使CAR T细胞恢复活力制造技术

本文中提供了与靶向配体缀合的药物载荷，其被专门设计成递送至耗竭的CAR T细胞以使这些CAR T细胞恢复活力。被靶向的CAR T细胞以融合受体进行修饰，所述融合受体可与所述靶向配体结合并且使所缀合的药物载荷内化，以执行其对耗竭的CAR T细胞的调节功能。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使CART细胞恢复活力
本公开内容提供了使癌抗原耗竭的嵌合抗原受体T(chimericantigenreceptorT，CART)细胞恢复活力(rejuvenate)的系统。具体地，所述系统在经典CAR构建体(construct)中包含融合受体，其中所述融合受体提供了配体结合模块(ligandbindingmodule)，其识别高亲和力配体-载荷药物缀合物(ligand-payloaddrugconjugate)以递送药物载荷，所述药物载荷被设计成阻断耗竭的CART中的抑制性信号传导或通过抗原非依赖性途径重新激活CART。
技术介绍
在过去的二十年中，嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗领域取得了巨大进步。CAR构建体由四个部分组成：(1)针对肿瘤特异性抗原的胞外结合部分，(2)铰链结构域，(3)跨膜结构域，以及(4)多种激活结构域(例如，CD28、4-1BB和CD3ζ链)的组合。在针对CD19阳性B细胞白血病的CART治疗中取得了最令人印象深刻的成功，其中在多项临床试验中已达到超过80％的完全缓解率。相比之下，迄今为止已证明通过CART治疗实体瘤更具挑战性。在临床前研究中，在免疫缺陷小鼠中使用同基因小鼠模型或异种移植肿瘤模型已经取得了巨大的成功。然而，涉及实体瘤(例如，乳腺癌、卵巢癌或肺癌)的临床试验均没有显示出与对照相比的改善。通常来说，其具有与其他过继细胞治疗所面临的相同局限性，包括(1)肿瘤穿透性差；(2)低氧压；(3)免疫抑制性肿瘤微环境，其包括肿瘤相关的巨噬细胞、成纤维细胞和抑制性细胞因子1。CART细胞与肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)一样，可以通过这种抑制性微环境再培养(re-educated)并转变为“功能低下”状态，其特征在于共抑制分子(即，PD-1、Tim-3、LAG-3等)的过表达、降低的INFγ分泌和杀伤能力。来自卵巢癌患者样品的数据显示，大多数PD-1+CD8+T细胞缺乏CD127的表达，已知CD127对于T细胞中的效应子-记忆的转变是重要的。LAG-3的过表达也与TCR特异性CD8+TIL的效应子功能负相关。此外，PD-1+LAG-3+双阳性T细胞表现出较低的INFγ产生2。类似地，NY-ESO-1TCR特异人T细胞在小鼠实体瘤模型中功能低下，表明由于微环境和通过持续暴露于抗原对T细胞的持续激活二者造成的共抑制分子的高表达和低效的抗肿瘤效果3。因此，为了更好的实体瘤治疗，非常期望逆转抑制性微环境，更重要的是，使耗竭的CART细胞恢复活力。专利技术概述本公开内容提供了使耗竭的经典CART细胞恢复活力的系统。所述系统包含至少两种组分：第一组分是包含与药物载荷共价连接的靶向配体的缀合物；并且第二组分是与膜锚定模块(membrane-anchoringmodule)连接的靶向配体结合模块。第二组分的靶向配体结合模块以高亲和力识别第一组分中的靶向配体以形成复合物，并且载荷药物阻断耗竭的CART的抑制性信号传导，或者通过抗原非依赖性途径重新激活所述CART。膜锚定模块介导该双组分复合物内化到耗竭的CART细胞中。在一些优选的实施方案中，前述第一组分的靶向配体是叶酸(folate)、FITC或FK506。在一些优选的实施方案中，前述第二组分的靶向配体结合模块包含叶酸受体、抗FITC抗体片段或FKBP。在一些优选的实施方案中，前述膜锚定模块是叶酸受体。在一些优选的实施方案中，前述第一组分包含在靶向配体与载荷药物之间的可释放的接头(linker)。在一些优选的实施方案中，前述第一组分包含在靶向配体与载荷药物之间的不可释放的接头。在一些优选的实施方案中，前述靶向配体与靶向配体结合模块之间的结合亲和力在亚纳摩范围(sub-nanomolarrange)内。在一些优选的实施方案中，前述药物载荷是Toll样受体7(TollLikeReceptor7，TLR7)激动剂或干扰素基因刺激物(Simulatorofinterferongenes，STING)激动剂。在一些优选的实施方案中，前述药物载荷是以下蛋白质的抑制剂：SHP1/2、TC-PTP或DGKα、TGFβ。在一些优选的实施方案中，前述TLR7激动剂具有以下结构：在一些优选的实施方案中，前述第一组分是具有以下结构的荧光素-TLR7激动剂：在一些优选的实施方案中，前述第一组分是具有以下结构的FK506-TLR7激动剂：在一些优选的实施方式中，前述第一组分是以下之一：在一些优选的实施方案中，前述第一组分包含选自以下TC-PTP磷酸酶抑制剂的载荷药物：在一些优选的实施方案中，前述磷酸酶抑制剂与荧光素或FK506(他克莫司)连接以形成以下结构：在一些优选的实施方案中，前述第一组分中的载荷药物包含以下结构之一的STING激动剂：在一些优选的实施方案中，前述第一组分在靶向配体与载荷药物之间包含间隔基(spacer)，所述间隔基选自以下结构：本公开内容还提供了使耗竭的CART细胞恢复活力的方法。所述方法包括以下步骤：a.向耗竭的CART细胞提供包含缀合物的第一组分，其中所述缀合物包含通过可释放或不可释放的接头与药物载荷共价连接的靶向配体；b.向所述耗竭的CART细胞提供包含与耗竭的CAR构建体连接的融合受体的第二组分，其中所述融合受体包含靶向配体结合模块和膜锚定模块；c.使第二组分的靶向配体结合模块与第一组分中的靶向配体结合以形成复合物；d.使膜锚定模块介导复合物向耗竭的CART细胞的内化；e.使载荷药物阻断耗竭的CART的抑制性信号传导或通过抗原非依赖性途径重新激活所述CART。在一些优选的实施方案中，前述方法携带在耗竭的CART的内体中执行其功能的载荷药物，并且靶向配体与载荷药物通过不可释放的接头连接。在一些优选的实施方案中，前述方法携带作为耗竭的CART的胞质溶胶中的游离药物执行其功能的载荷药物，并且靶向配体与载荷药物通过可释放的接头连接。在一些优选的实施方案中，前述方法中第一组分的靶向配体是叶酸、FITC或FK506。在一些优选的实施方案中，前述方法中第二组分的靶向配体结合模块是抗FITC、叶酸受体或FKBP。在一些优选的实施方案中，前述方法中第二组分的靶向配体结合模块是叶酸受体α(FRa)。在一些优选的实施方案中，前述方法中第一组分的药物载荷是Toll样受体7(TLR7)激动剂或干扰素基因刺激物(STING)激动剂。在一些优选的实施方案中，前述方法中第一组分的药物载荷是以下蛋白质的抑制剂：SHP1/2、TC-PTP或DGKα、TGFβ。在一些优选的实施方案中，前述方法中TLR7激动剂具有以下结构：在一些优选的实施方案中，前述方法中第一组分是具有以下结构的荧光素-TLR7激动剂：在一些优选的实施方案中，前述方法中第一组分是具有以下结构的FK506本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.使耗竭的经典CAR T细胞恢复活力的系统，其包含至少两种组分：第一组分是包含与载荷药物共价连接的靶向配体的缀合物；并且第二组分是与膜锚定模块连接的靶向配体结合模块，其中所述第二组分的所述靶向配体结合模块以高亲和力识别所述第一组分中的所述靶向配体以形成复合物，所述载荷药物阻断所述耗竭的经典CAR T的抑制性信号传导，或者通过抗原非依赖性途径重新激活所述CAR T，并且其中所述膜锚定模块介导该双组分复合物内化到所述耗竭的CAR T细胞中。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180807 US 62/715,6661.使耗竭的经典CART细胞恢复活力的系统，其包含至少两种组分：第一组分是包含与载荷药物共价连接的靶向配体的缀合物；并且第二组分是与膜锚定模块连接的靶向配体结合模块，其中所述第二组分的所述靶向配体结合模块以高亲和力识别所述第一组分中的所述靶向配体以形成复合物，所述载荷药物阻断所述耗竭的经典CART的抑制性信号传导，或者通过抗原非依赖性途径重新激活所述CART，并且其中所述膜锚定模块介导该双组分复合物内化到所述耗竭的CART细胞中。


