本发明专利技术是一种抗氧化亮胱赖肽，其氨基酸序列为Leu‑Cys‑Lys。本发明专利技术还公开了抗氧化亮胱赖肽的制备方法，以海洋糠虾粉为原料提取蛋白，然后采用天然蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗氧化活性亮胱赖肽；酶解条件为：pH为5.0－8.0、温度20℃－40℃、酶解时间为2h－6 h、酶‑底物配比为800－1200 U/g；酶为天然中性蛋白酶。也可以采用肽合成方法或者合成与修饰方法合成得到抗氧化亮胱赖肽。本发明专利技术还公开了亮胱赖肽抗氧化用途。本发明专利技术是一种天然高效的抗氧化剂，以来自于海洋糠虾的虾蛋白为出发点，通过蛋白酶的切割条件控制，切割为具有特定的肽链长度和结构域组成的活性活性肽，而使抗氧化活性得以高效地实现。它可以消除了人工合成抗氧化剂所可能引起的副作用，可以取代传统的合成食品抗氧化剂。
【技术实现步骤摘要】
抗氧化亮胱赖肽及其制备方法与用途
本专利技术提供了一种抗氧化活性肽及其制备方法，特别是一种抗氧化亮胱赖肽及其制备方法与用途，属于生物
技术介绍
生物活性肽具有不同的结构和生理功能，如抗病毒、抗癌、抗血栓、抗高血压、免疫调节、激素调节、抑菌、降胆固醇等作用。活性肽具有生物活性，从食品中提取的蛋白质对人体有益。随着对蛋白酶解技术的研究逐渐深入，发现介于蛋白质和氨基酸间的肽类物质在食品方面具有极强的活性、多样性，更高的安全性。根据市场需求，活性肽类物质已近越来越多的被应用于药物、化妆品以及保健品等各个领域。海洋肽在海洋生物中广泛分布，所以以资源丰富的糠虾为原料，既能解决资源浪费问题又能提高产品的附加值。从海洋糠虾中分离出的抗氧化肽，具有广泛的用途。如防止食品变质，抑制类脂过氧化和自由基，保障健康。我们开发出安全的活性肽抗氧化剂具有广阔的应用前景。据调查研究发现，很多不同来源的水解蛋白都具有一定的抗氧化能力，包括陆源蛋白，例如核桃蛋白、大豆蛋白、花生蛋白、玉米蛋白、油料种子蛋白、小麦醇溶蛋白和蚕丝蛋白等的水解物都具有一定的抗氧化性。然而，海洋来源原料更丰富。目前市场上已经形成商品化的合成化学抗氧化剂，例如丁基羟基茴香醚（BHA），丁基羟基甲苯（BHT）和叔丁基对苯二酚（TBHQ）具有很强的抗氧化活性，在食品工业中得到了广泛的应用。然而，这些抗氧化剂具有潜在的风险，因此应严格限制其使用。因此，开发安全的、天然的活性肽抗氧化剂具有广阔的应用前景应用价值。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的抗氧化活性肽亮胱赖肽，其抗氧化活性高，安全性好。本专利技术所要解决的另一个技术问题的提供前述抗氧化活性肽亮胱赖肽的制备方法和用途。本专利技术所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本专利技术是一种抗氧化亮胱赖肽，其特点是：所述亮胱赖肽的氨基酸序列为Leu-Cys-Lys。本专利技术还公开了抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其特点是：以海洋糠虾粉为原料提取蛋白，然后采用天然蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗氧化活性亮胱赖肽；酶解条件为：pH为5.0－8.0、温度20℃－40℃、酶解时间为2h－6h、酶-底物配比为800－1200U/g；酶为天然中性蛋白酶。以上所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其进一步优选的技术方案是：所述酶解条件为：pH为8.0，温度40℃，酶解时间为6h，酶与底物配比为1000U/g。以上所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其进一步优选的技术方案是：所述分离纯化的手段包括超滤、SDS-PAGE蛋白胶、SephadexG-25离子交换色谱。以上所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其进一步优选的技术方案是：所述分离纯化的具体步骤为：（1）酶解产物首先利用分子量截留范围为3KDa和10KDa的超滤膜对酶解产物进行超滤分离，将其分为3个分子量范围不同的组分，分别为分子量大于10KDa的组分、分子量介于3KDa和10KDa的组分、分子量小于3KDa的组分；（2）收集具有最佳抗氧化活性的组分，再用SephadexG-25离子交换色谱进行分离，以纯水为洗脱液进行洗脱，流速为0.8ml/min－1.0ml/min，280nm检测吸收峰，测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性；得到含有抗氧化活性肽即亮胱赖肽。以上所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其进一步优选的技术方案是：（1）糠虾蛋白的制备：将冷冻后的海洋糠虾放在4℃的冰箱解冻12h，然后以1:1的比例加入纯水，搅拌混匀后，用匀浆机进行组织匀浆破碎，将匀浆后的液体干燥机干燥后的到糠虾冻干粉，即糠虾蛋白；（2）糠虾蛋白的酶解：酶产自野生菌株枝芽孢杆菌ST-1（virgibacillushalodenitrificans）CGMCCNO.17006；酶解条件取pH为8.0、温度40℃、酶解时间为6h、酶与底物比为1000U/g，用1MHCl调节pH稳定，水解6h后，沸水浴中灭酶15min，然后迅速冷却至室温，置于离心机中，以5000r/min离心20min，取上清液备用；（3）酶解产物的分离、纯化：将得到的酶解产物利用分子量截留范围为3KDa和10KDa的超滤膜对酶解产物进行超滤分离，将其分为3个分子量范围不同的组分，分别为分子量大于10KDa的组分、分子量介于3KDa和10KDa的组分、分子量小于3KDa的组分；收集具有最佳抗氧化活性的组分，再用SephadexG-25离子交换色谱进行分离，以纯水为洗脱液进行洗脱，流速为1ml/min，在280nm下进行测量，测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性；利用蛋白质固相序列分析仪鉴定三肽的氨基酸序列，得到亮胱赖肽。