用于检测阴道微生物的装置及方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开用于检测阴道微生物的装置及方法。该装置包括基片和配套试剂，基片上设置加样孔、排出孔和多个液相小室，液相小室内壁分别固定针对多种不同阴道微生物的捕获探针。配套试剂包括第一缓冲液、清洗液、第二缓冲液和针对不同微生物的引物组。本发明专利技术的方法具备同时检测多种阴道微生物菌群的优势，检测方法灵敏度高，菌株之间无交叉反应，特异性好，在阴道微生物检测及临床应用中均有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
用于检测阴道微生物的装置及方法
本专利技术涉及微生物的检测，具体地涉及用于检测阴道微生物的装置及方法。
技术介绍
1998年Burns等提出微流控技术的“芯片实验室”(labonachip,LOC)的概念，即把生物、化学、医学等领域分析样品的过程，包括制备、反应、分离、检测等基本单元集成到一块微米尺度的芯片上，自动完成分析全过程的检测。由于芯片尺寸、形式，反应孔位置等各不相同，一般均需要配备专用微阵列芯片检测仪器。目前，微流控技术属于检验技术发展的前沿方向之一，在临床POCT检测、精准医疗的等方向具有良好前景，主要在临床检测领域的核酸检测、免疫测定、耐药性检测，以及部分公共安全快速检测领域获得应用。国内微流控技术应用比较成熟方向包括微流控核酸检测和微流控免疫检测，其中微流控核酸检测产品主要集中在遗传性疾病，传染性疾病以及精准医疗检测等方向。微流控免疫检测主要产品集中在炎症标志物，心脑血管疾病标志物等方向。阴道炎是由致病性病原体引起，常见的阴道炎有细菌性阴道炎、病毒性阴道炎、真菌性阴道炎和非特异性阴道炎，分别由淋病奈瑟菌、阴道加德纳菌、肠球菌、生殖道支原体、沙眼衣原体、疱疹病毒、人类细小病毒、白色念珠菌、梅毒螺旋体等感染所致。根据检验结果，判断感染性质，由金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肠球菌、厌氧菌等所致阴道炎属非传染性；由梅毒螺旋体、淋病奈瑟菌、疱疹病毒、人乳头瘤病毒、解脲脲原体、沙眼衣原体、念珠菌、滴虫等引起的属性传播性疾病，有一定的传染性。阴道分泌物微生物学检查可检出阴道炎等疾病的病原菌，结合阴道分泌物的物理学及清洁度检查等可进行明确的病因诊断，并为临床治疗及其同其他非感染性疾病提供鉴别诊断依据。微生物培养后和进行药敏试验，选择敏感药物进行治疗，可提高治疗效果。
技术实现思路
为解决现有技术中的至少部分技术问题，本专利技术提供一种用于检测阴道微生物的装置及方法，该装置采用可检测阴道微生物的捕获探针、引物组合以及特定的检测缓冲液，通过检测装置的多个液相小室从而实现多种阴道微生物检测，具体如下。本专利技术的第一方面，提供一种用于检测阴道微生物的装置，其至少包括基片和配套试剂，其中：所述基片上设置加样孔、排出孔和多个液相小室，所述多个液相小室设置为使样本或试剂能够通过流入通路进入各个液相小室，并能够通过流出通路流出各个液相小室，各液相小室的内壁分别固定针对多种不同微生物的捕获探针；所述配套试剂包括第一缓冲液、清洗液、第二缓冲液和针对不同微生物的引物组，其中针对同一微生物的捕获探针与其对应的引物组具有不同的结合区，且捕获探针的Tm值低于引物组中各引物的Tm值；所述多种微生物包括淋病奈瑟菌、阴道加德纳菌、肠球菌、生殖道支原体、沙眼衣原体、疱疹病毒、人类细小病毒、白色念珠菌。根据本专利技术所述的用于检测阴道微生物的装置，优选地，所述多个液相小室通过通路分别与同一加样孔连通，从而能够通过一次加样使样本进入各个液相小室。根据本专利技术所述的用于检测阴道微生物的装置，优选地，所述第一缓冲液包含柠檬酸钠缓冲液、0.2-0.8M甜菜碱、1.5-2.5M四甲基氯化铵、4-6％重量/体积比的硫酸葡聚糖和10-30体积％的甲酰胺。根据本专利技术所述的用于检测阴道微生物的装置，优选地，所述清洗液包含3MNaCl、10mMTris-HClpH7.5、1mMEDTA和0.1％Tween-20。根据本专利技术所述的用于检测阴道微生物的装置，优选地，所述第二缓冲液包含Tris-HCl、KCl、(NH4)2SO4、MgSO4、Tween-20、TrionX-100和dNTPs中的一种或多种，进一步包含Bst聚合酶。根据本专利技术所述的用于检测阴道微生物的装置，优选地，所述捕获探针的Tm值在55-65℃范围内，所述引物组中各引物的Tm值在60-70℃范围内。根据本专利技术所述的用于检测阴道微生物的装置，优选地，所述引物组包含外引物对、内引物对和环引物。