一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法。本发明专利技术首次对山茱萸籽多糖进行了分离纯化，首先对山茱萸籽多糖进行脱色、脱蛋白处理，然后利用阴离子交换柱层析进行初步分离纯化，葡聚糖凝胶柱层析进一步分离纯化，从而得到纯度较高的山茱萸籽多糖组分，为进一步探讨山茱萸籽多糖结构及其生物活性奠定技术基础，也为山茱萸籽产业带来更大的经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法
本专利技术涉及中药提取
，具体涉及一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法。
技术介绍
山茱萸(FructusCorni)为山茱萸科植物山茱萸的干燥果肉，又名山萸肉、药枣、肉枣等,临床上以除去种子的成熟果实入药，其味酸、涩、微温,归肝肾经，有补益肝肾、涩精固脱的功效，是我国传统的中药材，也是中医常用的名贵药材之一。中医药临床研究证明，山茱萸是治疗糖尿病、冠心病和高血压病的主要药材。现代研究表明，山茱萸具有增强免疫系统功能、抗炎抑菌、降血糖、抗休克、抗氧化、抗肿瘤等作用。山茱萸中含有丰富的多糖类成分，药理研究显示，山茱萸多糖是其中一类主要活性成分；果肉中主要成分有糖类、有机酸类及其酯类、鞣质类等。多糖类物质是生命代谢不可缺少的重要物质,具有多种生物活性，多糖的分离纯化是研究多糖结构和活性的基础，只有得到相对纯度较高的多糖组分，才能更好地分析其结构，从而探究其重要的生理功能，因此多糖类物质为当今生物医药研究和开发的一大热点。目前国内外对山茱萸的研究主要集中在化学成分及药理作用方面，其主要成分为环烯醚萜苷类、五环三萜酸及其酯类、鞣质类、挥发油类及多糖类等，具有免疫调节、降低血糖、抗休克、抗心律失常、抗菌、抗炎、抗衰老、抗癌、抗艾滋病和治疗不育症等药理活性。山茱萸籽是山茱萸果实留下的果仁，富含多糖、蛋白质和油脂等成分。山茱萸籽目前的研究仅限于山茱萸籽油、栲胶，山茱萸籽多糖尚无人研究，而山茱萸籽中的糖类物质相当丰富，大量的山茱萸籽中的糖类物质未得到合理的利用，造成植物多糖资源的浪费。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法。本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法，它包括以下步骤：S1.脱色：将山茱萸籽粗多糖溶液中加入双氧水，并调节溶液的pH值至8-9，在35-45℃的水浴中脱色0.5-1.5h，脱色后离心得澄清粗多糖溶液；S2.脱蛋白：将澄清粗多糖溶液中加入Sevage试剂，剧烈震荡15-25min后移入分液漏斗中静置，弃取中间层和下层，多次重复至分液漏斗中无明显的中间蛋白层；将上层的浓缩多糖溶液用透析袋透析除去盐类及小分子杂质，得无蛋白的山茱萸籽多糖；S3.阴离子交换柱层析：采用DEAE-52纤维素柱对无蛋白的山茱萸籽多糖进行分离纯化,分别用蒸馏水、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/LNaCl溶液以1.0mL/min的流速逐步洗脱，收集吸收峰洗脱液；S4.葡聚糖凝胶柱层析：采用SephadexG-100柱对步骤S3中的吸收峰洗脱液进一步分离纯化，用蒸馏水以流速0.4mL/min洗脱，收集吸收峰洗脱液，并将洗脱液后处理得高纯度的山茱萸籽多糖。进一步地，步骤S1中所述双氧水的质量百分比浓度为30％。进一步地，步骤S1中用氢氧化钠调节溶液的pH值。进一步地，步骤S1中所述离心的转速为5000-7000r/min，离心时间为3-7min。进一步地，步骤S2中所述Sevage试剂中氯仿与正丁醇的体积比为4:1。进一步地，步骤S2中所述透析时间为45-50h，并间隔12h更换一次蒸馏水。进一步地，步骤S3中所述无蛋白的山茱萸籽多糖溶液的上样浓度为10mg/mL，上样体积为5mL，上样前山茱萸籽多糖溶液过0.45μm的过滤膜。进一步地，步骤S4中所述洗脱液的上样浓度为10mg/mL，上样体积为4mL。进一步地，步骤S4中所述后处理包括浓缩、透析和冻干。本专利技术具有以下优点：本专利技术首次对山茱萸籽多糖进行了分离纯化，首先对山茱萸籽多糖进行脱色、脱蛋白处理，然后利用阴离子交换柱层析进行初步分离纯化，葡聚糖凝胶柱层析进一步分离纯化，从而得到纯度较高的山茱萸籽多糖组分，为进一步探讨山茱萸籽多糖结构及其生物活性奠定技术基础，也为山茱萸籽产业带来更大的经济效益。附图说明图1为本专利技术方法流程图；图2为本专利技术DEAE-52柱层析洗脱图；图3为本专利技术SephadexG-100柱层析洗脱图；图4为本专利技术多糖组分COSP-4的紫外吸收光谱图。具体实施方式下面结合附图及实施例对本专利技术做进一步的描述，本专利技术的保护范围不局限于以下所述：实施例1：一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法，它包括以下步骤：S1.脱色：将山茱萸籽粗多糖溶液中加入质量百分比浓度30％的双氧水，并加入氢氧化钠调节溶液的pH值至8，在35-45℃的水浴中脱色0.5h，脱色后离心得澄清粗多糖溶液；其中，离心机的转速为5000r/min，离心时间为3min；S2.