一种花青素种类分析鉴定方法及定量检测方法技术

本发明专利技术涉及一种花青素种类分析鉴定方法，包括以下步骤：(1)分别对矢车菊色素、锦葵色素、飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素进行二级质谱分析，确定各自的典型碎片离子；所述典型碎片离子是通过解析碎片结构并结合离子丰度确定的；(2)将待测样品破碎，然后经过乙醇

【技术实现步骤摘要】
一种花青素种类分析鉴定方法及定量检测方法


[0001]本专利技术属于花青素分析
，具体涉及一种花青素种类分析鉴定方法及定量检测方法。

技术介绍

[0002]花青素是一类广泛存在于自然界中的植物源性色素，属于以2
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苯基苯并吡喃(C6
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C3
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C6)为母核的黄酮类化合物，其基本结构如下：
[0003][0004]由于R1和R2基团不同，花青素的种类不同，如表1所示。
[0005]表1花青素的种类
[0006]序号花色素R1R21天竺葵色素HH2飞燕草色素OHOH3矢车菊色素OHH4牵牛花色素OCH3OH5芍药色素OCH3H6锦葵色素OCH3OCH3[0007]当花色素A环3,5,7位上的羟基与糖糖苷基团结合时便形成花色苷。花青素在植物中多以花色苷的形式存在，结合糖的种类、数量、位置不同，形成的花色苷种类也不相同。母核结构上的酚羟基呈酸性和还原性，其吡喃环上共轭双键容易发生B
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环电子移位。大多数非酰化或单酰化的花色苷在溶液中存在着4种花色苷的平衡：醌型碱，黄烊盐阳离子假碱和查耳酮，酸、碱、氧化剂、光辐射等环境因子都可以与花青素分子作用发生醌型碱、假碱、查耳酮、加成、开环、水化等化学结构的改变。
[0008]目前，花青素定量方法，主要采用pH示差法和液相色谱的方法。
[0009]pH示差法是根据花青素在不同pH下特定波长下的吸收性，根据花青素单体的摩尔吸光系数计算；例如：公开号为CN107996908A的专利文献公开了pH示差法检测花青素含量；然而，pH示差法对于花青素检测只是一种粗略的定量方法，受限于计算公式中选取的哪种花青素单体的摩尔吸光系数，对计算结果影响很大。
[0010]液相色谱法是根据不同花青素标准品在色谱柱的分离特性，绘制标准曲线，来定量计算花青素的含量；例如：公开号为CN104764846B的专利文献公开了HPLC检测鉴定花青
素，但色谱分离过程花青素单体物质形成的色谱峰很容易受结构相同分子或基团的影响，且选用的标准品也仅仅是代表性的几种，并不能涵盖所有花青素种类，导致定量方法的准确性大打折扣。
[0011]因此，如何有效地鉴别花青素种类以及精确定量检测是本领域亟需解决的难题。