本专利技术的第二方面，提供一种用于检测阴道微生物的方法，其包含使用根据第一方面所述的装置的步骤。根据本专利技术所述的用于检测阴道微生物的方法，优选地，所述方法至少包括以下步骤：(1)使核酸样本与第一缓冲液分别或同时经加样孔经流入通路进入各液相小室，并于92-98℃下处理2-10分钟，然后降低温度至55-65℃进行捕获30-60分钟；(2)使预热至55-65℃的清洗液经加样孔和流入通路进入各液相小室替换第一缓冲液；(3)使所述引物组、反应酶与所述第二缓冲液混合得到反应液，并经加样孔和流入通进入各液相小室，控制温度65-70℃并保持20-40分钟。根据本专利技术所述的用于检测阴道微生物的方法，优选地，所述反应液进一步包含荧光染料。本专利技术的装置只需通过一次性加样即可同时检测多种阴道不同微生物，并且检测灵敏度高，无交叉反应，特异性好。另外，本专利技术的装置检测时需样量少，适于将装置进一步小型化。在临床应用中具有良好的应用前景。附图说明图1为本专利技术一种实例性的微流控芯片结构示意图及图标记说明。具体实施方式现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。除非另有说明，否则“％”为基于重量的百分数。[检测装置]本专利技术的检测装置用于检测阴道微生物，其具有用于检测的微流控系统，因此，本专利技术也可以称为“用于检测阴道微生物的微流控系统及方法”所述微生物包括淋病奈瑟菌、阴道加德纳菌、肠球菌、生殖道支原体、沙眼衣原体、疱疹病毒、人类细小病毒和白色念珠菌。在具体实施方案中，所述阴道微生物由淋病奈瑟菌、阴道加德纳菌、肠球菌、生殖道支原体、沙眼衣原体、疱疹病毒、人类细小病毒和白色念珠菌组成。本专利技术的检测装置至少包括基片和配套试剂，所述基片设计模式不特别限定，例如可采用“鱼骨刺”模式设计该基片，其包括：加样孔、排出孔和多个液相小室。其中，所述多个液相小室设置为使样本或试剂能够通过流入通路进入各个液相小室，并能够通过流出通路流出各个液相小室。流入/流出通路为具有连接管路作用的微管道，其用于连接加样孔与液相小室，并沿所述微管道输送液体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测阴道微生物的装置，其特征在于，包括基片和配套试剂，其中：/n所述基片上设置加样孔、排出孔和多个液相小室，所述多个液相小室设置为使样本或试剂能够通过流入通路进入各个液相小室，并能够通过流出通路流出各个液相小室，各液相小室的内壁分别固定针对多种不同微生物的捕获探针；/n所述配套试剂包括第一缓冲液、清洗液、第二缓冲液和针对不同微生物的引物组，其中针对同一微生物的捕获探针与其对应的引物组具有不同的结合区，且捕获探针的Tm值低于引物组中各引物的Tm值；/n所述多种微生物包括淋病奈瑟菌、阴道加德纳菌、肠球菌、生殖道支原体、沙眼衣原体、疱疹病毒、人类细小病毒和白色念珠菌。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测阴道微生物的装置，其特征在于，包括基片和配套试剂，其中：
所述基片上设置加样孔、排出孔和多个液相小室，所述多个液相小室设置为使样本或试剂能够通过流入通路进入各个液相小室，并能够通过流出通路流出各个液相小室，各液相小室的内壁分别固定针对多种不同微生物的捕获探针；
所述配套试剂包括第一缓冲液、清洗液、第二缓冲液和针对不同微生物的引物组，其中针对同一微生物的捕获探针与其对应的引物组具有不同的结合区，且捕获探针的Tm值低于引物组中各引物的Tm值；
所述多种微生物包括淋病奈瑟菌、阴道加德纳菌、肠球菌、生殖道支原体、沙眼衣原体、疱疹病毒、人类细小病毒和白色念珠菌。


2.根据权利要求1所述的用于检测阴道微生物的装置，其特征在于，所述多个液相小室通过通路分别与同一加样孔连通，从而能够通过一次加样使样本进入各个液相小室。


3.根据权利要求1所述的用于检测阴道微生物的装置，其特征在于，所述第一缓冲液包含柠檬酸钠缓冲液、0.2-0.8M甜菜碱、1.5-2.5M四甲基氯化铵、4-6％重量/体积比的硫酸葡聚糖和10-30体积％的甲酰胺。


4.根据权利要求1所述的用于检测阴道微生物的装置，其特征在于，所述清洗液包含3MNaCl、10mMTris-HClpH7.5、1mMEDTA和0.1％Tween-20。


5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏红，曹文明，马军，
申请(专利权)人：魏红，
类型：发明
国别省市：山东;37