本专利技术还公开了另一种抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其特点是，采用肽合成方法或者合成与修饰方法合成得到抗氧化活性亮胱赖肽；所述的合成或修饰方法包括但不限于：生物合成、化学合成、酶催化合成、连接，加成，耦连或者衍生。本专利技术亮胱赖肽的用途是：将亮胱赖肽作为有效成份在制备抗氧化剂中的应用。所述的抗氧化剂用于清除DPPH自由基、O2-自由基以及OH-自由基。用作食品抗氧化剂。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术是一种天然高效的抗氧化剂，以来自于海洋糠虾的虾蛋白为出发点，通过蛋白酶的切割条件控制，切割为具有特定的肽链长度和结构域组成的活性活性肽，而使抗氧化活性得以高效地实现。本专利技术改变了现有抗氧化剂的提取与运用的思路和方法，消除了人工合成抗氧化剂所可能引起的副作用，可以取代传统的合成食品抗氧化剂。2、本专利技术还改善了我国对水产蛋白利用率偏低的情况，既可解决大量水产资源的再利用问题，又能解除消费者对抗氧化剂的顾虑。附图说明图1为糠虾蛋白酶解物经超滤分离后的DPPH自由基的清除效果；图2为糠虾蛋白酶解物的SephadexG-25洗脱图；图3为SephadexG-25七个色谱分离组分对DPPH自由基的清除效果；图4为峰3的MS/MS;图5为峰3个肽段的抗氧化活性；图6为亮胱赖肽的纯度鉴定；图7为亮胱赖肽的DPPH清除活性；图8为亮胱赖肽的O2-清除活性；图9为亮胱赖肽的OH-清除活性。具体实施方式以下参照附图，进一步描述本专利技术的具体实施方式，以使本领域技术人员进一步地理解本专利技术，而不构成对本专利技术权利的限制。实施例1，亮胱赖肽的提取实验：具体步骤如下：(1)糠虾蛋白的制备本专利技术所采用的糠虾为海州湾海域捕捞所得。将冷冻后的海洋糠虾放在4℃的冰箱解冻12h，然后以1:1的比例加入纯水，搅拌混匀后，用匀浆机进行组织匀浆破碎，将匀浆后的液体干燥机干燥后的到糠虾冻干粉，即糠虾蛋白。(2)糠虾蛋白的酶解酶产自野生菌株枝芽孢杆菌ST-1（virgibacillushalodenitrificans）CGMCCNO.17006。采用天然蛋白酶本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗氧化亮胱赖肽，其特征在于：所述亮胱赖肽的氨基酸序列为Leu-Cys-Lys。/n
【技术特征摘要】
1.一种抗氧化亮胱赖肽，其特征在于：所述亮胱赖肽的氨基酸序列为Leu-Cys-Lys。
2.一种如权利要求1所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其特征在于：以海洋糠虾粉为原料提取蛋白，然后采用天然蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗氧化活性亮胱赖肽；酶解条件为：pH为5.0－8.0、温度20℃－40℃、酶解时间为2h－6h、酶-底物配比为800－1200U/g；酶为天然中性蛋白酶。
3.根据权利要求2所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其特征在于：所述酶解条件为：pH为8.0，温度40℃，酶解时间为6h，酶与底物配比为1000U/g。
4.根据权利要求2所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其特征在于：所述分离纯化的手段包括超滤、SDS-PAGE蛋白胶、SephadexG-25离子交换色谱。
5.根据权利要求2所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法：所述分离纯化的具体步骤为：
（1）酶解产物首先利用分子量截留范围为3KDa和10KDa的超滤膜对酶解产物进行超滤分离，将其分为3个分子量范围不同的组分，分别为分子量大于10KDa的组分、分子量介于3KDa和10KDa的组分、分子量小于3KDa的组分；
（2）收集具有最佳抗氧化活性的组分，再用SephadexG-25离子交换色谱进行分离，以纯水为洗脱液进行洗脱，流速为0.8ml/min－1.0ml/min，280nm检测吸收峰，测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性；得到含有抗氧化活性肽即亮胱赖肽。
6.根据权利要求2所述的抗氧化亮胱赖肽的制备方法，其特征在于：制备方法具体步骤如下：
（1）糠虾蛋白的制备：将冷冻后的海洋糠虾放在4℃的冰箱解冻12h，然后...
【专利技术属性】
技术研发人员：吕明生，刘雪芹，王淑军，胡经飞，魏桐，卢静，杨杰，徐淋香，
申请(专利权)人：江苏海洋大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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