基因测序仪的短接头、双index接头引物和双index建库体系制造技术

本发明专利技术提供的一种基因测序仪的短接头、双index接头引物和双index建库体系，短接头包括两条部分互补的接头寡核苷酸链：接头寡核苷酸链1，由5’端到3’端依次包括index2引物结合区、正义接头互补区、正义分子标签和1个突出的碱基T；接头寡核苷酸链2，由5’端到3’端依次包括反义分子标签、反义接头互补区和index1引物结合区。使用上述短接头构建的双index文库体系的片段转化效率、index组合间扩增效率均一性、捕获效率均一性以及数据产量稳定性方面均显著优于现有的双index文库体系。

【技术实现步骤摘要】
基因测序仪的短接头、双index接头引物和双index建库体系
本专利技术涉及核酸测序
，具体涉及一种基因测序仪的短接头、双index接头引物和双index建库体系以及应用。
技术介绍
二代测序技术(NGS)的发展，大大提高了测序速度和测序通量。华大智造推出的DNBSEQ-T7，单日数据产量可达6Tb，是十年前GenomeAnalyzer的6000倍。如此巨大通量的提升，使得更多的样本可以在同一个Run中同时测序。目前解决样本混合测序的策略，是在不同样本的DNA片段上引入样本特异的条形码序列(index)。通过识别index序列信息，实现单样本数据的拆分。2017年Illumina发布白皮书指出，在大规模混合测序中，排他性扩增、index测序错误以及残留的引物、接头在多文库混合杂交后PCR中引入的嵌合体文库是导致标签跳跃(indexhopping)的主要原因。推荐使用双index策略减少因上述原因造成的标签识别错误。Gene+Seq2000平台在测序芯片外通过滚环扩增(RCA)进行文库信号放大，使其从原理上避免了排他性扩增带来的i本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种短接头，其特征在于，包括两条部分互补的接头寡核苷酸链：/n接头寡核苷酸链1，由5’端到3’端依次包括index2引物结合区、正义接头互补区、正义分子标签和1个突出的碱基T；所述index2引物结合区的长度为15-42bp，所述正义接头互补区长度为8bp，所述正义分子标签的长度为2-10bp；所述正义接头互补区全部或部分与index2引物结合区的3’末端序列重合；/n接头寡核苷酸链2，由5’端到3’端依次包括与接头寡核苷酸链1中的正义分子标签反向互补的反义分子标签、与接头寡核苷酸链1正义接头互补区反向互补的反义接头互补区和index1引物结合区；所述反义分子标签长度为2-10bp，所述反...

【技术特征摘要】
1.一种短接头，其特征在于，包括两条部分互补的接头寡核苷酸链：
接头寡核苷酸链1，由5’端到3’端依次包括index2引物结合区、正义接头互补区、正义分子标签和1个突出的碱基T；所述index2引物结合区的长度为15-42bp，所述正义接头互补区长度为8bp，所述正义分子标签的长度为2-10bp；所述正义接头互补区全部或部分与index2引物结合区的3’末端序列重合；
接头寡核苷酸链2，由5’端到3’端依次包括与接头寡核苷酸链1中的正义分子标签反向互补的反义分子标签、与接头寡核苷酸链1正义接头互补区反向互补的反义接头互补区和index1引物结合区；所述反义分子标签长度为2-10bp，所述反义接头互补区长度为8bp，所述index1引物结合区长度为15-30bp；所述反义接头互补区全部或部分与index1引物结合区的5’末端序列重合。


2.根据权利要求1所述的短接头，其特征在于，接头寡核苷酸链2的5’端磷酸化修饰；优选的，所述短接头为Y型短接头。


3.一种双index接头引物，其特征在于，包括正向接头引物和反向接头引物；
正向接头引物，由5’端到3’端依次包括GF引物序列、index2序列和index2引物结合区序列；
反向接头引物，由5’端到3’端依次包括GR引物序列、index1序列、index1引物结合区反向互补序列。


4.根据权利要求3所述的双index接头引物，其特征在于，所述index1序列和index2序列的长度均为8-10bp；所述index1序列和index2序列相同或不同；优选的，所述index1序列和index2序列选自表1。


5.一种双index接头封阻序列，其特征在于，包括正向接头封阻序列和反向接头封阻序列；
正向接头封阻序列，由5’端到3’端依次包括正义接头互补区反向互补序列、index2引物结合区反向互补序列、in...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨玲，楚玉星，刘磊，薛涛涛，
申请(专利权)人：北京吉因加医学检验实验室有限公司，苏州吉因加生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11