绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变快速分子检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于环介导恒温扩增技术LAMP建立一种对绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变的快速检测方法，属于害虫抗药性分子检测和害虫综合防治范畴。本技术旨在解决绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变的快速分子检测，并由此判断绿盲蝽是否对毒死蜱产生抗药性。技术要点包括：提取单头绿盲蝽成虫基因组DNA；设计2对特异性引物；建立LAMP反应体系；明确LAMP反应程序；确定反应结果的颜色判定标准。本方法稳定性好、灵敏度高、用时短、操作简便，可为田间绿盲蝽的抗药性监测和抗药性早期预警提供技术支持，为绿盲蝽的科学防治、合理选药提供准确的判定标准，同时也为植保基层工作者提供简便易行的分子检测手段。

【技术实现步骤摘要】
绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变快速分子检测方法
本专利技术涉及一种检测方法，尤其涉及一种绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变快速分子检测方法。
技术介绍
自20世纪90年代中期以来，为防控棉铃虫，转基因抗虫棉在我国大面积的推广种植。转基因抗虫棉的种植对靶标害虫棉铃虫的种群密度有了很好的控制，同时也大大减少了化学杀虫剂在棉田中的使用量。没有了广谱杀虫剂的防控，棉田中的棉蚜、盲蝽等刺吸式口器害虫的种群密度显著上升。由于在棉田中天敌较少，使其数量无法得到有效的控制，盲蝽在我国长江、黄河和沿海三大棉区为害严重，逐渐成为我国棉花上的主要害虫，其中绿盲蝽Apolyguslucorum是危害我国长江、黄河流域棉花生长的优势种群之一。目前化学防治依然是控制绿盲蝽为害的有效手段，为防治绿盲蝽在棉田的为害，加大了化学杀虫剂的使用量与使用频率。长期过度的依赖化学防治，使得田间绿盲蝽种群对多种杀虫剂的敏感性下降，产生了抗药性问题。已有研究表明绿盲蝽已对有机磷类、氨基甲酸酯类、拟除虫菊酯类及环戊二烯类的多种杀虫剂产生了不同程度的抗药性。2011年到2014年在黄河本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变快速分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)提取单头绿盲蝽成虫基因组DNA，并制备gDNA模板；/n(2)在反应容器中建立LAMP反应体系，包括LAMP反应液、特异性引物、显色试剂，并补充水；/n(3)将反应容器放入加热容器中加热反应；/n(4)LAMP反应后，含A216S突变的反应溶液的颜色发生明显变化，不含A216S突变的反应溶液颜色不变。/n

【技术特征摘要】
1.一种绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变快速分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取单头绿盲蝽成虫基因组DNA，并制备gDNA模板；
(2)在反应容器中建立LAMP反应体系，包括LAMP反应液、特异性引物、显色试剂，并补充水；
(3)将反应容器放入加热容器中加热反应；
(4)LAMP反应后，含A216S突变的反应溶液的颜色发生明显变化，不含A216S突变的反应溶液颜色不变。


2.根据权利要求1所述的绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变快速分子检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述LAMP反应液包括BstDNA聚合酶和gDNA模板、所述特异性引物包括内引物FIP/BIP和外引物FOP/BOP、所述显色试剂包括羟基萘酚蓝和甜菜碱。


3.根据权利要求2所述的绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变快速分子检测方法，其特征在于，所述的LAMP反应液包含BstDNA聚合酶4-8U·μL-1、10×ThermoPol2.5μL、Mg2+4.0-6.0nmol·μL-1、dNTP1.0-1.4nmol·μL-1、gDNA模板1.0-2.0μL。


4.根据权利要求2所述的绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变快速分子检测方法，其特征在于，所述内引物FIP/BIP的浓度为1.2-1.6μmol·L-1；所述外引物FOP/BOP的浓度为0.2-0.5μmol·L-1。


5.根据权利要求2或4所述的绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S...

【专利技术属性】
技术研发人员：武淑文，沈慧雯，梁常安，杨亦桦，王兴亮，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32