【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗杜兴肌营养不良的组合物和方法以电子形式提交的材料的引入作为参考申请人特此引入与此一道以电子形式提交的序列表材料作为参考。所述文件被称为“UPN_18-8438PCT_ST25.txt”，创建于2019年4月16日，且为269,817字节。联邦资助研究的声明本专利技术是借助在美国国立卫生研究院（NationalInstitutesofHealth）/美国国立神经病学与中风研究所（NationalInstituteofNeurologicalDisordersandStroke）授予的R01NS094705项下的政府支持完成的。政府拥有本专利技术的某些权利。专利技术背景杜兴肌营养不良（DMD）是一种严重致残的全身性儿童期发病疾病，其从早期运动肌无力进展到末期呼吸和心肌病，其特征在于非常昂贵的护理者和技术依赖性（Landfeldt,E.等人,TheburdenofDuchennemusculardystrophy:aninternational,cross-sectionalstudy.Neurology,2014....
【技术保护点】
1.具有AAV衣壳和载体基因组的重组腺伴随病毒（rAAV），其中所述载体基因组包含编码包含杂合三股螺旋结构域的肌养蛋白超家族突变蛋白的核酸序列，所述核酸序列在指导其表达的调节序列的控制下，所述杂合三股螺旋结构域包含/n包含与螺旋A’的C-末端部分融合的螺旋A的N-末端部分的第一螺旋；/n包含与螺旋B的末端C-末端部分融合的螺旋B’的N-末端部分的第二螺旋；以及/n包含与螺旋C’的C-末端部分融合的螺旋C的N-末端部分的第三螺旋；/n其中螺旋A、B和C存在于与天然肌养蛋白超家族蛋白中具有螺旋A’、B’和C’的第二三股螺旋重复序列不相邻的第一三股螺旋重复序列中。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180416 US 62/6584641.具有AAV衣壳和载体基因组的重组腺伴随病毒（rAAV），其中所述载体基因组包含编码包含杂合三股螺旋结构域的肌养蛋白超家族突变蛋白的核酸序列，所述核酸序列在指导其表达的调节序列的控制下，所述杂合三股螺旋结构域包含
包含与螺旋A’的C-末端部分融合的螺旋A的N-末端部分的第一螺旋；
包含与螺旋B的末端C-末端部分融合的螺旋B’的N-末端部分的第二螺旋；以及
包含与螺旋C’的C-末端部分融合的螺旋C的N-末端部分的第三螺旋；
其中螺旋A、B和C存在于与天然肌养蛋白超家族蛋白中具有螺旋A’、B’和C’的第二三股螺旋重复序列不相邻的第一三股螺旋重复序列中。
2.根据权利要求1所述的rAAV，其中所述肌养蛋白超家族突变蛋白是三重剪接突变肌养蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含全长肌养蛋白的至少螺旋重复序列3至螺旋重复序列21中的缺失。
4.根据权利要求1或2所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含全长肌养蛋白的至少螺旋重复序列3至螺旋重复序列23中的缺失。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含SEQIDNO：1的氨基酸序列。
6.根据权利要求1至3和5中任一项所述的rAAV，其中编码所述三重剪接突变蛋白的核酸序列包含SEQIDNO：2的序列。
7.根据权利要求1所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含全长肌养蛋白的至少螺旋重复序列2至螺旋重复序列19中的缺失。
8.根据权利要求1或7所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含SEQIDNO：22的氨基酸序列。
9.根据权利要求1所述的rAAV，其中所述肌养蛋白超家族突变蛋白是三重剪接突变肌养蛋白相关蛋白。
10.根据权利要求1或9所述的rAAV，其中所述肌养蛋白超家族突变蛋白是三重剪接突变肌养蛋白相关蛋白，并且包含全长肌养蛋白相关蛋白的至少螺旋重复序列3至螺旋重复序列19中的缺失。
11.根据权利要求10所述的rAAV，其中所述三重突变蛋白包含SEQIDNO：3的氨基酸序列。
12.根据权利要求1、9、10或11中任一项所述的rAAV，其中编码所述三重剪接突变蛋白的核酸序列包含SEQIDNO：4的序列。
13.根据权利要求1或10中任一项所述的rAAV，其中所述三重突变蛋白包含SEQIDNO：20的氨基酸序列。
14.根据权利要求13所述的rAAV，其中编码所述三重剪接突变蛋白的核酸序列包含SEQIDNO：19，或与SEQIDNO：19约95％至约99％相同的序列。
15.根据权利要求1或9所述的rAAV，其中所述肌养蛋白超家族突变蛋白是三重剪接突变肌养蛋白相关蛋白，并且包含全长肌养蛋白相关蛋白的至少螺旋重复序列2至螺旋重复序列17中的缺失。
16.根据权利要求15所述的rAAV，其中所述三重突变蛋白包含SEQIDNO：21的氨基酸序列。
17.具有AAV衣壳和载体基因组的rAAV，其中所述载体基因组包含编码肌养蛋白超家族三重剪接突变蛋白的核酸序列，所述核酸序列在指导其表达的调节序列的控制下，其中所述三重剪接突变蛋白包含一个或多个N-末端螺旋重复序列、杂合三股螺旋重复序列和一个或多个C-末端螺旋重复序列，其中所述三重剪接突变蛋白中包括杂合重复序列的螺旋重复序列的总数目选自1至比全长肌养蛋白超家族蛋白的螺旋重复序列数目小1的任何整数，并且其中所述杂合三股螺旋重复序列由如图2F所描绘的在垂直于其长轴将螺旋重复序列二等分的平面上剪接的两个螺旋重复序列形成。
18.根据权利要求17所述的rAAV，其中所述突变蛋白的一个或多个N-末端螺旋重复序列当在全长肌养蛋白超家族蛋白中时与形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列1直接相邻；且其中所述突变蛋白的一个或多个C-末端螺旋重复序列当在全长肌养蛋白超家族蛋白中时与形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列2直接相邻。
19.根据权利要求17或18所述的rAAV，其中所述全长肌养蛋白超家族蛋白是肌养蛋白。
20.根据权利要求17至19中任一项所述的rAAV，其中所述突变蛋白的一个或多个N-末端螺旋重复序列包含全长肌肌养蛋白中的螺旋重复序列1，和/或其中一个或多个C-末端螺旋重复序列包含全长肌养蛋白中的螺旋重复序列23和螺旋重复序列24。
