基于CRISPR/Cas9基因编辑方法的一种培育自交亲和甘蓝的方法及其应用技术

本发明专利技术提供基于CRISPR/Cas9基因编辑方法的一种培育自交亲和的甘蓝的方法及其应用。本发明专利技术培育自交亲和甘蓝的方法利用CRISPR/Cas9基因编辑方法快速、高特异性的敲除了自交不亲和相关的SRK基因。本发明专利技术的一个具体实施例通过设计sgRNA序列，快速构建了含有SRK15基因靶位点序列的CRISPR/Cas9基因敲除载体，通过农杆菌介导的遗传转化，定点编辑控制甘蓝自交不亲和的基因，筛选获得的SRK15基因敲除的突变植株6株，因此，通过本发明专利技术，可以获得不含有任何转基因成分的自交亲和的甘蓝新种质，可以直接应用到育种过程中，在配制杂种一代时可降低自交不亲和反应发生，增加杂种一代的产量。

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR/Cas9基因编辑方法的一种培育自交亲和甘蓝的方法及其应用
本专利技术涉及基于CRISPR/Cas9基因编辑方法的一种培育自交亲和甘蓝的方法及其应用。
技术介绍
植物自交不亲和机制已经得到了广泛系统的研究，自交不亲和分为配子体自交不亲和型(GametophyticSI，GSI)与孢子体自交不亲和型(SporophyticSI，SSI)。在十字花科植物中，SSI受单一位点的复等位基因控制，此位点命名为S-位点。此位点通常包含三个紧密连锁、高度多态性的基因：S-位点受体激酶(S-locusreceptorkinase，SRK)、S-位点半胱氨酸富集蛋白/S-位点蛋白11(S-locuscysteinerichprotein/S-locusprotein11，SCR/SP11)和S-位点糖蛋白(S-locusglycoproteins，SLG)。S-位点上所有的等位基因被称为“S单元型”。SRK基因编码一个跨膜的丝氨酸/苏氨酸受体激酶，在柱头乳突细胞中特异性表达，是柱头SI决定因子(Takasakietal.2000)。SCR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培育自交亲和甘蓝的方法，其特征在于：包括敲除目的甘蓝中SRK15基因，得到自交亲和力高于所述目的甘蓝的自交亲和甘蓝。/n

【技术特征摘要】
1.一种培育自交亲和甘蓝的方法，其特征在于：包括敲除目的甘蓝中SRK15基因，得到自交亲和力高于所述目的甘蓝的自交亲和甘蓝。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述敲除目的甘蓝中SRK15基因通过CRISPR/Cas9基因编辑方法实现。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9基因编辑方法以SRK15基因中符合5’-N20-NGG-3’或5’-CCN-N20-3’序列排列规则的片段为靶序列；N表示A、G、C和T中的任一种，N20表示20个连续的脱氧核糖核苷酸。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9基因编辑方法，其靶序列为序列表序列1的第234-252位。


5.根据权利要求4所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟雄辉，康俊根，李海龙，黄裕欣，王飞，陈登辉，崔建，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京;11