2.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分的所述靶向配体是叶酸、FITC或FK506。


3.根据权利要求1所述的系统，其中所述第二组分的所述靶向配体结合模块包含抗FITC抗体片段或FKBP或叶酸受体。


4.根据权利要求1所述的系统，其中所述膜锚定模块是叶酸受体。


5.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分包含在所述靶向配体与所述载荷药物之间的可释放的接头。


6.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分包含在所述靶向配体与所述载荷药物之间的不可释放的接头。


7.根据权利要求1所述的系统，其中所述靶向配体与所述配体结合模块之间的结合亲和力在亚纳摩范围内。


8.根据权利要求1所述的系统，其中所述药物载荷是Toll样受体7(TLR7)激动剂或干扰素基因刺激物(STING)激动剂。


9.根据权利要求1所述的系统，其中所述药物载荷是以下蛋白质的抑制剂：SHP1/2、TC-PTP或DGKα、TGFβ。


10.根据权利要求8所述的系统，其中所述TLR7激动剂具有以下结构：





11.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分是具有以下结构的荧光素-TLR7激动剂：





12.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分是具有以下结构的FK506-TLR7激动剂：





13.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分是以下之一：





14.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分包含选自以下TC-PTP磷酸酶抑制剂的载荷药物：





15.根据权利要求14所述的系统，其中所述磷酸酶抑制剂与荧光素或FK506(他克莫司)连接以形成以下结构：





16.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分中的所述载荷药物包含以下结构之一的STING激动剂；





17.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一组分包含在所述靶向配体与所述载荷药物之间的间隔基，所述间隔基选自以下结构：





18.使耗竭的CART细胞恢复...

【专利技术属性】
技术研发人员：菲利普·斯图尔特·罗吾，张泊宁，约翰·V·拿破仑，
申请(专利权)人：普渡研究基金会，
类型：发明
国别省市：美国;US