技术实现思路

[0012]基于现有技术中存在的上述缺点和不足，本专利技术提供一种花青素种类分析鉴定方法及定量检测方法。
[0013]为了达到上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0014]一种花青素种类分析鉴定方法，包括以下步骤：
[0015](1)分别对矢车菊色素、锦葵色素、飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素进行二级质谱分析，确定各自的典型碎片离子；所述典型碎片离子是通过解析碎片结构并结合离子丰度确定的；
[0016](2)将待测样品破碎，然后经过乙醇
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水的强酸溶液超声提取花色苷后，经沸水浴水解得到含花青素的待测液；
[0017](3)将含花青素的待测液过滤，对滤液进行二级质谱分析，将待测液中花青素分别与矢车菊色素、锦葵色素、飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素的典型碎片离子进行比对，以鉴定花青素的种类。
[0018]作为优选方案，所述矢车菊色素的二级质谱分析的条件为：
[0019]选取矢车菊色素的标准品，矢车菊色素单体离子的质核比为287，矢车菊色素单体离子在质谱正离子模式下，在28
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30eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为矢车菊色素的典型碎片离子。
[0020]作为优选方案，所述锦葵色素的二级质谱分析的条件为：
[0021]选取锦葵色素的标准品，锦葵色素单体离子的质核比为331，锦葵色素单体离子在质谱正离子模式下，在25
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30eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为锦葵色素的典型碎片离子。
[0022]作为优选方案，所述飞燕草色素的二级质谱分析的条件为：
[0023]选取飞燕草色素的标准品，飞燕草色素单体离子的质核比为303，飞燕草色素单体离子在质谱正离子模式下，在26
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30eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为飞燕草色素的典型碎片离子。
[0024]作为优选方案，所述矮牵牛色素的二级质谱分析的条件为：
[0025]选取矮牵牛色素的标准品，矮牵牛色素单体离子的质核比为317，矮牵牛色素单体离子在质谱正离子模式下，在25
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30eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为矮牵牛色素的典型碎片离子。
[0026]作为优选方案，所述芍药色素的二级质谱分析的条件为：
[0027]选取芍药色素的标准品，芍药色素单体离子的质核比为301，芍药色素单体离子在质谱正离子模式下，在22
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35eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为芍药色素的典型碎片离子。
[0028]作为优选方案，所述天竺葵色素的二级质谱分析的条件为：
[0029]选取天竺葵色素的标准品，天竺葵色素单体离子的质核比为271，天竺葵色素单体离子在质谱正离子模式下，在30
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40eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为天竺葵色素的典型碎片离子。
[0030]本专利技术还提供一种花青素的定量检测方法，包括以下步骤：
[0031](1)分别对矢车菊色素、锦葵色素、飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素进行二级质谱分析，确定各自的典型碎片离子；所述典型碎片离子是通过解析碎片结构并结合离子丰度确定的；
[0032](2)分别取矢车菊色素、锦葵色素、飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素的典型碎片离子中离子丰度最强的离子作为各自的定量离子，建立各种色素的不同浓度及其对应的定量离子的离子丰度之间的标准曲线；
[0033](3)将待测样品破碎，然后经过乙醇
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水的强酸溶液超声提取花色苷后，经沸水浴水解得到含花青素的待测液；
[0034](4)将含花青素的待测液进行液相色谱分离，然后进行多通路的质谱分析，得到对应于待测样品的典型碎片离子及定量离子的离子丰度；
[0035](5)将待测样品的典型碎片离子分别与矢车菊色素、锦葵色素、飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素的典型碎片离子进行比对，以鉴定花青素的种类；
[0036](6)将定量离子的离子丰度与对应的花青素种类的标准曲线进行匹配，得到相应的花青素的浓度。
[0037]作为优选方案，所述液相色谱分离的条件包括：
[0038]流动相A为0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种花青素种类分析鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)分别对矢车菊色素、锦葵色素、飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素进行二级质谱分析，确定各自的典型碎片离子；所述典型碎片离子是通过解析碎片结构并结合离子丰度确定的；(2)将待测样品破碎，然后经过乙醇
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水的强酸溶液超声提取花色苷后，经沸水浴水解得到含花青素的待测液；(3)将含花青素的待测液过滤，对滤液进行二级质谱分析，将待测液中花青素分别与矢车菊色素、锦葵色素、飞燕草色素、矮牵牛色素、芍药色素、天竺葵色素的典型碎片离子进行比对，以鉴定花青素的种类。2.根据权利要求1所述的一种花青素种类分析鉴定方法，其特征在于，所述矢车菊色素的二级质谱分析的条件为：选取矢车菊色素的标准品，矢车菊色素单体离子的质核比为287，矢车菊色素单体离子在质谱正离子模式下，在28
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30eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为矢车菊色素的典型碎片离子。3.根据权利要求1所述的一种花青素种类分析鉴定方法，其特征在于，所述锦葵色素的二级质谱分析的条件为：选取锦葵色素的标准品，锦葵色素单体离子的质核比为331，锦葵色素单体离子在质谱正离子模式下，在25
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30eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为锦葵色素的典型碎片离子。4.根据权利要求1所述的一种花青素种类分析鉴定方法，其特征在于，所述飞燕草色素的二级质谱分析的条件为：选取飞燕草色素的标准品，飞燕草色素单体离子的质核比为303，飞燕草色素单体离子在质谱正离子模式下，在26
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30eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为飞燕草色素的典型碎片离子。5.根据权利要求1所述的一种花青素种类分析鉴定方法，其特征在于，所述矮牵牛色素的二级质谱分析的条件为：选取矮牵牛色素的标准品，矮牵牛色素单体离子的质核比为317，矮牵牛色素单体离子在质谱正离子模式下，在25
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30eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析碎片结构并结合离子丰度，选取数个离子丰度强的碎片离子作为矮牵牛色素的典型碎片离子。6.根据权利要求1所述的一种花青素种类分析鉴定方法，其特征在于，所述芍药色素的二级质谱分析的条件为：选取芍药色素的标准品，芍药色素单体离子的质核比为301，芍药色素单体离子在质谱正离子模式下，在22
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35eV碰撞能量下，形成碎片离子；解析...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军波，刘超，任志灿，邹礼根，张乐，翁丽萍，姜慧燕，邱静，
申请(专利权)人：杭州市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：