猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的研制方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的研制方法，该二联灭活疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原是猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌；其中，所述疫苗佐剂为Montanide ISA 206佐剂；其中，所述疫苗中猪流行性腹泻病毒TCID

【技术实现步骤摘要】
猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的研制方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的研制方法。

技术介绍

[0002]猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种急性接触性肠道传染病，基本特征有呕吐、腹泻、食欲下降和脱水。猪流行性腹泻病毒主要通过被感染猪只排出的粪便或污染物经口途径自然感染，各种年龄猪均易感，尤以哺乳仔猪最为严重；是影响全球养猪业的重要病毒之一。该病感染目前还没有有效的治疗方法，主要是以疫苗免疫预防为主。
[0003]猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的一种小猪肠道传染病，其中以仔猪黄痢、仔猪白痢和小猪水肿病为常见临床病症，以及由其他病因继发大肠杆菌后产生腹泻等情况。仔猪黄痢主要表现为拉黄色或黄绿色稀粪，粪内含凝乳片和小气泡，腥臭；仔猪腹泻后迅速消瘦、脱水和死亡，死亡率可高达50%以上。仔猪白痢主要表现为拉白色、黄白色稀粪，干涸后为瓷白色，病猪的体温和食欲一般无明显变化，但可看到仔猪皮毛粗糙，发育迟缓，经治疗后绝大多数可恢复正常，死亡率较低。目前，国内尚无商品化的、具有较好的防疫效果的大肠杆菌疫苗或相关药物。
[0004]目前，市场上并没有有效的预防猪流行性腹泻病毒、致病性大肠杆菌二联灭活疫苗。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的研制方法，从而弥补现有技术的不足。
[0006]本专利技术的猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原是猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌。
[0007]进一步地，所述疫苗佐剂为Montanide ISA 206佐剂。
[0008]进一步地，所述疫苗中猪流行性腹泻病毒TCID
50
≥10
7.0 TCID
50
/ml，致病性大肠杆菌CFU≥2.5
×
10
9.0 CFU/mL。
[0009]进一步地，所述抗原与佐剂的体积比为1:1。
[0010]本专利技术的另一目的在于提供一种猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌（K88）二联灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：（1）制备猪流行性腹泻病毒液，制备致病性大肠杆菌菌液；（2）分别加入10%甲醛溶液，37℃灭活24小时，获得猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌灭活抗原；（3）取两种灭活菌液按照1:1的比例混匀，搅拌；（4）混合后的灭活菌液与疫苗佐剂按照体积比为1:1的比例混合、乳化即可制成二
联灭活疫苗。
[0011]本专利技术的有益效果：本专利技术的猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗免疫原性好，可一针防治两种疾病，在配种前进行免疫注射可使怀孕母猪所产仔猪获得较好的被动免疫，使仔猪产生较强的免疫力，能够抵抗强毒的攻击，提高仔猪的存活率；解决了目前市场上缺少有效的防治猪流行性腹泻病毒、致病性大肠杆菌所引发疾病联苗的问题。
附图说明
[0012]图1为本专利技术的实施例中致病性大肠杆菌攻毒保护试验仔猪存活情况示意图。
[0013]图2为本专利技术的实施例中猪流行性腹泻病毒攻毒保护试验仔猪存活情况示意图。
具体实施方式
[0014]为了能够更清楚地理解本专利技术的上述目的、特征和优点，下面结合附图和具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是，本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其他方式来实施，因此，本专利技术并不限于下面公开的具体实施例的限制。
[0015]1.灭活疫苗的制备与检验本专利技术的猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其中抗原是猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌；疫苗佐剂为Montanide ISA 206佐剂。
[0016]其中，所述疫苗中猪流行性腹泻病毒TCID
50
≥10
7.0 TCID
50
/ml，致病性大肠杆菌CFU≥2.5
×
10
9.0 CFU/mL。
[0017]该猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：（1）制备猪流行性腹泻病毒液，制备致病性大肠杆菌菌液；（2）分别加入10%甲醛溶液，37℃灭活24小时，获得猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌灭活抗原；（3）取两种灭活菌液按照1:1的比例混匀，搅拌；（4）混合后的灭活菌液与Montanide ISA 206佐剂按照体积比为1:1的比例混合、乳化即可制成二联灭活疫苗。
[0018]2.疫苗的效力试验2.1.材料与方法用产前30~45日龄妊娠母猪10头，随机分成2组，每组5头；第1组颈部肌肉注射二联灭活疫苗2ml/头，产前20日加强免疫1次，2ml/头，作为免疫组；第2组作为对照组。
[0019]致病性大肠杆菌攻毒保护试验生产的仔猪正常哺乳至6~12小时后，用免疫组10头仔猪同对照组10头仔猪一起，分别口服相应免疫疫苗型的攻毒菌株[购自中国兽医药品监察所]新鲜培养物5ml(含菌量为3～5
×
10
9.0 CFU/ml)，观察7天内攻毒仔猪和对照仔猪的致病性大肠杆菌性下痢的发生和致死情况。
[0020]猪流行性腹泻攻毒保护试验用免疫组10头仔猪同对照组10头仔猪一起口服猪流
行性腹泻强毒5ml，观察攻毒后仔猪的临床表现。
[0021]2.2.结果2.2.1.图1为本实施例中致病性大肠杆菌攻毒保护试验仔猪存活情况示意图。致病性大肠杆菌攻毒保护试验结果显示，与对照组相比，疫苗免疫母猪所产仔猪能够100%抵抗强毒菌液的攻击，没有出现死亡或者下痢。
[0022]2.2.2.图2为本实施例中猪流行性腹泻病毒攻毒保护试验仔猪存活情况示意图。猪流行性腹泻攻毒保护试验结果显示，与对照组相比，疫苗免疫母猪所产仔猪能够100%抵抗强毒株的攻击。
[0023]以上所述仅为本专利技术的优选实施例而已，并不用于限制本专利技术，对于本领域的技术人员来说，本专利技术可以有各种更改和变化。凡在本专利技术的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，包含有抗原和疫苗佐剂，其特征在于：所述抗原是猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌。2.根据权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，其特征在于：猪流行性腹泻病毒TCID
50
≥10
7.0 TCID
50
/ml，致病性大肠杆菌CFU≥2.5
×
10
9.0 CFU/mL。3.根据权利要求1所述的猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌二联灭活疫苗，其特征在于：疫苗佐剂为Mo...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖敏，任华，李桂明，刘德琴，花纪，
申请(专利权)人：江西正邦农业科学院，
类型：发明
国别省市：