21.根据权利要求17至20中任一项所述的rAAV，其中所述N-末端螺旋重复序列由全长肌养蛋白中的螺旋重复序列1组成，其中所述C-末端螺旋重复序列由全长肌养蛋白中的螺旋重复序列23和螺旋重复序列24组成，其中形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列1是全长肌养蛋白中的螺旋重复序列2，并且其中形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列2是全长肌养蛋白中的螺旋重复序列22。
22.根据权利要求17至21中任一项所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含SEQIDNO：1的氨基酸序列。
23.根据权利要求22所述的rAAV，其中编码所述三重剪接突变蛋白的序列包含SEQIDNO：2的核酸序列。
24.根据权利要求17或18所述的rAAV，其中所述全长肌养蛋白超家族蛋白是肌养蛋白相关蛋白。
25.根据权利要求17、18和24中任一项所述的rAAV，其中所述突变蛋白的一个或多个N-末端螺旋重复序列包含全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列1，和/或其中所述突变蛋白的C-末端螺旋重复序列包含全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列21和22。
26.根据权利要求17、18、24和25中任一项所述的rAAV，其中所述突变蛋白的N-末端螺旋重复序列由全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列1组成，其中所述突变蛋白的C-末端螺旋重复序列由全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列21和螺旋重复序列22组成，其中形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列1是全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列2，且其中形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列2是全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列20。
27.根据权利要求17、18和24至27中任一项所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含SEQIDNO：3的氨基酸序列。
28.根据权利要求27所述的rAAV，其中编码所述三重剪接突变蛋白的序列包含SEQIDNO：4的核酸序列。
29.根据权利要求17、18和24至26中任一项所述的rAAV，其中所述三重突变蛋白包含SEQIDNO：20的氨基酸序列。
30.根据权利要求29所述的rAAV，其中编码所述三重剪接突变蛋白的核酸序列包含SEQIDNO：19，或与SEQIDNO：19约95％至约99％相同的序列。
31.具有AAV衣壳和载体基因组的rAAV，其中所述载体基因组包含编码肌养蛋白超家族三重剪接突变蛋白的核酸序列，所述核酸序列在指导其表达的调节序列的控制下，其中所述三重剪接突变蛋白包含杂合三股螺旋重复序列和C-末端螺旋重复序列，其中所述三重剪接突变蛋白中包括杂合重复序列的螺旋重复序列的总数目是5，并且其中所述杂合三股螺旋重复序列由如图2F所描绘的在垂直于其长轴将螺旋重复序列二等分的平面上剪接的两个螺旋重复序列形成。
32.根据权利要求31所述的rAAV，其中所述突变蛋白的C-末端螺旋重复序列由全长肌养蛋白中的螺旋重复序列21、22、23和24组成，其中形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列1是全长肌养蛋白中的螺旋重复序列1，并且其中形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列2是全长肌养蛋白中的螺旋重复序列20。
33.根据权利要求32所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含SEQIDNO：22的氨基酸序列。
34.根据权利要求31中任一项所述的rAAV，其中所述突变蛋白的C-末端螺旋重复序列由全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列19、20、21和22组成，其中形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列1是全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列1，并且其中形成杂合三股螺旋重复序列的两个重复序列中的螺旋重复序列2是全长肌养蛋白相关蛋白中的螺旋重复序列18。
35.根据权利要求34所述的rAAV，其中所述三重剪接突变蛋白包含SEQIDNO：21的氨基酸序列。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的rAAV，其中调节序列包含启动子，其中所述启动子是组成型启动子，或者其中所述启动子是肌肉特异性启动子。
37.根据权利要求36所述的rAAV，其中所述肌肉特异性启动子是肌肉肌酸激酶（MCK）启动子或SPc5-12启动子。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的rAAV，其中所述调节序列包含嵌合CS-CRM4/SPc5-12启动子。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的rAAV，其中所述调节序列包含增强子。
40.根据权利要求39所述的rAAV，其中所述增强子是MCK增强子的双重或三重串联。
41.根据权利要求1至4...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·斯特德曼，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：美国;US
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