酶的夹心型电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)负载钯纳米粒子的双壳Cu2O空心球标记的神经元特异性烯醇化酶第二抗体PdNPs@DSHSs-Cu2O/Ab2的制备；
(2)负载金纳米粒子的氧化石墨烯掺杂的聚3，4乙二氧基噻吩纳米棒AuNPs/PEDOT/GO的制备；
(3)夹心型电化学免疫传感器的制备；
(4)通过时间-电流法对神经元特异性烯醇化酶进行检测。
2.如权利要求1所述的一种检测神经元特异性烯醇化酶的夹心型电化学免疫传感器的制备方法中步骤(1)负载钯纳米粒子的双壳Cu2O空心球标记的神经元特异性烯醇化酶第二抗体PdNPs@DSHSs-Cu2O/Ab2的制备，其特征在于，步骤如下：
①DSHSs-Cu2O的制备
将0.03~0.07g的CuSO4·5H2O溶于90~110mL、0.13mol/L的十六烷基三甲基溴化铵水溶液中；然后，将0.18~0.38g的抗坏血酸加入上述溶液中，搅拌状态下加热至60℃；保持20min，后冷却至室温；再将8~12mL、0.2mol/L的NaOH溶液缓慢滴加到上述溶液中，搅拌反应10min，离心分离，用超纯水和无水乙醇分别洗涤3次；50℃真空干燥5h制得DSHSs-Cu2O；
②PdNPs@DSHSs-Cu2O的制备
将7~8mg的DSHSs-Cu2O和30~70mg的聚乙烯吡咯烷酮加至7~15mL超纯水中，搅拌状态下加入4~10mL、10mmol/L的四氯钯酸钠溶液，搅拌20min后，通过离心收集沉淀物，并用超纯水和无水乙醇洗去杂质，并将得到的沉淀物在55℃真空干燥过夜制得PdNPs@DSHSs-Cu2O；
③PdNPs@DSHSs-Cu2O/Ab2分散液的制备
取上述步骤②制备的PdNPs@DSHSs-Cu2O3~4mg分散在3mL、pH=6.98的磷酸盐缓冲溶液中，加入2mL、10~30µg/mL的Ab2溶液，在4℃下振荡8h，离心后将下层沉淀重新分散在2.0mL、pH=6.98的磷酸盐缓冲溶液中，制得PdNPs@DSHSs-Cu2O/Ab2分散液，4℃下保存。
3.如权利要求1所述的一种检测神经元特异性烯醇化酶的夹心型电化学免疫传感器的制备方法中步骤(2)负载金纳米粒子的氧化石墨烯掺杂的聚3，4乙二氧基噻吩纳米棒AuNPs/PEDOT/GO的制备，其特征在于，步骤如下：
①制备PEDOT/GO分散液
首先，将560~580µL、1mol/L的FeCl3·6H2O加入到430~450µL、0.5mg/mL的氧化石墨烯GO水溶液中超声15min，此溶液标记为A；将0.8~1.6mL的3，4乙二氧基噻吩和160~18...
【专利技术属性】
技术研发人员：王平，汤春园，王淑君，周锴威，任杰，杨青山，李月云，刘青，
申请(专利权)人：山东理工大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。