一种细胞原位单个囊泡内含物的检测装置及其检测方法制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种细胞原位单个囊泡内含物的检测装置及其检测方法。所述检测装置包括：光学显微镜、微操纵仪、计算机工作站、AD/DA转换器、膜片钳放大器、红外相机和电化学电极系统；所述电化学电极系统包括：碳纤电极、玻璃微电极、参比电极、电解液和推进器。本发明专利技术操作方法简单，应用范围更广，在单个囊泡水平上，为神经递质的定性和定量研究提供了一种直接且高时间、空间分辨率的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
一种细胞原位单个囊泡内含物的检测装置及其检测方法
本专利技术属于生物技术及医学检测
，具体涉及一种细胞原位单个囊泡内含物的检测装置及其检测方法。
技术介绍
流式细胞术是当今最常见的对单个细胞及其他生物粒子进行多参数、快速定量分析的方法之一，具有速度快、精度高、准确性好等特点，但该技术仅适用于微米级的细胞或者其他待分选颗粒，而无法对纳米级的囊泡(如突触囊泡、外泌体等)进行分离和分析。目前，针对囊泡内含物进行检测的方法主要基于体外分离和裂解检测原理，并已应用于脂质体、嗜铬细胞、PC12细胞及儿茶酚胺能神经元等的囊泡内含物的定量检测(Omiateketal.,2009,2010,2013)。然而，体外分离囊泡的过程容易引起损伤从而导致部分递质的流失，利用化学物质裂解囊泡膜的方法也很容易因为内含物的扩散丢失而导致检测结果被低估。随后，Dunevall等人发现在直径约33μm的圆盘碳电极上施加一定电压，可以吸附和捕捉游离囊泡，并在接触瞬间击破囊泡膜，使得其包裹的递质得以流出并与碳电极发生氧化还原反应，从而记录到电化学电流(Dunev本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞原位单个囊泡内含物的检测装置，其特征在于，所述检测装置包括：光学显微镜、微操纵仪、计算机工作站、AD/DA转换器、膜片钳放大器、红外相机和电化学电极系统；/n所述电化学电极系统包括：碳纤电极、玻璃微电极、参比电极、电解液和推进器。/n

【技术特征摘要】
1.一种细胞原位单个囊泡内含物的检测装置，其特征在于，所述检测装置包括：光学显微镜、微操纵仪、计算机工作站、AD/DA转换器、膜片钳放大器、红外相机和电化学电极系统；
所述电化学电极系统包括：碳纤电极、玻璃微电极、参比电极、电解液和推进器。


2.根据权利要求1所述的细胞原位单个囊泡内含物的检测装置，其特征在于，所述光学显微镜为正置显微镜，所述光学显微镜的物镜为40×/1.00w水潜镜或60×/1.00w水潜镜；
优选地，所述光学显微镜采用微分干涉对比DIC偏振片；
优选地，所述膜片钳放大器为HEKAEPC10膜片钳放大器；
优选地，所述光学显微镜、所述微操纵仪的机箱、所述膜片钳放大器和所述红外相机的外壳均做接地处理。


3.根据权利要求1或2所述的细胞原位单个囊泡内含物的检测装置，其特征在于，所述碳纤电极的尖端的裸碳长度为1-200μm；
优选地，所述碳纤电极的尖端的初始直径范围为5-10μm；
优选地，所述碳纤电极的尖端经蚀刻加工后形成锥形或圆柱形后，尖端直径范围为50-1000nm；
优选地，所述碳纤电极的尾端与推进器相连接，并固定于所述膜片钳放大器的探头。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的细胞原位单个囊泡内含物的检测装置，其特征在于，所述玻璃微电极采用具有抗电磁干扰性能的厚壁玻璃材料；
优选地，所述玻璃微电极的外径为2-5mm，内径为1-4mm；
优选地，所述玻璃微电极的尖端开口的内径范围为0.1-5μm。


5.根据权利要求1-4中任一项所述的细胞原位单个囊泡内含物的检测装置，其特征在于，所述参比电极的材质为金属细丝，优选为氯化银-银丝参比电极；
优选地，所述电解液的渗透压范围在250-350mOsm；
优选地，所述电解液按质量浓度计包括：120-130mM葡萄糖酸钾、15-25mM氯化钾、5-15mMHEPES，5-15mM磷酸肌酸酐二钠、1-5mMATP-Mg、0.1-1mMGTP-Na和0.1-1mMEGTA，溶剂为水；
优选地，所述推进器的最大行进距离为1-3cm，行进精度为1-1000nm。


6.一种细胞原位单个囊泡内含物的检测方法，其特征在于，所述检测方法为：采用如权利要求1-5中任一项所述的装置对培养细胞和/或脑片中细胞原位单个囊泡内含物进行检测。


7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述细胞原位单个囊泡内含物的检测方法具体包括以下步骤：
(1)培养细胞或制备脑片；
(2)采用如权利要求1-5中任一项所述的装置进行细胞贴附式钳制；
(3)采用如权利要求1-5中任一项所述的装置进行全细胞钳制；
(4)采用如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳孜俐，孙坚原，申雪峰，赵帅男，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44