脱蛋白：将澄清粗多糖溶液中加入Sevage试剂，氯仿与正丁醇的体积比为4:1，剧烈震荡15min后移入分液漏斗中静置，弃取中间层和下层，多次重复至分液漏斗中无明显的中间蛋白层；将上层的浓缩多糖溶液用透析袋透析除去盐类及小分子杂质，透析时间为45h，并间隔12h更换一次蒸馏水，得无蛋白的山茱萸籽多糖；S3.阴离子交换柱层析：采用DEAE-52纤维素柱对无蛋白的山茱萸籽多糖进行分离纯化,分别用蒸馏水、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/LNaCl溶液以1.0mL/min的流速逐步洗脱，收集吸收峰洗脱液；其中，无蛋白的山茱萸籽多糖溶液的上样浓度为10mg/mL，上样体积为5mL，上样前山茱萸籽多糖溶液过0.45μm的过滤膜；S4.葡聚糖凝胶柱层析：采用SephadexG-100柱对步骤S3中的吸收峰洗脱液进一步分离纯化，用蒸馏水以流速0.4mL/min洗脱，收集吸收峰洗脱液，所述洗脱液的上样浓度为10mg/mL，上样体积为4mL，并将洗脱液浓缩、透析和冻干得高纯度的山茱萸籽多糖。实施例2：一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法，它包括以下步骤：S1.脱色：将山茱萸籽粗多糖溶液中加入质量百分比浓度30％的双氧水，并加入氢氧化钠调节溶液的pH值至9，在45℃的水浴中脱色1.5h，脱色后离心得澄清粗多糖溶液；其中，离心机的转速为7000r/min，离心时间为7min；S2.脱蛋白：将澄清粗多糖溶液中加入Sevage试剂，氯仿与正丁醇的体积比为4:1，剧烈震荡25min后移入分液漏斗中静置，弃取中间层和下层，多次重复至分液漏斗中无明显的中间蛋白层；将上层的浓缩多糖溶液用透析袋透析除去盐类及小分子杂质，透析时间为50h，并间隔12h更换一次蒸馏水，得无蛋白的山茱萸籽多糖；S3.阴离子交换柱层析：采用DEAE-52纤维素柱对无蛋白的山茱萸籽多糖进行分离纯化,分别用蒸馏水、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/LNaCl溶液以1.0mL/min的流速逐步洗脱，收集吸收峰洗脱液；其中，无蛋白的山茱萸籽多糖溶液的上样浓度为10mg/mL，上样体积为5mL，上样前山茱萸籽多糖溶液过0.4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法，其特征在于，它包括以下步骤：/nS1.脱色：将山茱萸籽粗多糖溶液中加入双氧水，并调节溶液的pH值至8-9，在35-45℃的水浴中脱色0.5-1.5h，脱色后离心得澄清粗多糖溶液；/nS2.脱蛋白：将澄清粗多糖溶液中加入Sevage试剂，剧烈震荡15-25min后移入分液漏斗中静置，弃取中间层和下层，多次重复至分液漏斗中无明显的中间蛋白层；将上层的浓缩多糖溶液用透析袋透析除去盐类及小分子杂质，得无蛋白的山茱萸籽多糖；/nS3.阴离子交换柱层析：采用DEAE-52纤维素柱对无蛋白的山茱萸籽多糖进行分离纯化,分别用蒸馏水、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/LNaCl溶液以1.0mL/min的流速逐步洗脱，收集吸收峰洗脱液；/nS4.葡聚糖凝胶柱层析：采用Sephadex G-100柱对步骤S3中的吸收峰洗脱液进一步分离纯化，用蒸馏水以流速0.4mL/min洗脱，收集吸收峰洗脱液，并将洗脱液后处理得高纯度的山茱萸籽多糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法，其特征在于，它包括以下步骤：
S1.脱色：将山茱萸籽粗多糖溶液中加入双氧水，并调节溶液的pH值至8-9，在35-45℃的水浴中脱色0.5-1.5h，脱色后离心得澄清粗多糖溶液；
S2.脱蛋白：将澄清粗多糖溶液中加入Sevage试剂，剧烈震荡15-25min后移入分液漏斗中静置，弃取中间层和下层，多次重复至分液漏斗中无明显的中间蛋白层；将上层的浓缩多糖溶液用透析袋透析除去盐类及小分子杂质，得无蛋白的山茱萸籽多糖；
S3.阴离子交换柱层析：采用DEAE-52纤维素柱对无蛋白的山茱萸籽多糖进行分离纯化,分别用蒸馏水、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/LNaCl溶液以1.0mL/min的流速逐步洗脱，收集吸收峰洗脱液；
S4.葡聚糖凝胶柱层析：采用SephadexG-100柱对步骤S3中的吸收峰洗脱液进一步分离纯化，用蒸馏水以流速0.4mL/min洗脱，收集吸收峰洗脱液，并将洗脱液后处理得高纯度的山茱萸籽多糖。


2.根据权利要求1所述的一种山茱萸籽多糖的分离纯化方法，其特征在于，步骤S1中所述双氧水的质量百分比浓度为30％。


3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：白新鹏，何坤明，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：海南;46